原发性十二指肠梭形细胞鳞癌的组织形态学及蛋白表达的研究

周英泽，罗红波，王锡平，王桂芬

(安岳县人民医院病理科，四川 安岳 642350)

·临床病理·

原发性十二指肠梭形细胞鳞癌的组织形态学及蛋白表达的研究

周英泽，罗红波，王锡平，王桂芬

(安岳县人民医院病理科，四川 安岳 642350)

目的 探讨十二指肠梭形细胞鳞癌的组织形态学及蛋白表达的特点，明确其组织学来源，以提高对该疾病的认识和诊断水平。方法运用HE染色法了解十二指肠梭形细胞鳞癌的组织形态学特点；通过免疫组织化学染色法进一步了解其蛋白表达特点。结果HE染色显示黏膜层、黏膜下层及肌层见大小不等异型性明显的梭形肿瘤细胞，并见部分不典型细胞间桥和角化珠形成。免疫组织化学染色结果显示梭形肿瘤细胞区域：⑴胞浆着色：CK5/6(+++)、CEA(+++)、CK8/18(++)、Syn(+)、NSE(+)、CgA(+)及S-100蛋白(+)；⑵胞核着色：Ki-67(+++)；⑶CD34和CD117显示阴性。结论十二指肠鳞状细胞癌起源于十二指肠黏膜基底层多潜能干细胞。

十二指肠梭形细胞鳞癌；组织形态学；蛋白表达；干细胞

小肠恶性肿瘤发病率仅占整个消化道恶性肿瘤的0.1%[1]，且其发生率远不及大肠恶性肿瘤。原发性十二指肠恶性肿瘤较为少见，一般以腺癌较为常见，而鳞状细胞癌（Primary duodenum squamous cell carcinoma，PDSCC）很少见，梭形细胞鳞癌是鳞状细胞癌的一种少见的特殊亚型，因此原发性十二指肠梭形细胞鳞癌极为罕见。我科于2012年发现一例原发性十二指肠梭形细胞鳞癌，现结合其组织形态学及蛋白表达的特点给予报道如下：

1 材料与方法

1.1 材料 收集本科室未经放化疗的十二指肠梭形细胞鳞癌的组织标本1例。兔抗人的CK5/6、CK8/18、CEA、NSE、Syn、CgA、CD34、CD117、Ki-67等单克隆抗体及兔抗S-100蛋白多克隆抗体均购自北京中杉金桥生物技术有限公司(抗体均为工作液)；辣根酶(HRP)标记IgG及DAB显色试剂盒均购自碧云天生物技术研究所。其他常规化学试剂均为国产分析纯。

1.2 方法

1.2.1 HE染色 取材脱水石蜡包埋，再切片经脱蜡处理后，按常规苏木精-伊红(HE)染色程序进行染色，封片后显微镜观察结果。

1.2.2 免疫组织化学染色法定性检测蛋白表达情况 石蜡包埋的标本经切片、脱蜡、3%H2O2-甲醇溶、枸橼酸盐或EDTA缓冲液抗原修复及山羊血清封闭等处理后，分别滴加CK5/6、CK8/18、CEA、NSE、Syn、CgA、CD34、CD117、S-100蛋白及Ki-67等抗体，用SP法进行免疫组化标记，显微镜下观察实验结果。用PBS代替一抗作为阴性对照。阳性结果判断：将胞浆、胞膜或细胞核中出现黄色或棕黄色颗粒作为阳性反应。阳性强度分为3级：强阳性(+++)，阳性细胞50%以上，染色颗粒粗大，着色深；阳性(++)，阳性细胞在25%～49%之间，染色颗粒中等大小，呈棕黄色；弱阳性(+)，阳性细胞在25%以下，染色颗粒细小，呈淡黄色；阴性(-)，所有细胞均没有染色反应。

2 结 果

2.1 巨检 十二指肠肠管一段，长11 cm，最大直径4 cm，在距十二指肠下端切缘2 cm处见一个直径为3.5 cm息肉样肿块，表面光滑，占据肠腔1/2周并阻塞十二指肠肠腔，切面灰白色侵及肠壁肌层，边界欠清，质嫩脆；十二指肠肠腔内未见乳头及乳头周围组织。另见部分胃胰腺组织及淡黄色肠系膜组织一堆，体积为(12×10×7)cm3，肠系膜组织中查见数枚肿大淋巴结，其余组织均未见明确异常。

2.2 苏木精-伊红(HE)染色 如图1所示，黏膜层、黏膜下层及肌层均可见大小不等异型性明显的梭形肿瘤细胞，偶见核分裂像；并见少数不典型的角化珠和细胞间桥形成；肠壁血管、淋巴管中见癌栓并侵犯神经管；肠系膜淋巴结中未见癌组织转移。

图1 HE染色观察十二指肠梭形细胞鳞癌的组织形态学特征(×200)

2.3 免疫组织化学染色 如图2所示：胞浆着色：CK5/6(+++)、CK8/18(++)、CEA(+++)、Syn(+)、NSE (+)、CgA(+)及S-100蛋白(+)；细胞核着色：Ki-67 (+++)；CD34(-)、CD117(-)。病理诊断：十二指肠梭形细胞鳞癌。

图2 免疫组织化学染色检测十二指肠梭形细胞鳞癌的蛋白表达情况（×200）

3 讨 论

小肠肿瘤较少见，原发性小肠恶性肿瘤更为罕见，研究发现，小肠肿瘤的发生率仅占胃肠道肿瘤的5%左右，而小肠恶性肿瘤发生率还不足全部消化道恶性肿瘤的1%[1]，因此，小肠是消化道恶性肿瘤发病率最低的肠段。在小肠恶性肿瘤中，以上皮恶变多见，上皮恶变可以发生于小肠的任何部位，但以近段为多见，40%～50%发生于十二指肠，尤其是壶腹部多见，其次为距屈氏韧带30 cm以内的近段空肠，而回肠的上皮恶变常常多发生于末段[2]。随着纤维内镜的广泛应用，十二指肠癌的发病率有上升的趋势[3-4]。

原发性十二指肠癌好发于中老年人，男女之比约为1.2:1[1]。按其发生的部位可分为乳头上部癌、乳头周围癌及乳头下部癌，其中以乳头周围癌最为多见[2]。发生部位不同其临床表现也不典型且各不相同，从而易造成误诊或者漏诊，但临床上多以出血、肠梗阻及黄疸等症状最为常见。在组织学上，十二指肠癌以腺癌为主，据统计其在原发十二指肠癌中占81.4%，少数病例癌表现为胶样癌；但有时也有极少数的个别十二指肠癌表现为印戒细胞癌、小细胞癌、腺鳞癌[5-6]、伴神经内分泌方向分化的癌[7]及鳞状细胞癌。

原发性十二指肠鳞状细胞癌极少见，国内外一些学者先后做了相关报道，目前争论的焦点在于PDSCC的起源问题：是否来源于十二指肠黏膜腺上皮发生的鳞状上皮化生或者是来源于十二指肠乳头附近的胆总管上皮细胞发生的鳞状上皮化生，还是来源于十二指肠黏膜基底层多潜能干细胞向鳞状上皮分化。1979年Sidhu[8]提出消化道的内分泌细胞主要来源于黏膜上皮的干细胞的观点。随着免疫组织化学染色技术和分子生物技术的发展，在小肠上皮肿瘤中发现腺上皮细胞和内分泌细胞同时存在于一个瘤体内，进一步说明二者之间存在密切联系。Burke等[9]及Barnhil等[10]先后提出十二指肠黏膜基底层多潜能干细胞三向分化成癌(同时存在腺样、鳞状细胞和神经内分泌成分)的观点。为了明确原发性十二指肠鳞状细胞癌的组织来源，我们通过免疫组织化学染色对梭形肿瘤细胞进行多种抗体标记发现，梭形肿瘤细胞除表达鳞癌相关高分子角蛋白CK5/6外，还同时表达腺癌相关低分子角蛋白CK8/18及神经内分泌癌相关蛋白Syn、NSE、CgA，这提示我们该例十二指肠梭形细胞鳞癌的组织来源于十二指肠黏膜腺上皮细胞发生鳞状上皮化生及十二指肠乳头附近的胆总管腺上皮细胞发生鳞状上皮化生的可能性极小，而来源于十二指肠黏膜基底层多潜能干细胞向鳞状上皮、腺上皮及神经内分泌方向分化的可能性极大。因此，我们支持原发性十二指肠鳞状细胞癌来源于十二指肠黏膜基底层多潜能干细胞向鳞状上皮、腺上皮及神经内分泌方向分化的观点。与Barnhill等[10]对原发性十二指肠癌的组织学来源的研究结果一致。

但在我们的实验中该例肿瘤在组织形态学上只有梭形细胞鳞癌的特点，没有腺癌及神经内分泌癌的形态学特点；而免疫组化染色蛋白定性实验显示梭形肿瘤细胞同时表达鳞癌、腺癌及神经内分泌癌相关蛋白，两种实验数据不统一，存在矛盾，这也是我们困惑的问题。如果用“十二指肠黏膜腺上皮细胞发生鳞状上皮化生及十二指肠乳头附近的胆总管腺上皮细胞发生鳞状上皮化生”，这一观点很难解释这一矛盾现象；而用“干细胞理论”可以解释这一现象，并可能存在以下几种病理生理病变化过程：(1)该例肿瘤可能来源于十二指肠黏膜基底层的同一个干细胞，由于受到胃肠道不同时间不同环境因素不同程度的影响，而向鳞癌、腺癌及神经内分泌癌等不同肿瘤同时或先后发生不同程度不同方向分化；(2)该肿瘤可能最初仅发生鳞癌变，以后在鳞癌的基础上再续发不同程度的腺癌、神经内分泌癌方向改变；(3)该肿瘤可能最初仅发生腺癌变，以后在腺癌的基础上再续发不同程度的鳞癌、神经内分泌癌方向改变。是否存在着这三种病理生理病变现象，需进一步探讨，也许可以通过检测mRNA、蛋白定量、电镜技术及体外细胞模型能够证明这些病理生理病变化过程，遗憾的是由于条件的限制，我们没有从mRNA、蛋白表达水平及体外细胞模型方面做进一步的研究。

[1]同济医科大学病理学教研室,中山医科大学病理学教研室.外科病理学[M].2版.武汉:湖北科学技术出版社,1999:128-129.

[2]武忠弼,杨光华.中华外科病理学[M].2版.北京:人民卫生出版社,2002:698-699.

[3]Rudan N,Nola P,Popovic S,Primary adenocarcinoma of the duodenum,Report of two cases[J].Cancer,1984,54(6):1105-1109.

[4]Spira IA,GhaziA,Wolff WI.Primary adenocarcinoma of the duodenum[J].Cancer,1977,39(4):1721-1726.

[5]Griesser GH,Schumacher U,Elfeldt R,et al.Adenosquamous carcinoma of the ileum,Report of a case and review of the literure[J]. VichowsArchAPatholAnat Histopethol,1985,406(4):483-487.

[6]Ng FC,Ang HK,Chng HC.Adenosquamous carcinoma of the ileum-a case report[J].Singapore Med J,1993,34(4):381-382.

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[9]Burke AB,Shekitka KM,Sobin LH.Small cell carcinoma of the large intes-tine[J].Am J Clin Pathol,1991,95(3):315-321.

[10]Barnhill M,Hess E,Guccion JG,et al.Tripartite differentiation in a carcinoma of the duodenum[J].Cancer,1994,73(2):266-272.

Histomorphology and protein expression in primary duodenum spindle cell squamous carcinoma.

ZHOU Ying-ze,LUO Hong-bo,WANG Xi-ping,WANG Gui-fen.Department of Pathology,Sichuan Anyue County People's Hospital,Anyue 642350,Sichuan,CHINA

Objective To explore the histomorphology and protein expression characteristics of the primary duodenum spindle cell squamous carcinoma,and determine its histological origin,and provide comprehensive understanding in the awareness and diagnosis of this disease.MethodsHE staining was used to understand the histomorphology features of the primary duodenum spindle cell squamous carcinoma,and immunohistochemistry staining was applied to detect the protein expression.ResultsThe HE staining showed pleomorphism fusiform tumor cells in the mucosa,submucosa,and muscular,with a few atypical intercellularbridge and keratin pearl.And the immunohistochemical staining revealed fusiform tumor cell area as follows:(1)staining in cytoplasm:CK5/6(3+),CEA(3+),CK8/ 18(2+),Syn(+),NSE(+),CgA(+)and S-100 protein(+);(2)staining in nuclei:Ki-67(3+);(3)negative in CD34 and CD117.ConclusionThe primary duodenum spindle cell squamous carcinoma arised from the multipotent stem cell in the basal layer of the mucosa duodenum.

Duodenum spindle cell squamous carcinoma;Histomorphology;Protein expression;Stem cell

R735.3+1

A

1003—6350（2014）10—1532—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.10.0594

2013-12-16)

王桂芬。E-mail：wangguifen121085@163.com