张仁贵 张思露
摘要 [目的]研究花叶玉簪的组培技术。[方法]以花叶玉簪为研究对象,采用浓度75%的酒精進行消毒,并以MS为基本培养基,添加不同浓度植物生长调节剂6BA和NAA进行增殖培养和生根培养,观察生长状况。[结果]MS+4.0 mg/L 6BA +0.1 mg/L NAA增殖效果最好,苗生长健壮。最佳生根培养基为:1/2MS+ 0.1 mg/L NAA+0.3%活性炭;20 d后平均根长可达3 cm,且根系比较粗壮,移栽后易成活。幼苗移栽时以蛭石
∶珍珠岩(5∶1,W/W)、泥炭土∶珍珠岩∶蛭石(3∶1∶1,W/W/W)或腐叶土∶蛭石(3∶1,W/W)的成活率较高,小苗生长健壮。[结论]采用组培方法繁殖花叶玉簪,虽然具有繁殖系数高,时间短等优点。
关键词 花叶玉簪(Hosta undulata Bailey);外植体;培养基;组培技术
中图分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2014)05-01302-02
Abstract [Objective] To study tissue culture of Hosta undulate. [Method] With H. undulate as study object, using 75% alcohol to conduct disinfection. With MS as basic culture medium, different concentration plant growth regulator 6BA and NAA were added to conduct proliferation and rooting culture. [Result] MS+4.0 mg/L 6BA +0.1 mg/L NAA has the best proliferation effect. The optimum rooting culture medium is 1/2MS+ 0.1 mg/L NAA+0.3% activated carbon; after 20 d, the average root length can up to 3 cm with stronger root system. The survival rate of vermiculite∶ pearlite (5∶1, W/W), peat soil∶ pearlite∶ vermiculite (3∶1∶1, W/W/W) or rotten leaf soil∶ vermiculite (3∶1, W/W) is higher. [Conclusion] Adopting tissue culture for Hosta undulate has advantages of high propagation coefficient and short time.
Key words Hosta undulata Bailey; Explant; Medium; Tissue culture technology
花叶玉簪(Hosta undulata Bailey)为百合科(Liliaceae)宿根草本花卉,是近几年从国外引进的玉簪新品种。玉簪耐旱、耐寒且喜阴,常栽培于林下或建筑物北侧,以提升园林工程的观赏效果,是重要的观叶、观花的园林地被植物。除观赏外,其花含芳香油,可提取制作芳香浸膏。此外,花叶玉簪还有清热解毒、消毒止血、预防疾病和养生延寿等多种功效,是极具开发前景的药用、绿化配景用植物。
花叶玉簪的繁殖方式有种子繁殖、分株繁殖和组织培养繁殖3种。玉簪从播种到开花至少需要3年,且种子繁殖的后代一般不能保持亲本的优良性状,因此生产中一般不用种子繁殖。分株繁殖不仅需要大片的土地栽培母株,而且繁殖系数低,周期长。采用组培方式繁殖不仅可以快速繁殖种苗,达到推广新品种的目的,还能节约耕地,在短时间内实现经济价值。笔者对花叶玉簪的组培技术进行研究,以期为花叶玉簪的种质栽培提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1
研究对象。金边玉簪和银边玉簪,由苏州农学院相城科技园组培室提供,经鉴定为百合科(Liliaceae)宿根草本花卉。
1.1.2
主要试剂。所用试剂均为国产分析纯,市售。
1.2 方法
1.2.1
花叶玉簪外植体的采集。选择健壮,无病虫害,具有繁殖品种典型性状的花叶玉簪植株,取其植株基部当年生的芽作为外植体。2、3月份是取材的最佳季节,春季是玉簪生长开始的季节,此时体内积累了较丰富的的营养物质和内源激素,接种后启动率高,而且污染率较低。晴天上午9~10点是最佳取材时间。
1.2.2
外植体的处理及消毒。将外植体表面的泥土等杂质清洗干净,并去除外部多余的叶片和根系,然后添加洗衣粉振荡清洗,再用自来水冲洗2~3遍,最后用流水冲洗1 h。将初步洗涤及切割的外植体放入烧杯,带入超净工作台进行消毒处理。具体步骤如下:将处理过的外植体放入灭过菌的空瓶子中,然后用浓度为75%的酒精溶液浸泡1 min,再用无菌水冲洗2次,接着用浓度为0.1%的升汞溶液浸泡15~20 min,最后用无菌水清洗3~5次,每次5 min。注意浸泡过程中用无菌镊子不断搅动,以去除残留在外植体上的升汞。再用滤纸吸干水分,以备接种。在试验中对升汞的消毒时间对污染率的影响进行对比试验。
1.2.3
培养基的制备。试验采用的培养方式为固体培养,所用的基本培养基为MS,植物生长调节剂为6BA和NAA,附加琼脂粉8 g/L,蔗糖30 g/L。培养基采用200 ml的小口瓶分装,每瓶分装50 ml。
1.2.4
培养条件。温度为(26±1)℃;光照為12 h/d;光照强度为2 500 lx;pH 5.8~6.0。用灭过菌的手术刀横切去除上部叶片,留约0.5 cm长,再将幼芽外部叶柄剥去,然后将其切成0.25 cm长,最后将其正向插入MS+4.0 mg/L 6BA+0.1~0.2 mg/L NAA诱导培养基中,每瓶接种1~2个外植体。
1.2.5
增殖培养。将初代得到的无菌苗,分别接种到几种不同的培养基中,重点研究不同生长调节剂浓度配比对玉簪芽增殖的影响,以选择出芽增殖效果最佳培养基。计算公式为:芽增殖系数=培养后芽数/接种时芽数。
1.2.6
生根培养。取生长健壮的苗接种于3种不同浓度NAA的生根培养基中,研究不同浓度的NAA对苗生根情况的影响。
2 结果与分析
2.1 升汞的不同消毒时间对污染率的影响
由表1可知,升汞的消毒时间并不是越长越好,只有最适宜的消毒时间才能取得最佳的消毒效果。
2.2 芽的增殖试验
由表2可知, 随着6BA浓度的增加对芽的增殖有一定的促进作用,但增至5 mg/L时则会抑制芽的增殖,且苗的生长状态开始恶化。综合可得,MS+4.0 mg/L 6BA+0.1 mg/L NAA增殖效果最好,苗生长健壮。增殖培养中,接种于较低浓度6BA和NAA配合使用的培养基中的幼苗,也出现了生根的现象。可见较低浓度的6BA对苗的生根并没有抑制作用,NAA在生根培养中起着关键作用。
2.4 驯化与移栽
当生根幼苗长度达4~7 cm的时候则可移栽,移栽前应先将其移至常温下适应3~5 d,然后打开盖子再适应2~3 d,之后用镊子或手指去除组培苗根部的基质,用消毒水漂洗干净,并去除无根,无心叶,畸形的苗,最后将洗好的苗摊放在苗床上以备移栽。
移栽应在3~6月和9~11月为宜,移栽的基质以蛭石∶珍珠岩(5∶1,W/W)、泥炭土∶珍珠岩∶蛭石(3∶1∶1,W/W/W)或腐叶土∶蛭石(3∶1,W/W)为好,移栽时用筷子等工具在穴盘上插孔,然后将苗的根系放入孔中覆土压实。注意要浅栽,根系舒展,心叶要露于基质之上,移栽后浇水,水量以使基质充分湿润即可。
3 结论与讨论
综合以上分析可知,采用组培方法繁殖花叶玉簪,虽然具有繁殖系数高,时间短等优点,但也存在着污染严重,品种退化等问题。因此,在组培过程中,既要保证接种材料、培养基的无菌,接种室和培养室环境的良好,同时在操作过程中要时刻加强操作者的“无菌”意识。
试验以花叶玉簪的芽为外植体进行诱导,诱导出的丛生芽几乎没有发生变异。以花序做外植体具有消毒容易,污染率低的优点,但再生出的芽会发生性状分离,不能够保持其母本的优良特性。所以,花叶玉簪组培快繁时最好采用芽作为外植体。试验结果表明,MS+4.0 mg/L 6BA+0.1 mg/L NAA是最适宜芽增殖的培养基;1/2MS+0.1 mg/L NAA+0.3%活性炭是较好的生根培养基。幼苗移栽时以蛭石∶珍珠岩(5∶1,W/W)、泥炭土∶珍珠岩∶蛭石(3∶1∶1,W/W/W)或腐叶土∶蛭石(3∶1,W/W)的成活率较高,小苗生长健壮。
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