无花果叶和博落回叶提取液对松材线虫的毒杀作用

秦丹　杜志雯　闫金秀　武培

摘要[目的]研究无花果叶和博落回叶几种不同有机溶剂提取液对松材线虫的杀虫活性。[方法]采用浸渍生测法研究了无花果叶和博落回叶甲醇、乙醇、乙醚、丙酮4种分析纯有机溶剂提取液对松材线虫的抑制作用。[结果]无花果叶和博落回叶的不同溶剂提取液均对松材线虫有抑制作用，其中无花果叶提取液浓度在200 mg/ml时，甲醇提取液的松材线虫死亡率（54.5%）最高；博落回叶提取液浓度在200 mg/ml时，蒸馏水对照组和甲醇提取液在72 h校正死亡率分别达到94.4%和88.9%，在20 mg/ml时2种溶剂提取液校正死亡率也分别达到73.3%和67.6%。[结论]为新型杀松材线虫药剂的综合开发利用提供了理论依据。

关键词无花果；博落回；提取物；松材线虫；毒杀作用

中图分类号S482.39文献标识码A文章编号0517-6611（2014）22-07412-02

松材线虫病是我国二类检疫病害，它是由松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus）寄生在松树体内所引起的一种毁灭性病害。松材线虫主要危害日本黑松、马尾松、西黄松、欧洲赤松、海岸松和黄山松等松属植物[1]。目前对松材线虫有毒杀作用的化学物质由于水溶性、内吸性差、结构复杂以及合成困难、毒性高、成本高等原因影响实际应用，迫切需要研发出经济环保的新型杀松材线虫药剂。

博落回（Macleaya cordata），又名落回、号筒草等，为多年生大型草本，基部灌木状，主要分布在日本和我国淮河以南。茎叶中的生物碱对蝇蛆[2]和粪线虫有较好的灭杀活性[3]，叶中分离得到的血根碱能杀灭鱼类指环虫[4]，具有良好的抑菌活性。无花果（Ficus carica Linn），属于桑科（Moraceae）榕属（Ficus），叶片宽大，表面光滑，具有抗病毒、抗菌、降血糖、降血脂、抗肿瘤、降血压、治疗白癜风等作用[5]，其所含化学成分有呋喃香豆素、补骨脂素、黄酮、果胶、香柠檬内酯、树脂、糖类和VC等[6-9]，是一种具有开发应用前景的资源。笔者利用不同溶剂对无花果叶和博落回叶进行了粗提，并对制成的提取液进行了杀松材线虫活性研究，以期为新型杀松材线虫药剂的综合开发利用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1材料 供试无花果叶和博落回叶采自安徽科技学院；供试线虫从安徽省凤阳县病区松树分离，在25 ℃培养箱中用玉米粒培养基培养的盘多毛孢（Pestalotia sp.）培养15 d后，用改良贝曼漏斗法分离收集线虫。

1.2方法

1.2.1 无花果粗提液的制备。无花果鲜叶用清水洗净泥土，取10 g晾干后的鲜叶剪碎于研钵中，加少许石英砂和提取剂，在冷水中充分研磨，完全转移至500 ml锥形瓶中。加入150 ml提取剂，用超声波振荡器处理10 min，用保鲜膜封口，静置过夜。然后将提取液在真空抽滤机上抽滤，滤渣再加入50 ml提取剂，轻轻摇晃并静置30 min后过滤，合并滤液，制得粗提取液[10]。

1.2.2 博落回粗提液的制备。因博落回有毒，处理材料时要戴手套，洗净泥土，剪去茎。取10 g晾干后的鲜叶剪碎于研钵中，加少许石英砂和提取剂，在冷水中充分研磨，完全转移至500 ml锥形瓶中。加入150 ml提取剂，用超声波振荡器处理10 min，用保鲜膜封口，静置过夜。然后将提取液在真空抽滤机上抽滤，滤渣中再加入50 ml提取剂，轻轻摇晃并静置30 min后过滤，合并滤液，制得粗提取液。

1.2.3 提取液的浓缩。将粗提取液倒入蒸发瓶中，在旋转蒸发仪上蒸发浓缩至黏稠状，用少量蒸馏水多次冲洗蒸发瓶，将叶的提取液完全转移到容量瓶中，用蒸馏水定容。无花果叶提取液定容至50 ml，配制成相当于无花果鲜叶200 mg/ml的溶液；博落回叶提取液分别定容至50和500 ml的溶液，配制成相当于博落回鲜叶200和20 mg/ml的溶液，摇匀，置于4 ℃冰箱中备用[11]。

1.2.4杀线虫活性的测定。采用浸渍生测法[11]。取3 ml提取物加入直径为3 cm的培养皿，向培养皿中挑入大小一致、生长状态良好的松材线虫30条，每个培养皿作为1个处理，每处理3个重复，对照为蒸馏水。加盖，置于25 ℃培养箱中培养24、48、72 h，用体式显微镜（COVS50G）检查线虫死亡或存活数量[12]。各处理校正死亡率按Abbott公式计算，按照文献[13]方法对杀线虫活性强弱进行如下分级：“-”表示校正死亡率≤10%，无杀线虫活性；“+”表示校正死亡率为10%～30%，杀线虫活性弱；“++”表示校正死亡率为30%～50%，杀线虫活性中等；“+++”表示校正死亡率为50%～80%，杀线虫活性较强；“++++”表示校正死亡率>80%，杀线虫活性强。通过SAS（V6.2）程序求解毒力回归方程。

2结果与分析

2.1 200 mg/ml无花果叶不同溶剂提取液对松材线虫的毒力 由表1可知，200 mg/ml无花果叶不同溶剂提取液处理24 h，只有甲醇提取液有杀线虫活性，72 h后4种溶剂提取液