血小板膜糖蛋白与缺血性脑血管病关系的研究

胡晓芳，李 娜，2，王玉红，张英辉，郑 伟＊

血小板膜糖蛋白与缺血性脑血管病关系的研究

胡晓芳1，李 娜1，2，王玉红1，张英辉1，郑 伟1＊

（1.沈阳军区总医院检验科，沈阳110840；2.辽宁医学院研究生院，辽宁锦州121001）

目的探讨血小板膜糖蛋白GPⅠb／ⅠX／Ⅴ复合物表达水平与缺血性脑血管病的相关性。方法分别检测缺血性脑血管病患者和健康对照组血清血小板膜糖蛋白GPⅠb／ⅠX／Ⅴ复合物和血小板聚集率水平。结果缺血性脑血管病患者血清血小板膜糖蛋白GPⅠb／ⅠX／Ⅴ复合物和血小板聚集率水平显著高于对照组（P＜0.05，P＜0.01）。相关分析结果显示，缺血性脑血管病患者血清血小板膜糖蛋白GPⅠb／ⅠX／Ⅴ复合物和血小板聚集率水平呈正相关（r＝0.684，P＜0.01）。结论血小板膜糖蛋白表达水平的增高明显增强了血小板的聚集功能和活化状态。而缺血性脑血管病的发生正是GPⅠb／ⅠX／Ⅴ复合物高表达与血小板聚集共同作用的结果。

血小板膜糖蛋白；缺血性脑血管病；血小板聚集率

随着老龄化人口的不断增加，脑血管事件的发病率也不断攀升，脑血管病已经成为当今社会成年人致残的主要原因［1］。缺血性脑血管病占脑血管病的80%。因此，进一步阐明缺血性脑血管病的发病机制是目前亟待解决的重点课题。

研究显示，缺血性脑血管病的发生与血液的高凝状态有关，血小板在维持血液凝固过程中发挥着举足轻重的作用［2］。其中，血小板膜糖蛋白作为介导血小板功能的关键效应分子，其表达水平明显影响着血小板的功能和活化状态。本研究聚焦于缺血性脑血管疾病患者GPⅠb／ⅠX／Ⅴ复合物的表达水平及血小板聚集率的变化特点，旨在探讨二者在缺血性脑血管疾病发病机制中的作用，进而为缺血性脑血管病诊断提供有益的新的线索。

1 对象与方法

1.1对象

选择2012年1月至2013年12月沈阳军区总医院神经内科缺血脑血管病住院患者221例（ICVD），男121例，女100例，平均年龄61.14± 10.01岁。入组标准：患者均有颅脑CT和／或MRI的影像证据，诊断符合1995年全国第四届脑血管病学术会议修订的诊断标准［3］。排除有肝、肾疾病、糖尿病、恶性肿瘤、甲状腺功能异常、妊娠、服用抗惊厥药物者。无酗酒史，未服用免疫抑制剂、多种维生素及叶酸。对照组为我院健康体检者115例，男61例、女54例，平均年龄60.85±10.33岁。两组在年龄、性别方面差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2方法

1.2.1 标本采集与指标检测

病例组（于确诊入院的第1天清晨）以及对照组体检者在空腹状态下采集前臂无抗凝静脉血和109 mmol／L枸橼酸钠抗凝静脉血各3ml。无抗凝静脉血1h内离心（3 000rpm，10min）分离血清后，置于－70℃保存待测。采用GPⅠb／ⅠX／Ⅴ复合物ELISA试剂盒（上海继锦化学生物工程有限公司）检测血清GPⅠb／ⅠX／Ⅴ复合物浓度，所有操作严格按说明书进行。应用LBY－NT4血小板聚集仪（北京普利生公司），检测血小板聚集率。

1.2.2 血小板聚集率测定

1 000rpm离心制备富含血小板血浆（PRP），并计数，剩余部分3 000rpm离心10min制备乏血小板血浆（PPP），PPP血小板计数为10×109／L～20 ×109／L，用PPP调整PRP至100×109／L－300× 109／L。按仪器要求，以PPP管透光度为100%，以PRP管初始透光度为0%，在RPR管中加入诱导剂（ADP或AA），测定不同诱导剂在不同浓度下（1 μmol／L，2μmol／L，5μmol／L ADP；0.1mg／L，0.2 mg／L，0.5mg／L AA），分别记录血小板聚集率曲线和最大聚集率。

1.3统计学方法

计量资料用表示，组间比较用t检验、方差分析。相关性分析用Spearman相关检验。以上比较采用SPSS 17.0软件进行分析，以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1缺血性脑血管病（ICVD）组与对照组血清GPⅠb／ⅠX／Ⅴ复合物水平的比较

ICVD组血清GPⅠb／ⅠX／Ⅴ复合物水平（753.27±151.72U／ml）明显高于对照组（717.42 ±134.95U／ml），差异有统计学意义（t＝2.418，P＝0.016）。ICVD组的血小板聚集率为（74.78± 6.57）%明显高于对照组（42.13±5.17）%（t＝52.875，P＜0.01），差异具有显著的统计学意义，见表1。

表1 不同组别血清GPⅠb／ⅠX／Ⅴ复合物的测定结果

2.2ICVD患者GPⅠb／ⅠX／Ⅴ复合物水平与血小板聚集率的相关性分析

相关性分析结果显示：ICVD组血清GPⅠb／ⅠX／Ⅴ与血小板聚集率复合物的表达水平呈正相关。（r＝0.684，P＜0.01），见图1。

图1 ICVD患者GPⅠb／ⅠX／Ⅴ复合物水平与血小板聚集率的相关性比较

3 讨论

血栓形成是缺血性脑血管病发生的重要病理基础，而血小板的活化在血栓的发生、发展中发挥着重要作用。有研究显示，在血小板初始的粘附过程中，GPⅠb／ⅠX／Ⅴ复合物是介导血小板与血管壁受损位点结合的关键效应分子［4］。本研究结果显示，缺血性脑血管病的血清GPⅠb／ⅠX／Ⅴ复合物的浓度明显高于正常对照组。由此提示，血清GPⅠb／ⅠX／Ⅴ复合物表达的增加与缺血性脑血管病的发病密切相关。其机理可能为，血小板膜糖蛋白受体活化、表达增加、密度上调，随后其与纤维蛋白原结合，使血小板聚集，进而纤维蛋白原更多地连接到血管内皮、血小板聚集率升高，促进血小板血栓形成［5］，从而介导缺血性脑血管病的发生。

血小板聚集率是反映血小板聚集功能和活化的重要指标，光学比浊法血小板聚集率实验是检测血小板聚集功能的金标准［6］。本研究结果显示，缺血性脑血管病组的血小板聚集率明显高于正常对照组。由此提示，血小板聚集功能和活化与缺血性脑血管病的发病密切相关。值得关注的是，通过相关性分析显示：血清GPⅠb／ⅠX／Ⅴ复合物与血小板聚集率的表达量呈显著的正相关。由此我们有理由推测，血小板介导缺血性脑血管病的发生依赖于GPⅠb／ⅠX／Ⅴ复合物与血小板聚集的共同作用。

综上，血小板膜糖蛋白作为介导血小板功能的关键效应分子，其表达水平的增高明显增强了血小板的聚集功能和活化状态。而缺血性脑血管病的发生正是GPⅠb／ⅠX／Ⅴ复合物高表达与血小板聚集共同作用的结果。

［1］Atul Ashok Kalanuria，Paul Nyquist，and Geoffrey Ling.The prevention and regression of atherosclerotic plaques：emerging treat－ments［J］.Vasc Health Risk Manag，2012，8：549.

［2］Andrews RK，Gardiner EE，Shen Y，et al.Glycoprotein Ib－IX－V［J］.Int J Biochem Cell Biol，2003，35：1170.

［3］中华医学会神经病学分会.各类脑血管疾病诊断要点－脑卒中患者临床神经功能缺损程度评分标准（1995）［J］.中华神经科杂志，1996，29（6）：379.

［4］Pavkovic M，Petlichkovski A，Strezova A，et al.Gene frequencies of human platelet antigens in the Macedonian population［J］.Tissue Antigens，2006，67（3）：241.

［5］Lominadze D，Dean WL，Tyagi SC，et al.Mechanisms of fibrinogen induced microvascular dysfunction during cardiovascular disease［J］.Acta Physiol，2010，198（1）：1.

［6］Paul A，Gurlbel MD，Richard C，et al.Platelet function momtofing in patients with coronary artery disease［J］.J Am Coil Cardiol，2007，50（19）：1822.

Study on the relationship of platelet membrane glycoprotein with ischemic cerebrovascular disease

HU Xiao－fang，LI Na，WANG Yu－hong，et al.（Department of Experimental Techonology，General Hospital of Shenyang Military Command，Shenyang110840，China）

ObjectiveTo investigate the relationship of platelet membrane glycoprotein（GPI）with ischemic cerebrovascular disease（ICVD）.MethodsSerum GPⅠb／ⅠX／Ⅴcomplex level was measured by enzyme－linked immunosorbent assay.Turbidimetry was applied for detecting platelet agglutination rate（PAR）levels in all groups.ResultsSerum GPⅠb／ⅠX／Ⅴcomplex and PAR levels in ICVD group were significantly higher than those in control group（P＜0.05，P＜0.01）.Meanwhile，correlation analysis results showed that serum GPⅠb／ⅠX／Ⅴcomplex levels were positively correlated with PAR levels in ICVD group（r＝0.684，P＜0.01）.ConclusionHigh levels of serum GPⅠb／ⅠX／Ⅴcomplex obviously elevated the agglutination and action of platelet，which is a key factor mediating the occurrence of ICVD.

platelet membrane glycoprotein；ischemic cerebrovascular disease；platelet agglutination rate（Chin J Lab Diagn，2014，18：1988）

R743.34

：A

胡晓芳，女，51岁，主任技师，主任，硕士生导师，研究方向：脑血管病的实验室诊断。

2014－03－12）

1007－4287（2014）12－1988－03

＊通讯作者