仪器法血小板计数假性减少的相关性分析及对策

王宜海

(枣庄市立医院检验科，山东 枣庄 277102)

仪器法血小板计数假性减少的相关性分析及对策

王宜海

(枣庄市立医院检验科，山东 枣庄 277102)

目的探讨仪器法检测血小板减少患者，血小板计数数据的准确性、影响因素和解决方法。方法对530例仪器法血小板减少患者标本，进行血涂片染色镜检分析，并手工计数复检。结果530例标本其中有55例假性血小板减少，原因分为采集因素、EDTA依赖因数、大血小板因素、小血小板因素、其他因素。475例真性血小板减少。结论对于仪器法血小板减少或仪器提示异常的患者标本需经血涂片观察和人工复检方能发布结果，以提高血小板计数准确性，减少误诊。

仪器法；血小板计数；假性减少；对策

血细胞分析仪测定血小板，具有快速、方便、重复性好、准确性高、能同时提供血小板多项指标，是目前常规筛检血小板计数主要方法。但是，血小板计数结果有时会出现假性减少，所致原因复杂，易造成误诊、误治，应引起医务工作者广泛关注。现将我院仪器法检测530例血小板减少患者，进行涂片及手工计数分析情况报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般材料：随机选取2012年3月至2013年2月期间仪器法检测PLT＜100×109/L住院患者530例标本。男229例，女301例，年龄范围8～89岁。其中血液科142例，骨科43例，呼吸科62例，心血管51例，妇科71例，肿瘤科72例，儿科18例、神经科35例、其他科室36例。

1.2 仪器与试剂：xE-2100全自动血细胞分析仪，原装配套试剂，校准物和质控物由日本sysmex公司提供。Olympus双筒显微镜购自日本奥林巴斯光学工业株式会社，用于血涂片显微镜检查。草酸铵稀释液（按照第3版《全国临床检验操作规程》[1]配制）；刘氏染色液（郑州贝索医用仪器有限公司）

1.3 采血管：①A管：EDTA-K2抗凝管；②B管：109 mmol/L枸橼酸钠抗凝管。

1.4 方法

1.4.1 人员培训：根据《全国临床检验操作规程》[1]《血小板参考方法》[2]中制定的血涂片检测操作程序（SOP），对参加实验的人员进行培训，研讨可能出现的问题和解决的措施。

1.4.2 对530例血小板减少的血常规标本（EDTA-K2抗凝），同时进行外周血片复检，相符合的标本475例；剩余55例为假性血小板减少标本，作为实验样本。其测定值作为第一次测定值列入结果统计。

1.4.3 对55例假性血小板减少患者重新采血，分别注入A管和B管，各2 mL，充分混匀，室温放置；同时取未抗凝血20 µL加入含0.38 mL草酸铵稀释液的试管中，严格按照第3版《全国临床检验操作规程》[1]进行人工显微镜血小板计数，每个标本由经验丰富的检验师计数2次，误差＜10%，取2次均值报告，误差＞10%需做第3次计数，取2次相近结果的均值作为实验数据；同时将A管和B管的抗凝血，分别制备血涂片，经刘氏染色，显微镜下观察血小板数量（正常可见8～15个/油镜视野），根据A、B两管外周血片中有无聚集的血小板、血小板卫星现象、血小板大小分布以及血标本有无黄疸脂血等，将55例假性血小板减少标本分为5组：①采血不当因素：A管和B管抗凝血血片中均无凝集血小板、血小板散在分布、大小较为均一，标本无黄疽、脂血等异常，而重抽血前的第一次抗凝血片中有聚集的血小板；②EDTA依赖性凝集：A管血片中有大量血小板聚集，一般为8～20个血小板聚集成堆，而与之相对应的B管血涂片则无聚集血小板，血小板呈散在分布；③大血小板组：A管和B管抗凝血片中均无凝集的血小板、以大血小板为主；④小血小板组：A管和B管抗凝血片中均无凝集的血小板、以小血小板为主；⑤其他因素：A管和B管抗凝血片中均无凝集的血小板，标本有黄疸、脂血等异常变化。EDTA依赖性凝集组，对B管血进行上机检测，其余组对A管血进行上机检测，且检测的结果作为第二次测定值进行统计。

表1 55例重新抽血前后2次仪器检测血小板值与人工显微镜计数值

表1 55例重新抽血前后2次仪器检测血小板值与人工显微镜计数值

备注：**和*与△比较：P＜0.01；**与*比较：P＞0.05。▲和#与##比较：P＜0.01；▲与#比较：P＞0.05

1.5 统计学分析：数据处理应用SPSSl2.0软件进行数据分析，数据以均数±标准差表示，采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

55例重新抽血前后2次仪器检测血小板值与人工显微镜计数值见表1。

3 讨 论

3.1 采血不当因素是造成假性血小板减少的最常见的因素，占49.09%。原因：①采血技术不熟练：血流不畅可导致血小板破坏；且会因多次穿刺组织损伤，组织凝血因子混入血标本中产生肉眼看不见的小凝块[3]。②抽血后的处理不当：没能充分的颠倒混匀，抗凝剂没有充分发挥抗凝作用，导致血小板凝集，造成血小板假性减少[4]。因此检验人员或护士应掌握采集标本注意事项，充分认识实验分析前质量控制的重要性，增强责任心，提高采血技术。

3.2 EDTA抗凝剂依赖因素占29.09%。①EDTA依赖性血小板减少症（EDP）是由于EDTA盐抗凝血中EDTA诱导血小板中的特殊蛋白而使血小板发生凝集，在全自动血细胞计数仪上检测时，血小板计数发生假性减少的现象。原因：a.EDTA-K2可使血液发生免疫介导，产生冷抗血小板抗体，使血小板互相发生凝集现象，这种EDTA依赖的冷抗血小板自身抗体还能直接作用于血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa上，同时这种与血小板结合后的自身抗Fc端又可与淋巴细胞或单核细胞膜上Fc受体结合，出现卫星现象。b.EDTA-K2可导致血小板活化，使血小板形态发生改变，导致血小板膜表面某种隐匿性抗原表位发生构象改变，这些活化的血小板与血浆中的自身抗体结合后，激活了细胞膜中的某些能活化血小板纤维蛋白的原受体的活性物质，促使血小板与纤维蛋白原聚集成团。这两种原因在表象上都表现为血小板的体积增大。由于EDTA-K2可引起血小板的聚集或发生卫星现象，分析仪不能识别凝集的血小板，导致血小板计数偏低；当血小板聚集成堆与白细胞体积接近时，可被分析仪当作白细胞进行计数，这就造成了血小板假性减少和和白细胞假性增多。这种假性血小板减少会导致临床无故增加其他不必要的辅助检查，甚至引起临床误诊、误治。因此，这种EDTA依赖性血小板减少症应该受到广泛重视。解决这种EDTA所致的假性血小板减少的办法是采用不含抗凝剂的稀释液或利用含枸橼酸钠抗凝剂的真空采血管采集标本，避免这种血小板凝集而导致的血小板假性减少。②与白细胞周围的血小板卫星现象有关的假性血小板减少。血小板卫星现象是发生在EDTA抗凝血中的一种体外现象，这种现象是血小板黏附、围绕于中性粒细胞的现象。当血小板卫星现象发生时，血小板计数有中度减少[（50～100）×109/L]，导致在某些病例中血小板假性减少[5]。在EDTA的血样本中，除成熟中性多核细胞周围的玫瑰状凝集物外，还可见到成熟中性多核细胞和单核细胞周围的血小板卫星现象。

3.3 血小板体积因素占18.18%。血细胞分析仪检测血小板的原理为电阻抗原理。其进行血小板计数时，血小板阈值是设定在2～30 fL范围内，而正常的血小板多集中在3～20 fL范围[6]。因此，当血小板体积＞30 fL时，血小板会被仪器误认为小红细胞而不纳入血小板计数范围，而当作小红细胞计数，引起血小板假性减少；当血小板体积＜2 fL时，仪器会把它当作实验噪音不进行计数，从而使血小板计数偏低，出现假性血小板减少现象[7]。对于此类情况必须进行外周血片染色镜检和手工显微镜计数血小板，保证检查结果的准确性。

3.4 其他原因所致的假性血小板减少占3.64%。高胆固醇和高三酰甘油血症时，低密度脂蛋白和载脂蛋白可促进血液高凝状态，血小板凝集性增高，部分患者可引起假性血小板减少；糖尿病、高血压患者血管内皮损伤，致血小板容易凝集不容易解散，常导致机测血小板偏低[8]。另外冷凝集性、高镁血症、药物诱发的假性血小板减少偶有发生，也应引起重视。

总之，造成假性血小板减少症的原因复杂，如遇有静脉抗凝血检测血小板显著减少，而临床检查又无淤点、淤斑等血小板减少症的临床表现时，即应外周血片染色镜检，并用人工血小板计数作对照，以获得准确的实验数据，力求为临床医师和患者提供最准确、最可靠的信息，以避免假性血小板减少所致的误诊、误治。

[1] 叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].3版.南京:东南大学出版社,2006.

[2] 华人民共和国卫生部.中华人民共和国卫生部行业标准:白细胞分类计数参考方法[M].北京:人民卫生出版社,2005.

[3] 魏青颅克曼血细胞分析仪检测假性血小板减少的原因分析[J].中华临床医学志,2007,13(12):1751.

[4] 鲁家才,李明.血细胞分析时假性血小板减少原因分析[J].国外医学临床生物化学与检验学分册,2004,25(3):284-285.

[5] Zandecki M,Genevieve F,Gerard J,et al.Spurious counts and spurious results on haematology analysers:a review.Part I: platelets[J].Int J Lab Hematol,2007,29(1):4-20.

[6] 巫小莉,周小棉,邓穗德,等.EDTA抗凝剂依赖性假性血小板减少症血小板计数的研究[J].实用医学杂志,2007,23(4):578-580.

[7] Zandeeki M,Genevieve F,Gerard J,et a1.Spurious counts and spurious results on haematology analyserst areview.Partl:platelets[J]. Int J Lab Hematol,2007,29(1):4-20.

[8] 鲁家才,享明.血细胞分析时假性血小板减少原因分析[J].国外医学临床生物化学与检验学分册,2004,25(1):284-285.

Analysis and Countermeasures of Reducing Platelet Count by Pseudo Correlation Instrument

WANG Yi-hai
(Department of Clinical Laboratory, Zaozhuang Municipal Hospital, Zaozhuang 277102, China)

ObjectiveTo explore the method of detection instrument in patients with thrombocytopenia, platelet count data accuracy, influence factors and solving methods.Methods530 cases of blood platelet decrease patient specimens, were stained blood smear microscopy analysis, and manual counting inspection.Results530 cases of specimens from which there were 55 cases of thrombocytopenia, reasons for acquisition factors, EDTA dependent factor, platelet factor, small platelet factors, other factors. 475 cases of true thrombocytopenia.ConclusionThe blood platelet decrease or instrument tips in patients with abnormal blood smear specimens were observed and artificial re-inspection can publish the results, in order to improve the accuracy of platelet count, reduce misdiagnosis.

Instrument method; Platelet count; The pseudo reduced; Countermeasure

R446.11

B

1671-8194（2014）29-0048-02