不同染色剂对SDS—PAGE染色体系的影响

林方养　杨耀东　万婕等

摘要[目的]研究不同染色剂对SDSPAGE染色体系的影响。[方法]通过SDSPAGE染色体系中不同考马斯亮蓝染料、染色方法和染色时间的比较，探讨适合油棕和椰子的最佳染色体系。[结果]改进后的方法染色效果好，较好脱色，凝胶背景清晰，容易分析蛋白含量较低的条带。染色时间短（2 h），条带较少，一些低丰度的蛋白条带未能清晰地显示出来，适当延长染色时间（6 h或过夜）效果较好。3种不同染料均能较好地对蛋白质条带染色，R350和R250相比G250效果稍好些，条带着色深，蛋白质含量低的细小条带也能较好的染色。[结论]SDSPAGE是开展蛋白质组学研究的关键技术，建立简易、稳定的染色方法具有重要意义。

关键词SDSPAGE；考马斯亮蓝；染色

中图分类号S188文献标识码A文章编号0517-6611（2014）09-02562-01

基金项目海南省自然科学基金（312039）。

作者简介林方养（1980-），男，海南文昌人，研究实习员，从事棕榈科植物栽培研究。*通讯作者。

SDS-PAGE是开展蛋白质组学研究的关键技术，人们对其染色方法的研究也较多，其中较为成熟的方法有银染法[1-2]和考马斯亮蓝法[3-8]。目前以考马斯亮蓝法染色最为常用，虽然其灵敏度不及银染法，但操作简单，可满足实验室常规染色的需要。考马斯亮蓝法用到的染料主要有R250和G250，现在市场上又推出了一种新的染料R350，但價格较高。试验以这3种染料为基础，通过比较不同染色方法和染色时间，探讨这3种染料的优缺点，以期为开展蛋白质组学研究提供关键技术。

1 材料与方法

1.1材料 分别以油棕和椰子的幼嫩叶片作为提取蛋白质的材料，采自中国热带农业科学院椰子研究所试验基地。

1.2蛋白质的提取与定量 参考王旭初的方法[9]。

1.3蛋白质SDSPAGE凝胶染色与脱 电泳结束后，将胶取下来切好，分别用不同的考马斯亮蓝染色，染色液配制方法和染色方法见表1和表2。染色-脱色步骤为：将切好的胶放入塑料盒中用蒸馏水（盖满凝胶即可）洗1～2遍，弃去蒸馏水，分别加入不同染色液置摇床上按相应染色时间慢速振荡染色，然后倒掉染色液，用蒸馏水洗1遍，最后加脱色液脱色。

2结果与分析

3 结论与讨论