红薯叶黄酮对糖尿病模型大鼠外周血T淋巴细胞亚群的影响

傅 莉

红薯叶黄酮对糖尿病模型大鼠外周血T淋巴细胞亚群的影响

傅 莉

（攀枝花市攀钢集团总医院内分泌科（密地院区），四川攀枝花617063）

近年研究表明，2型糖尿病（T2DM）是一种由T细胞介导的器官特异性自身免疫疾病，免疫异常在其发生、发展过程中起关键作用［1］。自天然植物中筛选、提取既能控制血糖，又兼有免疫调节作用的成分已成为当前的研究热点。红薯叶黄酮（FIBL）是自红薯叶提取的活性物质，目前发现其具有降糖、抗氧化、抗肿瘤作用，但对其免疫调节作用的研究甚少，本研究重点观察FIBL对T2DM大鼠外周血T淋巴细胞亚群的影响。

1 材料与方法

1.1材料

链脲佐菌素（STZ）购自美国Sigma公司，以柠檬酸钠－柠檬酸缓冲溶液（pH＝4.5）配制浓度为20 mg／mL溶液。FITC标记CD4、CD8抗体购自上海博耀生物工程有限公司；流式细胞仪（型号：FACSVerseTM）为美国Becton Dickinson公司产品。

1.2方法

1.2.1 FIBL制备 将新鲜红薯叶烘干，充分碎成粉末，称取200g入1 500ml乙醇（95%），超声波提取0.5h后抽滤出滤液，滤渣再次提取、抽滤。收集的两次滤液浓缩至50ml，倒入容量瓶，用60%乙醇稀释至100mL，即为FIBL样品液。

1.2.2 糖尿病大鼠模型制备 雄性SD大鼠（清洁级）48只，体重（200±10）g，由武汉大学实验动物中心提供［合格证号SCXK（鄂）2008－0004］。给予大鼠高糖高脂饮食（饲料含10%猪油、20%蔗糖、2.5%胆固醇、1%猪胆盐）4周，大鼠腹腔一次性注射STZ 30mg／kg制备T2DM大鼠模型，以空腹血糖≥16.7mmol／L为标准［2］。

1.2.3 分组及采集血液 造模成功大鼠40只，随机分为4组：对照组和FIBL低（25mg／kg）、中（FIBL 50mg／kg）、高（FIBL 100mg／kg）剂量组，FIBL组按剂量每日灌胃1次，对照组灌等量生理盐水。8周后，大鼠腹腔麻醉，摘眼球取全血，收集于EDTA－2K抗凝管。

1.2.4 流式细胞仪检测 每个EP管加入50μl大鼠全血，加入FITC标记的抗体各15μl，室温避光孵育20min；每个EP管内加500μl红细胞裂解液，避光10min；PBS液洗涤2次；去上清，以500μl PBS液重悬，上机检测。

1.2.5 统计学方法 采用SPSS17.0软件进行分析。数据以均数±标准差（x—±s）表示，组间比较采用方差分析，两两比较采用LSD－t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

FIBL对糖尿病大鼠外周血T细胞亚群的影响FIBL低剂量组与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；与对照组比较，FIBL中、高剂量组CD4＋、CD4＋／CD8＋均升高，CD8＋降低（P＜0.05）；与中剂量组比较，FIBL高剂量组变化更为显著（P＜0.05）。见表1。

表1 FIBL对糖尿病大鼠外周血T细胞亚群的影响（x—±s）

3 讨论

T2DM患者由于高血糖、免疫异常及广泛的微血管病变，容易导致感染，不易治愈，死亡率较高。单纯使用胸腺肽、免疫球蛋白等提高免疫力的药物，不仅价格昂贵，而且不能根治。近年来研究发现，FIBL具有抗癌、抗氧化、降血糖的作用，对糖尿病大鼠肾脏具有保护作用，但对T2DM大鼠的免疫调节作用报道甚少。

本研究观察FIBL对T2DM大鼠外周血T淋巴细胞亚群的影响，结果显示：25mg／kg FIBL对大鼠外周血T细胞亚群无明显的影响，50mg／kg的FIBL能增高大鼠外周血CD4＋比率及CD4＋／CD8＋比值；100mg／kg的FIBL对T细胞亚群的影响更为显著。结果分析：①STZ引发糖尿病的主要机制是选择性进入胰岛β细胞，通过释放NO自由基破坏β细胞膜，激活免疫反应而损伤胰岛［3］。②国内外学者［4－5］的研究已经证实，FIBL对糖尿病大鼠及斑点叉尾鱼均有良好的抗氧化作用；Nagai M等［6］发现，红薯叶通过抑制低密度脂蛋白的氧化而发挥抗氧化能力。③本研究观察到FIBL能改善T2DM大鼠T细胞亚群失衡，提高大鼠的免疫能力，推测其机制可能与其减少STZ引起β细胞释放自由基，削弱氧化应激引起的免疫损伤有关，但其具体机制有待进一步深入探讨。

［1］夏瑢，陈华群，邵国民.超微粉化瓜蒌根对2型糖尿病SD大鼠免疫异常的干预研究［J］.中华中医药学刊，2011，29（2）：267.

［2］张文兰，胡同平，张翼翔.蝇蛆粉、南瓜粉、茶叶粉及魔芋精粉混合物对2型糖尿病大鼠免疫功能影响的研究［J］.现代预防医学，2010，37（8）：1530.

［3］赵 蕊，李青旺，张 涛.红薯叶黄酮对老龄糖尿病模型大鼠的免疫调节作用［J］.中国老年学杂志，2010，5（30）：1395.

［4］赵 蕊，李青旺，李 星，等.红薯叶黄酮对糖尿病模型大鼠肾的保护作用［J］.解剖科学进展，2011，17（4）：321.

［5］Lochmann RT，Islam S，Phillips H，et al.Effects of dietary sweet potato leaf meal on the growth，non－specific immune responses，total phenols and antioxidant capacity in channel catfish（Ictalurus punctatus）［J］.J Sci Food Agric.2012Aug 28.doi：10.1002／jsfa.5898.［Epub ahead of print］.

［6］Nagai M，Tani M，Kishimoto Y，et al.Sweet potato（Ipomoea batatas L.）leaves suppressed oxidation of low density lipoprotein（LDL）in vitro and in human subjects［J］.J Clin Biochem Nutr，2011，48（3）：203.

2014－04－15）

1007－4287（2014）12－1919－02