乳清蛋白质粉免疫调节作用实验研究

李彬 覃光球 张洁宏 何励 黄潇潇

【摘 要】目的：评价乳清蛋白质粉的免疫调节作用。方法：以3334、1667、834 mg／kg?BW 三个剂量组的乳清蛋白质粉对小鼠连续灌胃30天，进行抗体生成细胞、碳廓清、NK细胞活性等7项免疫指标的测定。结果：样品对小鼠的体重增长、脏体重比值和NK细胞活性无明显影响；样品能促进小鼠的脾淋巴细胞增殖转化作用、迟发型变态反应和抗体生成细胞增殖，提高小鼠的血清溶血素水平，促进小鼠的单核-巨噬细胞的吞噬功能。结论：乳清蛋白质粉具有增强免疫力功能。

【关键词】乳清蛋白质；免疫调节

【中图分类号】R151.2 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2014）03-01106-02

近年来，牛奶中的特定成分由于具有较直观的保健效果而逐渐受到人们的重视，甚至被开发成保健食品[1]。乳清蛋白是生產奶酪和凝乳过程中的副产品，再被认清其营养和保健作用之前，一度被人们当成垃圾产物。牛奶中主要含有两类蛋白质，一类是酪蛋白，另一类是乳清蛋白。乳清蛋白质含有一系列具有提高免疫力功效的生物活性物质，包括乳铁传递蛋白、?-乳球蛋白、?-乳白蛋白、糖聚肽和免疫球蛋白，等[2]。除此之外，乳清蛋白还具有抗氧化、抗高血压、抗肿瘤、降血脂、抗病毒、抗细菌等方面的作用[3]。乳清蛋白已经被用于临床上对癌症、艾滋病、乙肝、心血管疾病、骨质疏松症等疾病的辅助治疗试验之中，并收到了一定的疗效[3]。本文通过脾淋巴细胞转化、迟发型变态反应、抗体生成细胞、血清溶血素、碳廓清、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞、NK细胞活性等7项小鼠免疫指标的测定，研究以乳清浓缩蛋白为主要成分的乳清蛋白质粉对小鼠免疫功能的影响，为评价其免疫调节作用提供试验依据。

1 材料和方法

1.1 材料

本试验受试物为广州某公司送检的乳清蛋白质粉，受试物为乳黄色粉末，主要成分为乳清浓缩蛋白。生产批号为20090301，成人口服推荐剂量为167 mg/Kg?BW。试验前，用纯净水配制成所需浓度溶液。

1.2 实验动物及实验环境

实验动物选用广西医科大学实验动物中心提供的清洁级健康昆明种小鼠，实验动物生产许可证号为SCXK(桂)2009-0002，实验动物质量合格证号为NO.0001254。实验动物室温度为22～25℃，相对湿度为55%～70%。

1.3实验方法

1.3.1 分组和剂量设置 实验动物240只，体重18-22 g，分5组，每组48只小鼠。其中，第一组进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验、NK细胞活性测定，第二组进行进行迟发型变态反应实验，第三组进行脏/体比值、血清溶血素和抗体生成细胞数测定，第四组进行碳廓清实验，第五组进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。设3334、1667、834 mg/Kg?BW（分别相当于成人口服推荐用量的20、l0和5倍)三个剂量组和1个阴性对照组，每组12只小鼠。以0.1 ml/10 g?BW的体积给予相应剂量组小鼠灌胃，阴性对照组给予等体积纯净水。每天1次，连续灌胃30天。

1.3.2实验方法 采用MTT法检测ConA 诱导的小鼠淋巴细胞增殖转化功能，耳肿胀法检测小鼠的迟发型变态反应、Jerne 改良玻片法检测小鼠抗体生成细胞数、血凝法检测小鼠血清溶血素水平、半体内法检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力、内眦静脉注射法检测碳廓清能力[4]、乳酸脱氢酶测定法检测NK 细胞活性。实验主要参照GB15193-2003的相关试验方法进行[5]。

1.4主要仪器设备和试剂

实验主要仪器设备包括电子分析天平、离心机、洁净工作台、二氧化碳培养箱、恒温水浴箱、显微镜、半自动生化仪、酶标仪等。

实验主要试剂包括绵羊红细胞（SRBC）、Hanks 培养液、RPMI1640 培养液、小牛血清、青霉素、链霉素、刀豆蛋白（ConA）、1％ 冰醋酸、1 mol/L HCL、异丙醇、MTT、DNFB、PBS 缓冲液（pH 7.2～7.4）、补体（豚鼠血清）、SA 缓冲液、琼脂糖、YAC-1 细胞、乳酸锂、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶I、0.2 mol/L Tris-HCL 缓冲液、1％ NP40、印度墨汁、鸡红细胞、Gimsa 染液等。

1.5 数据统计

应用统计软件SPSS 16.0对试验数据进行单因素方差分析和组间比较。

2 结果

2.1 样品对小鼠体重和脏器的影响

实验期间受试动物未见中毒症状，无死亡。各剂量组小鼠的体重、增重、胸腺体重比和脾脏体重比与阴性对照组相比差别无统计学意义（P > 0.05），表明该样品对小鼠的体重增长和免疫器官的脏体比值无明显影响（表1）。