离子色谱法测定丙戊酸钠片的含量

宋玉琴，赵昌军（淄博市食品药品检验所，山东 淄博 255086）

丙戊酸钠片为一线广谱抗癫痫药，主要用于单纯或复杂失神发作、肌阵挛发作、癫痫大发作的单药或合并用药治疗[1]。由于丙戊酸钠分子结构中不具有紫外吸收基团，因此，2010年版《中国药典》（二部）仍然采用双相酸碱滴定法对其进行含量测定[1]，但该方法专属性差，而且滴定过程中使用的乙醚危险性高、毒性大、污染环境。目前文献报道的含量测定方法还有高效液相色谱法[2]、柱前衍生高效液相色谱法[3]、原子吸收分光光度法[4]、气相色谱法[5]等。由于高效液相色谱法大多采用紫外末端吸收作为检测波长，因此基线平衡需要很长时间；而衍生化法操作烦琐，容易引入杂质或干扰峰，或使样品损失；原子吸收分光光度法仅能控制钠的含量，专属性差；气相色谱法样品前处理复杂，误差大，而且有机溶剂的使用还对环境造成一定的污染。离子色谱法作为一种环保的检测手段，适合检测能溶于水、并有一定离解度的化合物，不受被测组分是否具有光吸收特征的限制[6]。为此，笔者首次建立离子色谱-抑制电导检测法测定丙戊酸钠片的含量。

1 材料

1.1 仪器

ICS-2100型离子色谱仪，包括AS自动进样器、电导检测器、阴离子抑制器、自动淋洗液发生器、Chromeleon中文色谱工作站（美国戴安公司）；CP225D十万分之一天平（德国Sartorius公司）；超纯水仪（美国Millipore公司）。

1.2 药品与试剂

丙戊酸钠对照品（中国食品药品检定研究院，批号:100963-201302，纯度:99.0%）；丙戊酸钠片（湖南省湘中制药有限公司，批号:130126、130211、130915，规格:每片0.2 g）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

阴离子交换色谱柱:Ion Pac AS19（250 mm×4.0 mm，7.0 μm）；淋洗液:10 mmol/L KOH溶液；流速:1.0 ml/min；加水抑制模式，抑制电流:20 mA；电导池温度:35℃；柱温:30℃；进样量:25 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品贮备液。精密称取丙戊酸钠对照品103.40 mg，置于100 ml量瓶中，用超纯水溶解并稀释至刻度，摇匀。

2.2.2 对照品溶液。精密量取对照品贮备液1 ml，置于50 ml量瓶中，用超纯水稀释至刻度，摇匀。

2.2.3 供试品溶液。取本品20片，除去糖衣后，精密称定，研细；精密称取约相当于平均片质量的粉末，置于100 ml量瓶中，用超纯水溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤；精密量取续滤液1 ml，置于100 ml量瓶中，用超纯水溶解并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 空白溶液。精密称取约相当于平均片质量的空白辅料，置于100 ml量瓶中，用超纯水溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤；精密量取续滤液1 ml，置于100 ml量瓶中，用超纯水溶解并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。

2.3 系统适用性试验

取对照品溶液、供试品溶液、空白溶液，在上述色谱条件下进样。结果显示，丙戊酸根离子理论板数＞5000，与空白辅料峰分离度均＞1.5，表明空白辅料不干扰测定，色谱系统的专属性及系统适用性良好，色谱图见图1。

2.4 线性关系试验

精密量取对照品贮备液0.25、0.5、1.0、2.5、5.0 ml，分别置于50 ml量瓶中，用超纯水稀释至刻度，摇匀，作为系列对照品溶液，以系列对照品溶液质量浓度（x）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标，制作标准曲线。结果回归方程为y＝0.0343x－0.0184（r＝0.9999），表明丙戊酸钠检测质量浓度线性范围为5.118～102.4 μg/ml。

2.5 精密度试验

精密量取对照品溶液25 μl，连续进样6次，连续进样3 d，测得丙戊酸钠峰面积的RSD分别为0.4%（n＝6）、0.7%（n＝3），表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液（批号:130211），分别于0、2、4、6、8、12 h进样，记录色谱图，结果峰面积的RSD为0.5%（n＝6），表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.7 重复性试验

取同一批号样品（批号:130211）平行制备5份供试品溶液并测定，测得丙戊酸钠片含量的平均值为99.7%，RSD为0.6%（n＝5），表明本方法重复性良好。

2.8 回收率试验

图1 离子色谱图A.对照品溶液；B.供试品溶液；C.空白溶液；1.丙戊酸钠Fig 1 Ion chromatogramsA.reference solution；B.sample solution；C.blank solution；1.sodium valproate

精密称取已知含量的样品（批号:130211）约相当于1/20平均片质量的片粉6份，分别置于100 ml量瓶中，分别精密加入对照品贮备液10 ml，加超纯水溶解并稀释至刻度，摇匀；用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液进样，计算加样回收率，结果平均回收率为98.77%（RSD＝0.80%，n＝6），表明方法准确度好，见表1。

表1 回收率试验结果（n＝6）Tab 1 Results of recovery test（n＝6）

2.9 检测限和定量限试验

取对照品溶液，用超纯水稀释成一系列质量浓度递减的溶液，进样，记录色谱图。按信噪比等于3时测定检测限，测得丙戊酸钠的检测限为93 ng/ml；按信噪比等于10时测定定量限，测得定量限为307 ng/ml。

2.10 样品含量测定

取不同批号的样品，每批样品取3份，按照所建方法和《中国药典》的方法分别测定含量，同时采用SPSS10.0统计软件，对两种方法含量测定结果进行统计分析。结果P＝0.823（＞0.05），按照统计学上95%的置信度，两种方法含量测定结果差异无统计学意义，见表2。

表2 两种方法含量测定结果比较（%）Tab 2 Results of content determination by two method（s%）

3 讨论

3.1 方法和色谱柱的选择

离子色谱法具有快速方便、灵敏度高、选择性好[6]等优点，主要用于检测能溶于水并有一定离解度的化合物，可以弥补液相色谱、气相色谱法对离子型药物分析的不足。丙戊酸钠能溶于水，在强碱性条件下能够电离生成丙戊酸根离子，因此本文选用阴离子交换色谱柱进行分离。

3.2 淋洗液的选择

丙戊酸钠为弱酸盐，水溶液中离解度弱，在强碱性溶液中以阴离子形态存在，因此应选用较强的碱为淋洗液，而且对在阴离子交换色谱柱上弱保留的一元羧酸，可用淋洗强度弱的稀OH－[7]，因此，本文选用KOH溶液作为淋洗液。在筛选淋洗液浓度时，发现当KOH溶液浓度为40 mmol/L时，丙戊酸根离子出峰时间过快，与辅料峰无法分离，而且随着KOH溶液浓度的降低，丙戊酸根离子的出峰延长；但当KOH溶液浓度降低至10 mmol/L时，丙戊酸根与辅料峰达到基线分离，故选此作为淋洗液的浓度。

3.3 抑制电流的选择

抑制电流的作用是消除淋洗液背景电导的干扰，其选择原则为在保证灵敏度的前提下，尽量选择最小的抑制电流:抑制电流过大，被测物峰变小；抑制电流过小，背景电导干扰无法消除，基线噪音大，被测物峰也变小。笔者通过不断尝试，最终确定抑制电流为20 mA。

笔者建立的测定丙戊酸钠片含量的离子色谱法，与传统的双相酸碱滴定法相比，专属性强、工作环境清洁、灵敏度高、结果准确，可用于丙戊酸钠片的质量控制。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:二部[S].2010年版.北京:中国医药科技出版社，2010:75.

[2]周莉华，涂琼，梅步云.HPLC法测定人血清中丙戊酸钠的浓度[J].中国药房，2011，22（26）:2441.

[3]李顺炜，毛名扬，李国忠.改进的柱前衍生-高效液相色谱法测定人血中丙戊酸钠[J].中国医院药学杂志，2005，25（8）:713.

[4]李舸远，蔡美明，王玉.原子吸收光谱法测定丙戊酸钠缓释片中钠的含量[J].药学与临床研究，2010，18（6）:587.

[5]杨少芳，张华年，徐华.高效毛细管气相色谱法测定片剂中丙戊酸钠含量[J].中国医院药学杂志，2005，25（5）:434.

[6]刘英，李茜.离子色谱在抗生素药物分析中的应用[J].药物分析杂志，2012，32（1）:179.

[7]牟世芬，刘克纳.离子色谱方法及应用[M].北京:化学工业出版社，2000:87-88.