HPLC—UV法测定黄芪干燥根中黄芪甲苷的含量

姜丽丽　张传领　苏丽娟　王秀娟　牛丽丽　温建勋

摘要[目的]建立黄芪干根中HPLC-UV法测定黄芪甲苷的方法，同时比较蒙古黄芪、野生黄芪和膜荚黄芪3种不同来源样本的黄芪甲苷含量。[方法]采用HPLC-UV法，色谱柱为Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm），流动相为乙腈∶水（32∶68），流速1.0 ml/min，检测波长203 nm。[结果]黄芪甲苷在0.05～0.50 mg/ml范围内线性关系良好（ r=0.999），平均回收率为98.216%（RSD=2.85%） ；不同来源黄芪甲苷含量比较结果为野生>膜荚≈蒙古。[结论]建立的HPLC-UV法测定黄芪甲苷含量相对稳定，方法简便，为今后黄芪干根中黄芪甲苷含量的测定提供了方法参考。

关键词HPLC-UV；黄芪甲苷；含量；干燥根

中图分类号S567文献标识码A文章编号0517-6611（2014）22-07381-03

30黄芪为常用的中药材之一，始载于《神农本草经》，我国历版药典均有收载。黄芪是豆科植物蒙古黄芪[Astragalus membranaceus（Fisch.） Bge.var.mongholicus（Bge.） Hsiao]或膜荚黄芪[Astragalusmembranaceus（Fisch.）Bge.]的干燥根，味甘性微温，具有补气固表、利尿脱毒、排脓、敛疮生肌之功效[1]。黄芪中主要成分为皂苷类、黄酮类、多糖类等， 其中的黄芪甲苷是黄芪药材中的重要活性成分，具有抗肿瘤、抗炎、清除自由基、增强免疫力、降糖和改善心血管疾病等作用[2-4]。黄芪甲苷的含量是评价黄芪及其制剂质量的重要指标，且许多中成药也以黄芪甲苷作为该品种的指示成分，在《中国药典》中黄芪甲苷被作为黄芪质量检测的标志物。笔者在前人研究[5-6]的基础上，试用HPLC-UV法测定黄芪干燥根中的黄芪甲苷含量，同时对野生、膜荚、蒙古3种不同来源的黄芪样本进行了黄芪甲苷含量比较。

1材料与方法

1.1 材料与试剂

1.1.1 材料。人工栽培样本为2年生的来自内蒙古兴和、达茂旗、赤峰（蒙古黄芪）、兴安盟（膜荚黄芪）的黄芪干燥根以及来自甘肃的黄芪干根切片（成品）；野生黄芪为采自内蒙古武川县的多年生黄芪。

1.1.2 试剂。黄芪甲苷对照品（购于中国药品生物制品检定所，批号：110781-200613），D101型大孔吸附树脂（购自沧州宝吸附材料有限公司），色谱级甲醇、色谱级乙腈、水饱和正丁醇、氨水溶液、去离子纯水、无水乙醇。

1.1.3仪器及耗材。TL2010高通量组织研磨仪、旋转蒸发仪（RV10）、岛津高效液相色谱仪（LC20A型，紫外检测器）、电子天平、水浴锅、超声波清洗器、索式提取器、玻璃层析柱、圆底烧瓶、分液漏斗、0.45 μm虑器等。

1.2 试验方法

1.2.1 黄芪甲苷的制备。研磨后精密称取4 g黄芪粉末于索式提取器中，按药典[1]的方法提取，用5 ml色谱级甲醇定容，最后用0.45 μm滤器过滤于棕色样品瓶中，4 ℃保存备用。

1.2.2 对照品溶液制备。精密称取黄芪甲苷0.002 5 g，加甲醇定容至5 ml容量瓶中，摇匀。用0.45 μm滤器过滤后，转至棕色瓶中4 ℃保存。

1.2.3 色谱条件与系统适用性。 色谱柱为Kromail C18柱（250 mm×4.6 mm），流动相为乙腈-水（32∶68），流速为1.0 ml/min，检测波长为203 mm，柱温箱35 ℃。

1.2.4 测定法。自动进样器吸取对照溶液和供试品溶液各20 μl上样，进入高效液相色谱仪，测定，记录色谱峰面积，以外标一点法计算含量。

1.2.5方法学的建立。从线性范围、精密度、稳定性、重复性、回收率5个方面对HPLC-UV法测定黄芪甲苷含量进行方法学考察。

1.2.6 样品含量测定。用上述建立的方法，对不同地区及来源的黄芪样品进行甲苷含量测定，进一步比较其含量差异。

2结果与分析

2.1线性范围 精密称取黄芪甲苷标准品，适量，加甲醇制成对照品溶液（相当于每1 ml含0.5 mg黄芪甲苷），精密量取1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 ml分别置于10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。取上述溶液各20 μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以黄芪甲苷峰面积为纵坐标Y、溶液浓度为横坐标X，得到回归方程为y=2×106X-5 940，R2=0.999（n=5），结果表明，在0.05～0.50 mg/ml，范围内，黄芪甲苷对照品浓度与色谱峰面积值呈良好的线性关系（图1）。