实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎小鼠模型的建立及观察

刘岚 许勇峰

实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎小鼠模型的建立及观察

刘岚 许勇峰

目的 研究实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎(EAU)的小鼠模型的发生规律及特征。方法 6~8周B10.RIII小鼠, 用人源性IRBP肽161-180与完全弗氏佐剂混合注射于小鼠建立模型。观察小鼠眼部表现, 小鼠眼球病理切片, 光镜观察记录不同时间点小鼠的炎症情况。结果 EAU小鼠视网膜炎症出现在第14~21天, 表现为结膜充血, 前房混浊, 虹膜后粘连, 眼底视网膜水肿充血。病理切片见玻璃体腔炎症细胞, 视网膜水肿, 各层结构紊乱, 炎症浸润, 血管周围炎, 网膜内肉芽肿等。结论 用IRBP161-180肽成功诱导B10.RIII鼠建立EAU模型, 为人类葡萄膜炎的研究奠定了良好的实验基础。

实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎；小鼠；IRBP肽

葡萄膜炎是一种累及葡萄膜、视网膜、视网膜血管及玻璃体的常见眼病, 其病程长, 治疗棘手, 在致盲眼病中有重要地位［1］。自身免疫性葡萄膜视网膜炎(EAU)的动物模型是研究葡萄膜炎的重要工具, 但国内动物模型主要建立在大鼠,本文以B10.RIII小鼠为动物, 通过免疫IRBP肽建立EAU小鼠模型, 通过临床表现、病理切片对其炎症程度进行观察分级, 为葡萄膜炎的研究奠定了基础。

1 材料与方法

1. 1 动物 B10.RIII实验小鼠6~8周龄, 体重18~24g。小鼠动物的实验操作符合动物伦理委员会的标准。

1. 2 EAU小鼠模型的建立与观察 人源性IRBP肽161-180由上海生物有限公司委托合成。IRBP肽与弗氏佐剂1:1混合,适龄B10.RIII小鼠麻醉后皮下注射, 并给予腹腔注射1.0 μg白喉毒素。对照组小鼠皮下注射磷酸缓冲溶液。

通过裂隙灯观察小鼠眼前节情况并予记录, 直接眼底镜观察眼后段情况。小鼠在免疫后处死, 取出眼球, 病理切片, H-E染色。参照Caspi.等［2］评分如下：0.5分, 局部单核细胞浸润至视网膜；1分, 单核细胞浸润至血管旁及玻璃体腔；2分, 视网膜内肉芽肿形成, 闭塞性血管炎伴视网膜脱离, 光感受器层丢失；3分, 以上伴视网膜色素上皮层内肉芽肿,视网膜下新生血管；4分, 3分的病变侵犯更深更广范围。

2 结果

2. 1 EAU的临床表现 建立EAU的小鼠表现为双眼结膜睫状充血, 角膜混浊水肿, 羊脂状KP形成, 前房混浊, 虹膜后粘连, 玻璃体混浊渗出, 眼底视网膜水肿, 血管充血, 黄白色渗出物。

2. 2 EAU的病理改变 正常小鼠玻璃体腔透明, 视网膜结构清晰, 排列规则。

EAU小鼠玻璃体腔大量炎症细胞及渗出, 视网膜水肿,各层结构紊乱, 视神经纤维层和视网膜节细胞层增厚, 见炎症细胞, 闭塞性血管周围炎, 层间可见肉芽肿形成, 部分见视网膜脱离, 视锥视杆层明显皱褶, 部分消失, 按上述标准给予评分。小鼠注射IRBP后, 通过病理切片记录炎症出现、高峰及消退的时间, 小鼠视网膜炎症出现第14~21天, 炎症5~6周开始消退。

3 讨论

葡萄膜炎为我国致盲眼病的防治重点, 但其发病机制仍不清楚。近年来葡萄膜炎的动物模型作为研究的重要组成部分得到重视。本文以B10.RIII小鼠为研究对象, 首次系统性研究了小鼠EAU模型的临床表现、发病时间和病理特征, 为葡萄膜炎研究奠定了良好的实验基础。

我国葡萄膜炎的模型多建立在大鼠上, 采用Lewis或Wistar大鼠, 用提取的S抗原免疫动物。大鼠模型发生时间早,炎症1~4 d达高峰, 6~9 d消退, 炎症程度重, 更趋向一种急性炎症反应［3］。而人类葡萄膜炎多为慢性, 具有明显的反复性。以往研究也用过猪、猴等动物, 但都与人类有较大差异,且遗传背景不清, 不能对其展开深入研究。

近交系小鼠是现在科研中最为常用的实验动物, 其遗传背景清楚, 相关实验资源丰富。小鼠EAU模型需具有一定遗传背景, 并非所有品系小鼠均可成功诱导。本研究中采用B10.RIII小鼠, IRBP肽诱导的葡萄膜炎发生时间晚, 持续时间较长, 病理表现光感受器层部分破坏, 这些特征均说明小鼠可更好地模拟人类葡萄膜炎的发生。且小鼠的实验资源丰富, 故小鼠EAU模型的建立为研究人类葡萄膜炎的奠定了良好的实验基础。

［1］ Sheu, S J. Update on uveomeningoencephalitides. Curr Opin Neurol, 2005,18(3):323-339.

［2］ Chan C C. Pathology of experimental autoimmune uveoretinitis in mice. J Autoimmun, 1990,3(3):247-255.

［3］ Wildner G M. Diedrichs-Mohring Thurau S R. Rat models of autoimmune uveitis. Ophthalmic Res, 2008,40(3-4):141-144.

浙江省教育厅资助科研项目(项目编号：Y201328272)

310003 浙江大学医学院附属第一医院眼科 (刘岚)；浙江大学医学院附属第二医院神经内科(许勇峰)