鼠吸入全氟异丁烯急性肺损伤红花苷干预研究

刘吉福+梁海龙+武珊珊+徐波

[摘要] 目的 探讨鼠吸入全氟异丁烯（PFIB）致急性肺损伤（ALI）模型应用红花苷干预的意义。 方法 Wistar 雄性大鼠130只随机分成实验组（30只，包括3个亚组）、染毒组（30只）和正常组（10只），分为24 h、72 h、7 d三个时间观察点，每个时间点各10只。正常组不染毒、不干预处理；而染毒组仅染毒，无药物干预；3个实验组均在染毒后1 h腹腔给药干预，实验组1单纯给红花，实验组2给红花联合地塞米松；实验组3给红花联合乌斯他丁；染毒组腹腔注射盐水；分别在不同时间点放血处死。观察肺含水量、支气管肺泡灌洗液（BALF）蛋白含量、血清和肺组织中的肿瘤坏死因子-α（TNF-α），用ELISA法测定白介素-1（IL-1），IL-8，IL-18，IL-10和P-选择素（P-s）。 结果 肺含水量以24 h最高；染毒组[（81.95±2.05）%]、实验组（3组）[（81.57±2.31）%、（83.57±3.35）%、（80.41±1.51）%]与正常组[（78.18±1.34）%]比较差异有高度统计学意义（P < 0.01）；3个实验组中以实验组组3最低，与实验组2和染毒组比较差异有统计学意义（P < 0.05）。BALF蛋白含量，正常组[（0.32±0.25）g/L]与染毒组[（6.16±2.14）g/L]和实验组（3组）[（5.64±1.97）、（6.01±3.55）、（5.23±2.79）g/L]比较，差异均有高度统计学意义（P < 0.01）；实验组3与染毒组、实验组1、2比较，差异无统计学意义（P > 0.05），但以实验组3最低。24 h实验组各组血清细胞因子TNF-α、IL-1、IL-8、IL-18低于染毒组，其中实验组1、实验组2 TNF-α[（14.06±6.08）、（6.92±14.10）μg/L]和IL-18[（64.94±11.84）、（66.93±11.69）μg/L]与染毒组TNF-α[（20.20±4.70）μg/L]，IL-18[（87.34±20.98）μg/L]比较，差异均有统计学意义（P < 0.05）。肺组织中相同细胞因子明显高于血清，在时间点的变化趋势与血清基本一致。 结论 红花苷可以降低PFIB吸入性ALI炎性细胞因子水平，联合乌斯他丁能更有效减轻肺水肿。

[关键词] 急性肺损伤；全氟异丁烯；细胞因子；红花苷

[中图分类号] R563 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）02（b）-0004-05

Carthamin ameliorate acute lung injury in rats after perfluoroisobutylene exposing

LIU Jifu LIANG Hailong WU Shanshan XU Bo

Department of Thoracic Surgery， General Hospital of Beijing Military Region， Beijing 100700， China

[Abstract] Objective To study carthamin treating effect for acute lung injury （ALI） in mice after exposing perfluoroisobutylene （PFIB）. Methods 130 Wistar male rats were randomly divided into experiment groups （30 rats， including 3 subgroup）， contamination group （30 rats） and normal group （10 rats）， at 24 h， 72 h， 7 d and 3 different observing time points， 10 rats were researched in every time point. No poison and drug were given in normal group. The drugs were injected into peritoneal cavity， carthamin only injected in experiment group 1； carthamin and dexamethasone in experiment group 2， carthamin and urinastain injected in experiment group 3. The saline was injected into peritoneal cavity in the contamination group at 1 h after PFIB exposed. The rats in 3 experiment groups and contamination group were died by bloodletting. The water content of the lung， the protein level of the bronchoalveolar lavage （BALF） were evaluated， and TNF-α， IL-1， IL-8， IL-18， IL-10 and P-selectin of serum and pulmonary tissue were measured with ELISA. Results At time point of 24 h， the lung water content in each group was the highest； the lung water content in contamination group [（81.95±2.05） %] and experimental groups [（81.57±2.31） %， （83.57±3.35） %， （80.41±1.51） %] were compared with that in normal group [（78.18±1.34） %]， the differences were statistically significant （P < 0.01）； in the 3 experiment groups， the lung water content in experiment group 3 was the lowest， compared with those in experiment group 1 and experiment group 2， the differences were statistically significant （P < 0.05）. The protein content of BALF in normal group [（0.32±0.25） %] was compared with those in contamination group [（6.16±2.14） g/L] and 3 experiment groups [（5.64±1.97）， （6.01±3.55）， （5.23±2.79） g/L]， the differences were statistically significant （P < 0.01）； the protein content in experiment group 3 was compared with those in contamination group， experiment group 1 and experiment group 2， the difference was not statistically significant （P > 0.05）， but that in experiment group 3 was the lowest. The serum cytokine TNF-α， IL-1， IL-8， IL-18 at time point of 24 h， these in experimental groups were lower than control group， TNF-α in experiment group 1 and experiment group 2 [（14.06±6.08）， （6.92±14.10） μg/L] and IL-18 in experiment group 1 and experiment group 2 [（64.94±11.84）， （66.93±11.69） μg/L] were compared with those in contamination group [TNF-α （20.20±4.70） μg/L， IL-18 （87.34±20.98） μg/L]， the differences were statistically significant （P < 0.05）. The above cytokine in pulmonary tissue was obviously higher than serum， the variation trend at each time point were the same in serum. Conclusion Carthamin may decrease inflammatory cytokine level of ALI after PFIB exposed， the usage of carthamin combined urinastain can further alleviate the pneumonedema.

[Key words] Acute lung injury； Perfluoroisobutylene； Cytokine； Carthamin

急性肺损伤（acute lung injury，ALI）是一种常见、危重症，然而对塑料物品燃烧产生的全氟异丁烯（Perfluoroisobutylene，PFIB）吸入所致ALI认识并不多。有关ALI的研究多关注氧自由基和一氧化氮及合成酶对ALI损伤作用[1-2]。本研究探讨吸入PFIB致ALI用红花干预对细胞因子的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物

选择雄性Wistar大鼠130只（购自北京利华实验动物技术公司），体重190～220 g，分成实验组（包括3个亚组）、染毒组和正常组；实验组和染毒组每组各30只，正常组10只；分别观察24 h、72 h、7 d三个时间点，每个时间点各10只。实验组均在染毒后1 h按动物体重计算经腹腔给药，红花注射液（生产商：山西华辉凯德制药，批号3130113501）1 mL/100 g，1次/d。实验组1：单纯给红花；实验组2：红花联合地塞米松，地塞米松2.5 mg/100 g，1次/d；实验组3：红花联合乌斯他丁，乌斯他酊0.1万/100 g，1次/d。染毒组于染毒后1 h经腹腔给生理盐水1 mL/100 g，1次/d；正常组10只，不做任何处理。

1.2 实验方法

1.2.1 动物模型建立 采用张宪成等[3]已建立染毒装置和头部暴露式染毒方法，PFIB与空气混合均匀，吸入浓度在0.16～0.18 mg/L，持续吸入8 min。

1.2.2 取材 每组动物均在观察时间点麻醉，剖腹显露腹主动脉放血处死，留取血液6 mL，4℃离心机分离出血清；肺组织取右侧下叶肺留取肺组织3 g，匀浆。血清和组织匀浆均在-80℃保存备测。

1.2.3 支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）蛋白测定 游离气管及左右主支管后，夹闭右主支气管，对左肺用生理盐水（NS）灌洗并回收灌洗液，5 mL/次，3次/只。BALF用Bradford方法测定总蛋白含量。

1.2.4 肺水量的测定 留取右肺上叶去除表面附着的血及水后烘干，分别测定肺干湿重，计算肺含水量，计算公式：（肺湿重-肺干重）/肺湿重×100%。

1.2.5 细胞因子测定 ELISA法（采用全自动多功能酶标仪，Multiskan MK3，USA）测定血清、肺组织肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha，TNF-α），白介素-1（IL-1），IL-8，IL-18，IL-10和P-选择素（P-selectin，P-s）。

1.3 统计学方法

采用统计软件SPSS 17.0对数据进行分析，正态分布计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两独立样本的计量资料采用t检验；多组间比较采用方差分析。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大体标本肉眼观察

实验组和染毒对照组肺叶均显示肿胀，呈急、慢性充血状。

2.2 肺含水量

以24 h肺含水量最高，正常组[（78.18±1.34）%]与染毒组[（81.95±2.05）%]和实验组[实验组1（81.57±2.31）%，实验组2（83.57±3.35）%，实验组3（80.41±1.51）%，]比较，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。染毒组与实验组1、实验组3比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。实验组3与染毒组、实验组2比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。7 d时仍呈此势态，实验组3低于染毒组，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

表1 鼠吸入全氟异丁烯急性肺损伤红花干预肺含水量的动态变化（%，x±s）

注：与正常组比较，**P < 0.01；与染毒组比较，▲P < 0.05；与实验组3比较，△P < 0.05

2.3 BALF蛋白含量测定

24 h BALF蛋白含量染毒组和实验组（3组）范围在5.23～6.16 g/L，高于正常组，差异有高度统计学意义（P < 0.01）；染毒组与实验组（3组）比较，但差异无统计学意义（P > 0.05）；实验组（3组）中各时间点以实验组3最低，但3组之间比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表2。

表2 鼠吸入全氟异丁烯急性肺损伤红花干预BALF蛋白含量

动态变化，（g/L，x±s）

注：与正常组比较，**P < 0.01；BALF：肺灌洗液

2.4 血清及肺组织中细胞因子变化

2.4.1 24 h血清及肺组织中细胞因子变化 TNF-α、IL-1、IL-10、IL-18在实验组（3组）均低于染毒组，TNF-α和IL-18在实验组1、实验组2较染毒组明显降低，差异有统计学意义（P < 0.05）；TNF-α在实验组3较实验组2降低，差异有统计学意义（P < 0.05）；IL-8、IL-10、P-s实验组（3组）均高于染毒组，但差异无统计学意义（P > 0.05）。24 h肺组织中细胞因子与血清中的变化趋势基本一致，IL-1、IL-8、IL-10在实验组1、实验组2中低于对照组，IL-8、IL-10在实验组2低于实验组1（P < 0.05或P < 0.01）。见表3、4。

2.4.2 72 h血清及肺组织中细胞因子变化 血清炎性细胞因子（TNF-α，IL-1，IL-18）与24 h 趋势相似，但高于24 h，TNF-α在实验组1和实验组3中低于染毒组，差异有统计学意义（P < 0.05）；IL-1在实验组1和实验组2中低于染毒组，差异有统计学意义（P < 0.05）；IL-18在实验组1和实验组2中低于染毒组，差异有统计学意义（P < 0.05）；IL-10在实验组2高于实验组1和实验组3，但差异无统计学意义（P > 0.05）；肺组织中IL-10实验组1明显低于染毒组，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表5、6。

2.4.3 7 d血清中细胞因子及肺组织中细胞因子变化 7 d血清中细胞因子变化基本恢复正常水平。但肺组织中细胞因子反而有升高，P-s在实验组2、实验组3中高于染毒组，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表7、8。3个时间观察点肺组织中的IL-18均明显低于血清浓度。

3 讨论

ALI是一种常见急症，引起急性肺损伤的原因很多，其病理损害基本相似，但发病过程有所不同。目前多采用烧伤烟雾吸入或光气吸入动物模型研究[4-6]，PFIB模型很少受到重视。然而PFIB是一种聚氟乙烯高温裂解产物中毒性最强的成分，平时火灾或工业事故常存在该种有毒气体，易经呼吸道吸入，可穿透防毒面具，一旦吸入可造成严重肺损伤。PFIB吸入急性肺损伤的机制主要是肺组织受损伤后中性粒细胞渗出，其产生的细胞因子显著增加并释放到肺组织中，造成肺水肿。目前在救治中尚无理想的药物，多采用激素或减轻水肿的药物，如乌斯他丁。本研究重点探讨红花苷在急性肺损伤中的作用。

红花苷有减轻肺水肿、减少肺泡蛋白渗出的作用，最新研究ALI可采用经肺单或双温度指示剂定量测定血管外肺水，用于临床诊断、预测死亡和多器官功能不全，但方法复杂[7]。实验研究采用肺干湿重的方法计算肺含水量仍然可以反映肺水肿的程度。有报道用原炎性激动剂诱导ALI动物模型，对房型尿钠肽研究发现，内源性房型尿钠肽对肺血管渗出有代偿性保护机制，是减轻肺水肿的另一种保护物质[8]。鼠吸入PFIB后有明显肺水肿，24 h水肿最严重，以后逐渐减轻。3个实验组均低于染毒组，以实验组3最低，实验组3与实验组2比有显著差异。说明红花苷有减轻肺水肿的作用，与乌司他丁联合应用疗效更好，明显优于与激素联合应用。

鼠支气管肺泡灌洗液蛋白含量，可反映肺水肿液渗出的严重程度。吴允孚等[9]对大鼠内毒素性ALI模型分为对照组、ALI组和血必净组，血必净组BALF中肝细胞生长因子（HGF）和角细胞生长因子（KGF）、粒细胞数均低于ALI组，表明活血化瘀中药对ALI的保护作用。本研究测定BALF蛋白含量，在不同时间点3个实验组均低于染毒组，虽未达到统计学差异，但趋势显示红花干预有意义，以实验组3更明显，这一结果与吴允孚等[9]的结果一致。

红花苷可减轻ALI细胞因子的水平。急性肺损伤按中医辨证属于“瘀症”，红花有活血祛瘀作用。红花中主要有效成分是红花苷。已有研究证明炎性病变使用活血化瘀中药有改善白细胞黏附迁移作用[10-11]。本研究中实验组的细胞因子低于对照组，以实验组1和实验组2中降低最明显，尤其是IL-1、IL-18和TNF-α；IL-10则有所增高，随着时间延长，实验组3高于另2个实验组，这表明红花在PFIB诱发的ALI有减少炎性细胞因子的作用，同时也有调节免疫功能。

肺组织中的细胞因子明显高于血清。ALI肺组织的主要改变是肺组织水肿、炎性细胞渗出，许多细胞因子是单核、巨噬细胞、粒细胞和血管内皮细胞产生，如TNF-α、IL-1、IL-8、IL-18、IL-10、P-s[12-13]。本研究肺组织中细胞因子除LI-18外，其余均显著高于血清中，而且随着时间的延长血清中的细胞因子逐渐下降，而肺组织中则保持了较高水平，说明血清中细胞因子可能主要来源肺组织和全身炎性因子释放，另外，肺组织中炎性细胞因子持续增高，可能对肺组织的持久损害起到了不良作用。这一结果类似于梅雪等[14]的临床报道，观察了78例全身炎症反应综合征患者血清中促炎因子水平与病情轻重、患者生存状况有关。

肺组织中IL-18明显低于血清，说明血清中IL-18增高并非是肺组织中释放，而是体内其他部位含IL-18组织受到致炎因子的影响而释放。也代表了ALI可以引起全身炎性反应。

综上所述，本研究显示红花苷可以降低吸入PFIB致ALI的血清细胞因子水平，联合乌司他丁应用能减轻肺水肿。

[参考文献]

[1] 王和枚，王春倩，张宪成，等.大鼠吸入全氟异丁烯中毒后不同时间对内源性NO及其合成酶活力的影响[J].军事医学科学院院刊，2010，34（6）：560-562.

[2] Enkhbaatar P，Connelly R，Wang J，et al. Inhibition of neuronal nitric oxide osynthase in ovine model of acute lung injury [J]. Crit Care Med，2009，37（1）：361-363.

[3] 张宪成，丁日高，张天宏，等.大鼠头部暴露全氟异丁烯中毒致肺损伤实验模型的建立[J].军事医学科学院院刊，2005，29（1）：51-54.

[4] Enkhbaatar P，Cox RA，Traber LD，et al. Aerosolized ameliorate acute lung injury in sheep after exposure to burn and smoke inhalation [J]. Crit Care Med，2007，35（12）：2805-2810.

[5] Zhou M，He JS，Li Q，et al. Pulmonary immune responses to acute lung injury following smoke inhalation and its mechanisms [J]. Zhongguo Wei Zhong Bing Ji Jiu Yi Xue，2007，19（4）：209-213.

[6] Sciuto AM，Hurt HH. Therapeutic treatment of phosgene-induced lung injury [J]. Inhal Toxicol，2004，16（8）：565-580.

[7] Mallat J. Can extravascular lung water predict progression to acute lung injury in patients at increased risk？ Still an unanswered question [J]. Crit Care Med，2012，40（4）：1391-1392.

[8] Xing JJ，Yakubov B，Poroyko V，et al. Opposite effects of ANP receptors in attenuation of LPS-induced endothelial permeability and lung injury [J]. Microvasc Res，2012，83（2）：194-199.

[9] 吴允孚，陈刚，席与斌.血必净注射液对内毒素性肺损伤治疗作用的实验研究[J].中国中西医结合急救杂志，2008， 15（3）：181-182.

[10] 何蔚，刘奕明，陈汇，等.灯盏花素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑水肿和中性粒细胞的影响[J].中国药理学与毒理学杂志，2004，18（3）：161-165.

[11] 黄琦，倪海祥，邵国民，等.2型糖尿病患者CD11b/CD18 的表达及活血化瘀药对其的影响[J].中国中西医结合杂志，2003，23（6）：430-432.

[12] 姚艳敏，王希柱，宋巧凤，等.急性肺血栓栓塞症炎性因子与肺损伤关系的实验研究[J].疑难病杂志，2013，12（3）：217-219.

[13] 沈桢巍，方路，姜敏敏，等.β防御素2对大鼠肺部炎症细胞因子的影响[J].成都医学院学报，2013，8（1）：17-20.

[14] 梅雪，李春盛，王烁.全身炎症反应综合症患者血清细胞因子动态变化的研究[J].中国危重病急救医学，2006，18（2）：85-88.

（收稿日期：2013-08-23 本文编辑：李继翔）

2.4.3 7 d血清中细胞因子及肺组织中细胞因子变化 7 d血清中细胞因子变化基本恢复正常水平。但肺组织中细胞因子反而有升高，P-s在实验组2、实验组3中高于染毒组，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表7、8。3个时间观察点肺组织中的IL-18均明显低于血清浓度。

3 讨论

ALI是一种常见急症，引起急性肺损伤的原因很多，其病理损害基本相似，但发病过程有所不同。目前多采用烧伤烟雾吸入或光气吸入动物模型研究[4-6]，PFIB模型很少受到重视。然而PFIB是一种聚氟乙烯高温裂解产物中毒性最强的成分，平时火灾或工业事故常存在该种有毒气体，易经呼吸道吸入，可穿透防毒面具，一旦吸入可造成严重肺损伤。PFIB吸入急性肺损伤的机制主要是肺组织受损伤后中性粒细胞渗出，其产生的细胞因子显著增加并释放到肺组织中，造成肺水肿。目前在救治中尚无理想的药物，多采用激素或减轻水肿的药物，如乌斯他丁。本研究重点探讨红花苷在急性肺损伤中的作用。

红花苷有减轻肺水肿、减少肺泡蛋白渗出的作用，最新研究ALI可采用经肺单或双温度指示剂定量测定血管外肺水，用于临床诊断、预测死亡和多器官功能不全，但方法复杂[7]。实验研究采用肺干湿重的方法计算肺含水量仍然可以反映肺水肿的程度。有报道用原炎性激动剂诱导ALI动物模型，对房型尿钠肽研究发现，内源性房型尿钠肽对肺血管渗出有代偿性保护机制，是减轻肺水肿的另一种保护物质[8]。鼠吸入PFIB后有明显肺水肿，24 h水肿最严重，以后逐渐减轻。3个实验组均低于染毒组，以实验组3最低，实验组3与实验组2比有显著差异。说明红花苷有减轻肺水肿的作用，与乌司他丁联合应用疗效更好，明显优于与激素联合应用。

鼠支气管肺泡灌洗液蛋白含量，可反映肺水肿液渗出的严重程度。吴允孚等[9]对大鼠内毒素性ALI模型分为对照组、ALI组和血必净组，血必净组BALF中肝细胞生长因子（HGF）和角细胞生长因子（KGF）、粒细胞数均低于ALI组，表明活血化瘀中药对ALI的保护作用。本研究测定BALF蛋白含量，在不同时间点3个实验组均低于染毒组，虽未达到统计学差异，但趋势显示红花干预有意义，以实验组3更明显，这一结果与吴允孚等[9]的结果一致。

红花苷可减轻ALI细胞因子的水平。急性肺损伤按中医辨证属于“瘀症”，红花有活血祛瘀作用。红花中主要有效成分是红花苷。已有研究证明炎性病变使用活血化瘀中药有改善白细胞黏附迁移作用[10-11]。本研究中实验组的细胞因子低于对照组，以实验组1和实验组2中降低最明显，尤其是IL-1、IL-18和TNF-α；IL-10则有所增高，随着时间延长，实验组3高于另2个实验组，这表明红花在PFIB诱发的ALI有减少炎性细胞因子的作用，同时也有调节免疫功能。

肺组织中的细胞因子明显高于血清。ALI肺组织的主要改变是肺组织水肿、炎性细胞渗出，许多细胞因子是单核、巨噬细胞、粒细胞和血管内皮细胞产生，如TNF-α、IL-1、IL-8、IL-18、IL-10、P-s[12-13]。本研究肺组织中细胞因子除LI-18外，其余均显著高于血清中，而且随着时间的延长血清中的细胞因子逐渐下降，而肺组织中则保持了较高水平，说明血清中细胞因子可能主要来源肺组织和全身炎性因子释放，另外，肺组织中炎性细胞因子持续增高，可能对肺组织的持久损害起到了不良作用。这一结果类似于梅雪等[14]的临床报道，观察了78例全身炎症反应综合征患者血清中促炎因子水平与病情轻重、患者生存状况有关。

肺组织中IL-18明显低于血清，说明血清中IL-18增高并非是肺组织中释放，而是体内其他部位含IL-18组织受到致炎因子的影响而释放。也代表了ALI可以引起全身炎性反应。

综上所述，本研究显示红花苷可以降低吸入PFIB致ALI的血清细胞因子水平，联合乌司他丁应用能减轻肺水肿。

[参考文献]

[1] 王和枚，王春倩，张宪成，等.大鼠吸入全氟异丁烯中毒后不同时间对内源性NO及其合成酶活力的影响[J].军事医学科学院院刊，2010，34（6）：560-562.

[2] Enkhbaatar P，Connelly R，Wang J，et al. Inhibition of neuronal nitric oxide osynthase in ovine model of acute lung injury [J]. Crit Care Med，2009，37（1）：361-363.

[3] 张宪成，丁日高，张天宏，等.大鼠头部暴露全氟异丁烯中毒致肺损伤实验模型的建立[J].军事医学科学院院刊，2005，29（1）：51-54.

[4] Enkhbaatar P，Cox RA，Traber LD，et al. Aerosolized ameliorate acute lung injury in sheep after exposure to burn and smoke inhalation [J]. Crit Care Med，2007，35（12）：2805-2810.

[5] Zhou M，He JS，Li Q，et al. Pulmonary immune responses to acute lung injury following smoke inhalation and its mechanisms [J]. Zhongguo Wei Zhong Bing Ji Jiu Yi Xue，2007，19（4）：209-213.

[6] Sciuto AM，Hurt HH. Therapeutic treatment of phosgene-induced lung injury [J]. Inhal Toxicol，2004，16（8）：565-580.

[7] Mallat J. Can extravascular lung water predict progression to acute lung injury in patients at increased risk？ Still an unanswered question [J]. Crit Care Med，2012，40（4）：1391-1392.

[8] Xing JJ，Yakubov B，Poroyko V，et al. Opposite effects of ANP receptors in attenuation of LPS-induced endothelial permeability and lung injury [J]. Microvasc Res，2012，83（2）：194-199.

[9] 吴允孚，陈刚，席与斌.血必净注射液对内毒素性肺损伤治疗作用的实验研究[J].中国中西医结合急救杂志，2008， 15（3）：181-182.

[10] 何蔚，刘奕明，陈汇，等.灯盏花素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑水肿和中性粒细胞的影响[J].中国药理学与毒理学杂志，2004，18（3）：161-165.

[11] 黄琦，倪海祥，邵国民，等.2型糖尿病患者CD11b/CD18 的表达及活血化瘀药对其的影响[J].中国中西医结合杂志，2003，23（6）：430-432.

[12] 姚艳敏，王希柱，宋巧凤，等.急性肺血栓栓塞症炎性因子与肺损伤关系的实验研究[J].疑难病杂志，2013，12（3）：217-219.

[13] 沈桢巍，方路，姜敏敏，等.β防御素2对大鼠肺部炎症细胞因子的影响[J].成都医学院学报，2013，8（1）：17-20.

[14] 梅雪，李春盛，王烁.全身炎症反应综合症患者血清细胞因子动态变化的研究[J].中国危重病急救医学，2006，18（2）：85-88.

（收稿日期：2013-08-23 本文编辑：李继翔）

2.4.3 7 d血清中细胞因子及肺组织中细胞因子变化 7 d血清中细胞因子变化基本恢复正常水平。但肺组织中细胞因子反而有升高，P-s在实验组2、实验组3中高于染毒组，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表7、8。3个时间观察点肺组织中的IL-18均明显低于血清浓度。

3 讨论

ALI是一种常见急症，引起急性肺损伤的原因很多，其病理损害基本相似，但发病过程有所不同。目前多采用烧伤烟雾吸入或光气吸入动物模型研究[4-6]，PFIB模型很少受到重视。然而PFIB是一种聚氟乙烯高温裂解产物中毒性最强的成分，平时火灾或工业事故常存在该种有毒气体，易经呼吸道吸入，可穿透防毒面具，一旦吸入可造成严重肺损伤。PFIB吸入急性肺损伤的机制主要是肺组织受损伤后中性粒细胞渗出，其产生的细胞因子显著增加并释放到肺组织中，造成肺水肿。目前在救治中尚无理想的药物，多采用激素或减轻水肿的药物，如乌斯他丁。本研究重点探讨红花苷在急性肺损伤中的作用。

红花苷有减轻肺水肿、减少肺泡蛋白渗出的作用，最新研究ALI可采用经肺单或双温度指示剂定量测定血管外肺水，用于临床诊断、预测死亡和多器官功能不全，但方法复杂[7]。实验研究采用肺干湿重的方法计算肺含水量仍然可以反映肺水肿的程度。有报道用原炎性激动剂诱导ALI动物模型，对房型尿钠肽研究发现，内源性房型尿钠肽对肺血管渗出有代偿性保护机制，是减轻肺水肿的另一种保护物质[8]。鼠吸入PFIB后有明显肺水肿，24 h水肿最严重，以后逐渐减轻。3个实验组均低于染毒组，以实验组3最低，实验组3与实验组2比有显著差异。说明红花苷有减轻肺水肿的作用，与乌司他丁联合应用疗效更好，明显优于与激素联合应用。

鼠支气管肺泡灌洗液蛋白含量，可反映肺水肿液渗出的严重程度。吴允孚等[9]对大鼠内毒素性ALI模型分为对照组、ALI组和血必净组，血必净组BALF中肝细胞生长因子（HGF）和角细胞生长因子（KGF）、粒细胞数均低于ALI组，表明活血化瘀中药对ALI的保护作用。本研究测定BALF蛋白含量，在不同时间点3个实验组均低于染毒组，虽未达到统计学差异，但趋势显示红花干预有意义，以实验组3更明显，这一结果与吴允孚等[9]的结果一致。

红花苷可减轻ALI细胞因子的水平。急性肺损伤按中医辨证属于“瘀症”，红花有活血祛瘀作用。红花中主要有效成分是红花苷。已有研究证明炎性病变使用活血化瘀中药有改善白细胞黏附迁移作用[10-11]。本研究中实验组的细胞因子低于对照组，以实验组1和实验组2中降低最明显，尤其是IL-1、IL-18和TNF-α；IL-10则有所增高，随着时间延长，实验组3高于另2个实验组，这表明红花在PFIB诱发的ALI有减少炎性细胞因子的作用，同时也有调节免疫功能。

肺组织中的细胞因子明显高于血清。ALI肺组织的主要改变是肺组织水肿、炎性细胞渗出，许多细胞因子是单核、巨噬细胞、粒细胞和血管内皮细胞产生，如TNF-α、IL-1、IL-8、IL-18、IL-10、P-s[12-13]。本研究肺组织中细胞因子除LI-18外，其余均显著高于血清中，而且随着时间的延长血清中的细胞因子逐渐下降，而肺组织中则保持了较高水平，说明血清中细胞因子可能主要来源肺组织和全身炎性因子释放，另外，肺组织中炎性细胞因子持续增高，可能对肺组织的持久损害起到了不良作用。这一结果类似于梅雪等[14]的临床报道，观察了78例全身炎症反应综合征患者血清中促炎因子水平与病情轻重、患者生存状况有关。

肺组织中IL-18明显低于血清，说明血清中IL-18增高并非是肺组织中释放，而是体内其他部位含IL-18组织受到致炎因子的影响而释放。也代表了ALI可以引起全身炎性反应。

综上所述，本研究显示红花苷可以降低吸入PFIB致ALI的血清细胞因子水平，联合乌司他丁应用能减轻肺水肿。

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（收稿日期：2013-08-23 本文编辑：李继翔）