肠炎沙门氏菌SDA—琼脂糖凝胶电泳检测技术研究

尼秀媚　魏晓棠

摘要[目的] 建立肠炎沙门氏菌的SDA快速检测方法。[方法] 根据肠炎沙门氏菌invA基因片段设计链置换扩增（SDA）引物， 建立肠炎沙门氏菌的SDA快速检测方法， 并对设计的引物的灵敏度和特异性进行研究。[结果] 成功建立了肠炎沙门氏菌的SDA快速检测方法，SDA反应成功扩增了目标序列。建立的SDA检测技术对肠炎沙门氏菌的检测灵敏度达到7.0×103 cfu/ml，且特异性良好。[结论] 试验选取的序列和引物具有较高的特异性，可用于肠炎沙门氏菌的特异性检测。

关键词 肠炎沙门氏菌；链置换扩增；琼脂糖凝胶电泳

中图分类号S852.6文献标识码A文章编号0517-6611（2014）22-07443-02

人类肠炎沙门氏菌发病率持续增高，已引起了人们的广泛关注，并成为农业生产和食品安全的重要研究课题之一[1]。沙门氏菌食物中毒约占细菌性食物中毒的42.6%～60%，世界贸易组织（WTO）已将沙门氏菌列为具有中等危害和严重危害的食物传播性病原[2]，而经蛋传播是肠炎沙门氏菌感染症的最重要传播途径之一。鸡蛋是老百姓餐桌上必不可少的食物之一，因此对肠炎沙门氏菌的检测就显得尤为重要[3]。

目前，肠炎沙门氏菌的检测方法有PCR技术、ELISA方法、LAMP方法等，各种方法既有优点，也有缺点。链替代扩增技术（SDA）最早是由Walker等于1992年开发，这是一种基于酶促反应的DNA 体外等温扩增技术，主要利用限制性内切酶剪切DNA 识别位点的能力和DNA 聚合酶在切口处向3延伸并置换下游序列的能力，在等温条件下进行扩增。整个过程由准备单链DNA 模板、生成两端带酶切位点的目的DNA 片段、SDA 循环扩增3 个步骤组成[4]。SDA 技术的突出优点是扩增效率高，反应时间短，目标基因能在15 min 内扩增109～1010倍[5]。笔者采用SDA方法[6-7]用2对引物对肠炎沙门氏菌进行检测，建立肠炎沙门氏菌的SDA快速检测方法。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1 菌株。试验所用的7株肠炎沙门氏菌及其近缘菌株购自中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC），具体见表1；标准菌株分别购自美国典型菌种保藏中心（ATCC）和中国医学细菌保藏管理中心（CMCC）。

1.1.2培养基。LB培养基：10 g/L蛋白胨、5 g/L酵母提取物、10 g/L NaCl；LB固体培养基：在LB培养基中加入15 g琼脂粉。