大连樱桃根际寄生线虫种类的调查与鉴定

江晓帆　董春华　马骏　邱驰　李鑫

摘要[目的] 对大连樱桃土壤根际线虫的种类进行调查与鉴定。[方法] 在2011年6月至2013年6月，对大连市樱桃根际土壤线虫进行了广泛的调查和采样。[结果] 从所采集的80份樱桃根际土壤样品中根据测量数据和形态特征，共分离和鉴定出植物寄生线虫8属8个种，分别为畸形小环线虫（Criconemella informis）、突出针线虫（Paratylenchus projectus）、斯氏短体线虫（Pratylenchus scribneri）、活泼平滑垫刃线虫 （Psilenchus hilarulu）、大盾片盾线虫（Scutellonema megascutum）、拟盘旋属线虫（Pararotylenchus sp.）、燕麦真滑刃线虫（Aphelenchus avenae）、哈克滑刃线虫（Aphelenchoides haguei），其中畸形小环线虫（Criconemella informis）、斯氏短体线虫（Pratylenchus scribneri）、活泼平滑垫刃线虫（Psilenchus hilarulu）、大盾片盾线虫（Scutellonema megascutum）、拟盘旋属线虫（Pararotylenchus sp.）、哈克滑刃线虫（Aphelenchoides haguei）为大樱桃上的新纪录种。[结论] 初步明确了大连地区樱桃根际线虫的种类。

关键词樱桃；线虫；鉴定

中图分类号S432.4+5文献标识码A文章编号0517-6611（2014）09-02600-02

作者简介江晓帆（1981- ），男，辽宁抚顺人，从事植物保护研究。

樱桃寄生性线虫种类较多，分布较广，给樱桃生产带来巨大损失。大连地区临海环山，昼夜温差大，其地理位置和气候条件成为我国乃至世界樱桃最佳栽植区之一，所产樱桃被消费者誉为“天下奇果”，樱桃品质和口味都优于其他地区。国内关于樱桃寄生性线虫的报道较少，因此，笔者对大连樱桃土壤根际线虫的种类进行了初步研究，为进一步研究寄生线虫给樱桃生产带来的危害提供理论依据，也为丰富线虫资源的进一步研究提供部分理论数据。

1材料与方法

1.1土壤的采集2011年6月～2013年6月，从大连市各地区樱桃园采集根际土壤80份。先用铁铲除去根围3～5 cm的表土和其他杂物，然后在土表10～60 cm处取样300～500 g，装入塑料袋，封好后带回实验室。

1.2线虫的分离与鉴定采用淘洗-过筛-重糖离心分离法：将采集到的根际土壤倒入大型容器中，加水约2 000 ml，充分搅拌，静置2～3 min后，将上清液倒入4080425目的组筛中，使其依次通过40、80和425目网筛，再用喷头轻淋洗组筛，40目网筛可以除去植物的根系组织及土壤中的杂质，将根系等杂质冲掉，轻冲洗80目网筛使线虫充分进入425目网筛中，然后小心淋洗425目网筛中的残余物，使细小的土粒通过该网筛，425目网筛中收集的主要是各种线形线虫，翻转网筛，从网筛的背面用细水流将425目网筛中的残余物洗入烧杯中，然后将烧杯中的混合物倒入离心管内，平衡好后放入吊篮式低速离心机内，2 000 r/min离心2～4 min后，倒掉离心管内的上清液，线虫存留在管底的沉淀中，再注入比重1.18的蔗糖溶液混匀后，2 000 r/min离心2～4 min，线虫便分布于蔗糖溶液中，将含有线虫的蔗糖悬液缓慢倾入500目网筛中，用细水流淋洗线虫混合样到200 ml烧杯内，用20 ml水较适宜，也可转入试管中，饥饿几天后杀死、固定，显微镜下观察与测量，确定其属种[1-5]。

2结果与分析

在大连樱桃根际土壤中共鉴定出植物寄生线虫2目7科8属8种，并对分离到的每一种线虫进行了详细的测量、中文描述并列出其鉴别特征，鉴定结果分别为畸形小环线虫（Criconemella informis）、突出针线虫（Paratylenchus projectus）、斯氏短体线虫（Pratylenchus scribneri）、活泼平滑垫刃线虫 （Psilenchus hilarulu）、大盾片盾线虫（Scutellonema megascutum）、拟盘旋属线虫（Pararotylenchus sp.）、燕麦真滑刃线虫（Aphelenchus avenae）、哈克滑刃线虫（Aphelenchoides haguei）。

2.1畸形小环线虫（Criconemella informis （Micoletzky，1922）Luc & Raski，1981）[6]温和热杀死后虫体呈腊肠形，略向腹面弯曲，头尾两端略尖。体长为427.6～505.8 μm，体环数（R）为62～69条，体环较粗大，后翻明显，体中部体环宽7 μm左右。头环3条，不向后翻，唇盘小且略突出，头部骨化明显。口针长63.3～65.1 μm，锥体长47.7～52.7 μm，锥体占口针长度的比例为75.4%～81.0%，口针基球锚形，宽8.5～10 μm。食道为典型的环型食道，食道前体部与中食道球合并，中食道球发达，宽为18～22 μm，瓣门明显，长10～12 μm，峡部细而短，被神经环围绕，食道基球梨形，宽为11～14 μm，长为16～21 μm，与肠交界的贲门呈球突状，食道基球到头端的距离为116.1～126.8 μm，排泄孔位于食道基球后約2个体环处。肠道通常不清晰；阴门位于虫体后部，成熟雌虫阴门闭合，横裂，单生殖腺前伸，卵母细胞顶部双行排列，基部单行排列，阴门到尾端的体环数（RV）为4～5条；阴门后虫体圆锥形渐细，尾短，肛门到尾端的体环数（Ran）为2～3条，尾末端呈裂叶状或元宝形。

2.2突出针线虫 （Paratylenchus projectus Jenkins，1956）[6]温和热杀死后虫体前部较直，中后部向腹面弯曲呈敞开的“C”形，体长308.5～316.4 μm。体环细小，侧区有4条等距的侧线。头部缢缩明显，两侧向上逐渐倾斜变窄，至头端平截。口针长26.8～27.3 μm，口针基球半球形，两侧略尖。背食道腺开口到口针基球的距离（DGO）为5～8 μm。环型食道，食道前体部与中食道球合并；中食道球很发达，食道瓣门较大，位于中食道球的中央，骨化明显；峡部细，被神经环围绕；后食道腺圆形，与肠平截。排泄孔位于峡部以下，后食道腺偏上的位置，半月体位于排泄孔前1～3个体环处。成熟雌虫阴门处虫体常膨胀，有阴门侧膜，单生殖腺前伸，无后阴子宫囊，受精囊大，近圆形，卵母细胞顶部双行排列，基部单行排列。尾部向腹面弯曲，呈圆锥形，末端钝圆，通常尾末端背侧收缩成指状突。

2.3斯氏短体线虫（Pratylenchus scribneri Steiner，1943）[7]温和热杀死后虫体略向腹面弯曲或弯曲呈“C”型。虫体表皮纹细。侧区4条侧线，侧带光滑。唇区较低，稍缢缩，唇环2条，基环高于顶环，头架发达，深度骨化。口针较强壮，口针基球圆形。背食道腺开口距口针基部球2.5 μm左右。中食道球卵圆形，宽7.9～10.3 μm。食道腺从腹面长覆盖肠的前端，覆盖长度为18.4～25.7 μm。排泄孔位于食道与肠连接处的前方，半月体紧挨在排泄孔的前部，占2个体环左右。前生单卵巢，卵母细胞单行排列，增殖区有时双行排列，受精囊退化，卵圆形或近圆形，内部常无精子。后阴子宫囊较短，无细胞分化，长度短于阴门处虫体直径的1.5倍。尾圆锥形，尾纹18～24条，末端宽圆形，无环纹。侧尾腺孔位于尾的中前部，侧线不延伸到尾端。

2.4活泼平滑垫刃线虫（Psilenchus hilarulus de Man，1921）虫体细长，温和热杀死后虫体较直。虫体长853.6.1～960.3 μm，体表环纹细密。唇区较高，光滑，前端平圆，不缢缩。口针纤细，长13.7～14.3 μm，锥部长约为口针长的1/3，无口针基部球。背食道腺开口到口针基部球的距离为6～7 μm。食道前体部长筒形，中食道球卵圆形，位于食道中部稍后方，瓣门明显。狭部细长，后食道腺梨形，排泄孔位于食道腺前方，到头端的距离为97.1～105.2 μm。阴门横裂，略凹陷，双卵巢对伸，卵母细胞双行排列，受精囊长椭圆形，常充满精子。尾较长，环纹清晰，长133.2～144.5 μm，为肛门处虫体直径的9～10倍，尾末端膨大呈棍棒状。

2.5大盾片盾线虫（Scutellonema megascutum Peng & Siddiqi，1994）[8]虫体较大，温和热杀死后呈松散的螺旋形或“C”形；侧区4条侧线，在虫体前端和侧尾腺口盾片处网格化。唇区呈半球形，稍有缢缩，有4～5条唇环，头架高度骨化；口针发达，长度为26.4～29.2 μm；口针基球圆形，高3.5 μm；背食道腺开口距口针基球的距离为6.5～6.9 μm。中食道球圆形，排泄孔位于食道—肠瓣门稍后的位置；半月体位于排泄孔前3～5个体环处，2～3个体环长；食道腺从背面长覆盖肠。阴门凹陷，具有小阴门唇叶；卵母细胞单行排列，局部双行排列。侧尾腺孔盾片状，直径为5～6 μm，位于肛门后1～4个体环间；尾端阔圆形，长12.7～20.9 μm，腹面有9～12条环纹。

2.6拟盘旋属线虫（Pararotylenchus sp.）虫体较大，温和热杀死后虫体呈松散的“C”字形，侧区4条侧线。头部有环纹，略缢缩；口针发达，长29～31 μm，口针基球圆形，前端稍平；背食道腺开口距口针基球的距离为5.5～6.0 μm。中食道球明显，距前端91.2～99.8 μm；食道腺叶长梨形，基本不覆盖肠。双生殖腺对伸，有小阴门盖。侧尾腺孔小，孔状，位于肛门附近；尾略向腹面弯曲，末端较圆，尾长为18～20 μm，腹面有8～9条环纹，环纹清晰，尾末端环纹宽大。

2.7燕麦真滑刃线虫（Aphelenchus avenae Bastian，1865）[9-10]虫体经温和热杀死后较直或略向腹面弯曲。虫体圆筒形，两端稍变细，表皮环纹细。体中部侧区具有10～12条侧线。唇区较低，不缢缩，前端平圆。口针较长，长166～19.8 μm，口针前段稍短于后段，无口针基球。食道前体部圆筒形，中食道球较大，呈卵圆形，宽10～14.3 μm，长154～20.4 μm。食道狭部短，食道腺呈长叶状，从背侧覆盖肠，覆盖长度为体宽的2～3倍。神经环位于中食道球后约半个中食道球长度处，排泄孔位于中食道球后2/3～1个中食道球长度处。阴门位于虫体后部75%～79%处，阴道壁较厚，稍向前倾斜，阴门唇常突起。前生单卵巢，卵母细胞单行排列，部分双行排列。后阴子宫囊较长，长度约为阴门处虫体直径的2～4倍。肛门前唇突起。尾较短，呈圆筒形，末端宽圆形。

2.8哈克滑刃线虫（Aphelenchoides haguei Maslen，1979）温和热杀死后虫体略向腹面弯曲，体长为663.8～722.6 μm。体表环纹细密。唇区缢缩明显，前端平圆。口针长12.4～12.9 μm，口针基部球小。食道前体部呈细长的管状；中食道球卵圆形，13.8 μm～16.3 μm×10.6 μm～12.8 μm，瓣门位于中食道球的中央；峡部较短，食道腺长叶状，覆盖肠的背侧面。排泄孔位于中食道球后一个中食道球长度处，与神经环处于同一水平上。阴门横裂，阴门唇稍突起，阴道向前倾斜，长度约占阴门处虫体宽度的1/2，阴门位于虫体中后部70.1%～70.8%处。单卵巢前伸，卵母细胞单行排列。后阴子宫囊较长，呈囊袋状，为阴门处虫体直径的2～4倍。尾长圆锥形，长為41.6～43.7 μm，为肛门处虫体直径的3.3～3.9倍。尾末端变细，近腹面或尾尖中间具一短的尾尖突。

3结论与讨论