烧伤愈合膏水凝胶的制备及其指纹图谱研究*

徐彬，陈永刚，吴金虎，邹吉利

(1.武汉市第三医院药学部，武汉 430060;2.湖北中医药大学药学院，武汉 430065)

烧伤愈合膏水凝胶的制备及其指纹图谱研究*

徐彬1，2，陈永刚2，吴金虎2，邹吉利2

(1.武汉市第三医院药学部，武汉 430060;2.湖北中医药大学药学院，武汉 430065)

目的 制备烧伤愈合膏新剂型水凝胶,并建立水凝胶指纹图谱。方法提取烧伤愈合膏处方成分,利用黄蓍树胶粉制备成水凝胶,并采用Genimi-C18柱,以乙腈-0.01 moL·L-1乙酸铵溶液为流动相,检测波长:345 nm,对10批水凝胶样品溶液进行洗脱,建立指纹图谱。结果制备的水凝胶效果较好,建立了同一色谱条件下水凝胶的指纹图谱,且10批水凝胶的相似度均＞0.959 2。利用对照品比对出其中两个峰:盐酸小檗碱和盐酸巴马汀。结论制备的水凝胶在颜色、质地、气味、涂抹舒适度等方面均优于烧伤愈合膏,建立的水凝胶指纹图谱相似度高,适用于其质量控制。

烧伤愈合膏；水凝胶；色谱法,高效液相；指纹图谱

烧伤愈合膏系武汉市第三医院自主研制的系列烧伤制剂之一,主要由黄连、乳香、没药、冰片等药材粉末辅以羊毛脂、凡士林、石蜡油为基质制成的中药软膏剂。烧伤愈合膏治疗烧伤效果较好,但在使用过程中发现其在气味、均匀度、涂抹舒适度等方面存在缺陷,涂抹、清洗、换药较困难,包扎后气味难闻,给患者带来了很大痛苦。笔者参考文献[1-2],将烧伤愈合膏方中相关成分进行提取,并用黄蓍树胶粉混合提取液制备成水凝胶。水凝胶不仅在气味、质地、流动性、涂抹舒适度等方面有较大改观,其治疗烧伤的主要活性成分盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的含量也有较大提高。再利用高效液相色谱(HPLC)法[3-5]建立水凝胶复方指纹图谱,为提高该制剂的质量标准、新剂型的研制、二次研究开发及后期体内药效物质研究奠定基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津LC-20AT高效液相色谱仪(SPD-10A检测器,日本岛津公司),Sartorius BT-25S电子天平(德国赛得利斯公司),KQ-300E型超声仪(中国华南超声设备厂),HH-S2数显恒温水浴锅(上海亚荣生化仪器厂)。

1.2 试药 处方药材赤石脂、煅石膏、枯矾、炉甘石、乳香、没药、黄连、冰片、黄蓍树胶粉等由武汉市第三医院中药房提供,并经武汉市第三医院药学部吴金虎教授鉴定,药材均符合《中华人民共和国药典》规定;盐酸小檗碱对照品(中国食品药品检定研究院,批号: 110713-200911,供含量测定用);盐酸巴马汀对照品(中国食品药品检定研究院,批号:110732-201108,供含量测定用);乙腈,色谱纯,美国Tedia公司;水为超纯水,其余试剂均为分析纯;烧伤愈合膏(武汉市第三医院中药炮制室生产,批准文号:鄂药制字Z20082995);水凝胶(本实验室自制)。

2 方法与结果

2.1 水凝胶的制备

2.1.1 水凝胶空白基质的制备 参考黄蓍树胶粉使用说明书,黄蓍树胶粉5～8 g可与100 mL水形成凝胶,故分别称取黄蓍树胶粉3,4,5,6,7,8,9,10 g,分别加入适量水搅拌得到水凝胶100 g,比较水凝胶效果,发现黄蓍树胶粉6 g与水94 mL形成的凝胶质地均匀,流动性好。为方便实验和计算,以100 g水凝胶为单位。

2.1.2 全提取制备水凝胶 取原方各单味中药粉适量,过40目筛,提取成溶液,分别为:取黄连1.4 g,加0.5%硫酸溶液100 mL,煎煮30 min,过滤后浓缩至约40 mL;取乳香和没药各1.4 g混合,加入乙酸乙酯100 mL置挥发油提取器中提取2 h,提取的挥发油加入到10 mL乙醇中,再加入冰片1.1 g,混合均匀;将挥发油提取器中的药渣置于500 mL烧杯中,再分别加入煅石膏、炉甘石、赤石脂各11.1 g和枯矾1.1 g,加水300 mL,煎煮30 min,过滤后浓缩至约40 mL。将上述溶液混合均匀,并用水加至94 mL,用氨水调节pH至5～8,再与黄蓍树胶粉6 g混合,得到水凝胶100 g。

2.2 指纹图谱研究

2.2.1 色谱条件 色谱条件:Gemini-C18(250 mm× 4.68 mm,5 μm);流动相为乙腈(A)-0.01 mol·L-1乙酸铵水溶液(B)梯度洗脱,洗脱程序为:0～20 min,A相由24%增加至29%、流速0.6 mL·min-1;20～40 min,A相由29%增加至33%、流速0.8 mL·min-1,进样量25 μL。

2.2.2 溶液的制备 取盐酸小檗碱对照品适量,精密称定,置于10 mL量瓶,加甲醇至刻度得浓度0.360 mg·mL-1盐酸小檗碱对照品溶液;取盐酸巴马汀对照品适量,精密称定,置10 mL量瓶,加甲醇至刻度得到浓度为0.145 mg·mL-1的盐酸巴马汀对照品溶液。分别取适量盐酸小檗碱和盐酸巴马汀对照品溶液混合均匀,得到二者的混合对照品溶液。取水凝胶2 g及各单味药材适量,分别加入甲醇100 mL,超声提取30 min,冷却后过滤并用甲醇定容至100 mL量瓶,得水凝胶样品溶液和各单味药材提取液。

2.3 检测波长选择 分别在220,254,270,290,330, 345 nm处对整体图谱比较研究,发现345 nm处色谱峰峰形及分离度较好,故选择345 nm为检测波长。

2.4 指纹图谱的建立及其分析 将水凝胶样品溶液、盐酸小檗碱和盐酸巴马汀混合对照品溶液、各单味药材提取溶液分别进样,记录HPLC色谱图,见图1。方中乳香、没药和冰片所含成分均为挥发性成分,炉甘石、煅石膏等均为矿物质成分,都无紫外吸收,色谱峰主要来自于黄连。按样品溶液制备方法制备10批样品溶液,分别进样,进行分析和比较,共标定10个共有峰,结合盐酸小檗碱和盐酸巴马汀混合对照品可以确定9号峰为盐酸巴马汀,10号峰为盐酸小檗碱,见图2。10号峰与其他色谱峰分离良好,峰型稳定,以该峰为参照,以其保留时间和峰面积为1.0,计算10批次样品指纹峰的相对保留时间和相对峰面积,得到指纹图谱相对保留时间RSD为0.24%～3.08%,相对峰面积RSD为0.47%～4.21%,符合要求,见表1和表2。

图1 水凝胶样品、各单味药材及混合对照品HPLC图谱Fig.1 HPLC chromatograms of hydrogel,single medicine and hybrid reference substance

图2 10批水凝胶样品HPLC指纹图谱9.盐酸巴马汀;10.盐酸小檗碱Fig.2 HPLC fingerprints of ten batches of hydrogel samples9.palmatine chloride;10.berberine hydrochloride

2.5 相似度评价 将数据导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统matlab”软件进行处理,得到10批水凝胶样品共有峰的色谱图和相似度值,从计算结果和图谱可知,10批样品的相似度数值分别为0.983 7, 0.986 0,0.987 8,0.993 3,0.991 4,0.973 8,0.959 2, 0.994 1,0.987 3,0.990 5,相似程度高,表明不同批次样品之间差异较小。

2.6 水凝胶和烧伤愈合膏的比较 烧伤愈合膏100 g含有药材粉末27 g,水凝胶100 g选择药材粉末40 g作为其生药量,等量水凝胶含生药量比烧伤愈合膏高,因此其成分中具有清热解毒、杀菌抑菌作用的盐酸小檗碱和盐酸巴马汀含量也比烧伤愈合膏有明显提高,且水凝胶颜色、质地、均匀度、流动性、涂抹舒适度等均优于烧伤愈合膏。

表1 10批样品相对保留时间Tab.1 Relative retention time of ten batches of hydrogel samples min

表2 10批样品相对峰面积Tab.2 Relative peak area of ten batches of hydrogel samples %

3 讨论

盐酸小檗碱、盐酸巴马汀的提取方法,文献报道有超声提取法、索氏提取器提取法、温水浴加热再结合超声提取、盐酸甲醇连续回流提取等。笔者按上述方法进行考察。结果表明,甲醇作溶媒,超声提取30 min,即可完全提取。黄连提取有醇提、水提、抽提等方法,笔者在本实验中采用0.5%硫酸溶液煎煮提取30 min,提取效果好,再用氨水调节pH到5～8,有利于皮肤吸收。分别以乙腈-水、甲醇-乙酸、乙腈-乙酸铵溶液、乙腈-醋酸铵溶液、乙腈-醋酸为流动相对全提取水凝胶样品溶液进行梯度洗脱,发现乙腈-0.01 mol·L-1醋酸铵水溶液为流动相时出峰稳定,峰型好。烧伤愈合膏处方中大部分为矿物质成分,提取液并无紫外吸收,有紫外吸收的成分主要是黄连、乳香、没药、冰片。冰片、乳香、没药中主要为挥发性成分,在气相色谱中另行研究,故在本实验条件下指纹图谱峰主要来自于黄连。

笔者在本实验制备了烧伤愈合膏新剂型水凝胶,并利用HPLC-UV法对全提取水凝胶指纹图谱进行初步研究,确定主要峰的归属,为烧伤愈合膏新剂型研制、二次开发及其体内药效物质基础研究奠定了基础。

[1] 赵青青.聚合物水凝胶研究进展[J].高分子材料科学与工程,2005,21(2):27-32.

[2] 卢国东,燕青芝,宿新泰,等.多孔水凝胶研究进展[J].化学进展,2007,19(4):485-493.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010:285-286.

[4] 廖庆文,樊冬丽,肖小河,等.不同黄连炮制品HPLC指纹图谱研究[J].中国中药杂志,2007,32(3):210-214.

[5] 杨协清,朱月琴.HPLC法测定三黄胶囊中盐酸小檗碱含量[J].中药材,2010,33(6):1001.

DOI 10.3870/yydb.2014.03.026

Preparation and Fingerprint Studies of Hydrogel of Burn Healing Cream

XU Bin1,2,CHEN Yong-gang2,WU Jin-hu2,ZOU Ji-li2
(1.Department of Pharmacy,the Third Hospital of Wuhan,Wuhan 430060,China;2.Hubei University of Chinese Medicine,Wuhan 430065,China)

Objective To prepare the new hydrogel of burn healing cream(SSYHG)and establish its fingerprint.MethodsThe components of SSYEG were extracted,and mixed with gum tragacanth power.HPLC gradient ion was applied for the fingerprinting of the hydrogel.The Genimi-C18column was used,acetonitrile(A)-0.01 mol·L-1ammonium acetate(B)was used as mobile phases,and the detection wavelength was set at 345 nm.Ten baches of hydrogels were tested for setting up the fingerprints.ResultsThe hydrogel was producded and the fingerprints were established under the same condition.The similarity of ten batches of hydrogel samples were above 0.959 2.Two peaks corresponding to berberine hydrochloride and palmatine chloride were determined compared with the controls.ConclusionThe hydrogel is superior to SSYHG in color,odor,property and distribution. The established HPLC fingerprints show high similarity,which is suitable for quality control of SSYHG.

Burn healing cream;Hydrogels;HPLC;Fingerprint

R286;TQ460.1

A

1004-0781(2014)03-0364-04

2013-05-11

2013-06-20

*湖北省科技计划自然科学基金资助项目(2011CDB298);武汉市人力资源与社会保障局关键技术攻关计划项目(2013060602010264)

徐彬(1989-),男,湖北随州人,在读硕士,主要研究方向:药剂学。E-mail：xubin870614@163.com。

陈永刚(1975-),男,湖北十堰人,副主任药师,博士,主要研究方向:中药资源与开发。E-mail：275502915@qq.com。