抵当汤对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力的影响

王康锋　张立娟　孙西庆　师冉

[摘要] 目的 观察抵当汤对阿尔茨海默病（AD）大鼠学习记忆能力的影响。 方法 将40只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、安理申组和抵当汤组。采用右侧海马一次性注射聚集态Aβ25-35方法制备AD大鼠模型，造模成功后进行定位航行实验及空间探索实验，之后连续灌胃给药，疗程为8周，用药结束后继续进行Morris水迷宫实验，观察各组大鼠学习记忆能力的改变。 结果 与模型组比较，各给药组大鼠逃避潜伏期明显缩短（P<0.05或P<0.01），抵当汤组较安理申组缩短更明显（P<0.05）。同时药后安理申组和抵当汤组大鼠跨台次数较实验前明显增加（P<0.05），与安理申组相比抵当汤组增加更显著（P<0.05）。 结论 抵当汤可以改善AD大鼠的学习记忆能力。

[关键词] 抵当汤；阿尔茨海默病；学习记忆

[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）03（b）-0016-03

阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）是一种以进行性认知障碍和记忆力损害为主要临床表现的中枢神经系统退变性疾病，其典型的病理学特征是老年斑（SP）、神经原纤维缠结（NFTs）和神经元丢失[1]。本病发病率高，危害大，目前中国60岁以上人群AD发病率已高达3%～5%[2]，给家庭和社会带来了沉重的负担。由于发病机制尚未完全阐明，本病尚缺乏有效的防治手段，积极寻找疗效确切的治疗药物是目前医务工作者的迫切任务。近年来，受张仲景蓄血证理论的启迪，采用抵当汤治疗阿尔茨海默病取得了理想的临床疗效[3]。但本方治疗阿尔茨海默病的基础研究目前还十分薄弱，疗效机制尚未完全阐明。本研究通过Aβ25-35海马区注射建立AD动物模型并用经方抵当汤进行干预，观察本方对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力的影响，以期为其临床应用提供客观依据。

1 材料与方法

1.1 药物与试剂

抵当汤组成：桃仁12 g，大黄9 g，水蛭6 g，虻虫6 g。药物由本院药剂科提供，水煎后浓缩制成每毫升煎液含生药3 g，高温消毒灭菌，置于4℃冰箱保存备用。多奈哌齐[安理申，卫材（中国）药业有限公司，批号130536A]。Aβ25-35购于Sigma公司。

1.2 仪器

脑立体定向仪（江湾1号C型，上海川沙花木农机厂）；Morris水迷宫（淮北正华生物仪器设备有限公司）。

1.3 动物

雄性Wistar大鼠40只，清洁级，鼠龄8～12周，体质量200～250 g，由山东中医药大学实验动物中心提供。

1.4 实验方法

1.4.1 动物分组及给药 将大鼠40只随机分为假手术组、模型组、安理申组、抵当汤组，每组10只。治疗药物及对照药物均根据临床用药情况，按成人（60 kg）日用药量的10倍量折算成大鼠使用剂量。造模成功后第2天开始连续灌胃给药，1次/d。假手术组及模型组用等量生理盐水灌胃。疗程为8周。

1.4.2 动物模型的建立[4] 用10%水合氯醛腹腔注射（3～3.5 ml/kg）麻醉大鼠。将头部固定在立体定向仪上，剪毛消毒，在头背中部纵向切口，暴露颅骨，参照《大鼠脑立体定位图谱》，选右侧海马为注射区，定位坐标：前囟后3.0 mm，中线右侧2.0 mm，硬膜下2.6 mm。在坐标点周围用牙科钻环行钻开颅骨，并分离暴露硬脑膜，缓慢垂直进针至靶点，然后将1 μl Aβ25-35（10 μg/μl）缓慢注入，注射时间5 min，留针5 min，以保证溶液充分弥散，再缓慢撤针。所有操作均在无菌条件下进行，皮肤切开处给予少许青霉素粉剂，缝合切口。

1.4.3 Morris水迷宫实验[5] Morris水迷宫为一恒温圆形水池，直径150 cm，高60 cm，水深35 cm，在水池的上缘等距离地设东、西、南、北4个标记点，以这4个入水点在水面和水桶底部的投影点，将水面和水桶分成4个象限，水温（25±2）℃，实验时保持水池周围参照物、灯光强度不变。①定向航行实验：大鼠术前1周进行Morris水迷宫训练，将平台设置于东北象限，每天将实验动物从东、南、西、北4个入水点分别放入水池中。记录90 s内动物自入水到找到平台后四肢爬上平台时所需要的时间，作为逃避潜伏期。每天训练一次，共训练5 d，第6天进行测试。②空间探索实验：第7天撤走平台进行空间探索实验，任选一个入水点将大鼠面向池壁放入，记录在90 s内大鼠跨越原平台的次数。给药完毕后训练3 d后再进行定位航行实验及空间探索实验。

1.5 统计学处理

采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析，样本均数间比较采用方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 定位航行实验结果

药物干预后安理申组、抵当汤组东、南、西北给方向逃避潜伏期均短于模型组（P<0.05或P<0.01），抵当汤组东向潜伏期和北向潜伏期短于安理申组，差异有统计学意义（P<0.05）；南向潜伏期和西向潜伏期分别较安理申组缩短，但差异无统计学意义（P>0.05）（表1）。

表1 给药后Morris水迷宫实验各方向逃避潜伏期情况的比较（s，x±s）

与模型组比较，*P<0.05，#P<0.01；与安理申组比较，△P<0.05

2.2 空间探索实验结果

用药后安理申组和抵当汤组大鼠跨台次数均较实验前明显增加，差异有统计学意义（P<0.05）；与安理申组相比抵当汤组增加更显著，差异有统计学意义（P<0.05）；假手术组和模型组较实验前无明显变化（P>0.05）（表2）。

表2 实验前后各组大鼠跨台次数比较（次，x±s）

与同组用药前比较，*P<0.05；与安理申组比较，△P<0.05

3 讨论

抵当汤是医圣张仲景创立的理血名方，由水蛭、虻虫、桃仁、大黄四味药物组成，主治下焦蓄血证。《伤寒论》记载“太阳病六七日，表证犹存，脉微而沉，反不结胸，其人发狂者，以热在下焦，少腹当硬满，小便自利者，下血乃愈，所以然者，以太阳随经，瘀热在里故也，抵当汤主之。”“太阳病，身黄，脉沉结，少腹硬，小便不利者，为无血也，小便自利，其人如狂，血证谛也，抵当汤主之。”本方当时是为下焦蓄血所设，但后世医家大大拓宽了它的应用范围，目前已应用于阿尔茨海默病、高血压脑出血、外伤性脑梗死、顽固性失眠、肿瘤、慢性前列腺炎、糖尿尿病肾病、肾静脉血栓形成等几十种疾病。我们近年来受本方主治中“喜忘”“如狂”等症状的启示，认为瘀血内阻是阿尔茨海默病的重要病机[6-7]，采用抵当汤治疗阿尔茨海默病，收效满意。有研究报道[3]，本方治疗阿尔茨海默病总有效率达80.0%，明显优于西药对照组的70.0%（P<0.01）；且治疗组MMSE评分、ADAS-cog评分改善情况均明显优于对照组（P<0.05）。

现代药理研究表明抵当汤能通过改善模型大鼠的血液流体力学状态和血液“凝”的病理状态，下调内皮素mRNA，提高体内细胞转化率等达到抗衰老的作用[8]。温晓辉等[9]认为抵当汤通过调节血脂，减少细胞黏附分子的生成，以发挥保护内皮功能的作用，从而能防治动脉粥样硬化的形成，减少各种心脑血管疾病的发生。本研究表明抵当汤可以显著改善阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力，缩短Morris水迷宫实验逃避潜伏期，增加跨台次数，作用优于对照药多奈哌齐，研究结果与文献报道吻合[10]。其作用机制尚有待进一步深入研究，有学者认为可能与本方具有抗氧化、清除氧化代产物、改善血液流变学和增加脑血流量等作用有关[10]。

[参考文献]

[1] 樊华.糖尿病与阿尔茨海默病发病风险相关性研究进展[J].实用老年医学，2010，24（4）：342-345.

[2] 陈可冀.老年性痴呆基础和临床研究进展思考[J].中国中西医结合杂志，1998，18（6）：324-326.

[3] 王康锋，张立娟.抵当汤加减治疗老年性痴呆疗效观察[J].中国中医药信息杂志，2012，19（10）：74-75.

[4] 蔡高梅，毕建忠.TRAIL在Aβ25-35诱导的大鼠海马组织中的表达[J].医学临床研究，2008，25（10）：1856-1858.

[5] 吕诚，胡小令，祝高春，等.β-淀粉样蛋白所致模拟老年性痴呆动物模型的建立[J].江西医学院学报，2005，45（1）：28，39.

[6] 王康锋.老年性痴呆病机及治法探讨[J].中国民间疗法，2011，19（10）：8-9.

[7] 王康锋.中医治疗老年性痴呆的思路与方法[J].河南中医，2011，31（12）：1350-1351.

[8] 施雪音.抵当汤与桃核承气汤抗衰老作用比较的实验研究[D].杭州：浙江中医药大学，2010.

[9] 温晓辉，潘丽，王鑫国，等.抵当汤对去卵巢大鼠血脂异常及ET-1mRNA，VCAM-1mRNA表达的影响[J].河北中医，2010，32（5）：751.

[10] 夏卫军，金妙文，张莉.抵当汤治疗老年期血管性痴呆的实验研究[J].中药药理与临床，2000，16（4）：6-8.

（收稿日期：2014-02-08 本文编辑：郭静娟）

3 讨论

抵当汤是医圣张仲景创立的理血名方，由水蛭、虻虫、桃仁、大黄四味药物组成，主治下焦蓄血证。《伤寒论》记载“太阳病六七日，表证犹存，脉微而沉，反不结胸，其人发狂者，以热在下焦，少腹当硬满，小便自利者，下血乃愈，所以然者，以太阳随经，瘀热在里故也，抵当汤主之。”“太阳病，身黄，脉沉结，少腹硬，小便不利者，为无血也，小便自利，其人如狂，血证谛也，抵当汤主之。”本方当时是为下焦蓄血所设，但后世医家大大拓宽了它的应用范围，目前已应用于阿尔茨海默病、高血压脑出血、外伤性脑梗死、顽固性失眠、肿瘤、慢性前列腺炎、糖尿尿病肾病、肾静脉血栓形成等几十种疾病。我们近年来受本方主治中“喜忘”“如狂”等症状的启示，认为瘀血内阻是阿尔茨海默病的重要病机[6-7]，采用抵当汤治疗阿尔茨海默病，收效满意。有研究报道[3]，本方治疗阿尔茨海默病总有效率达80.0%，明显优于西药对照组的70.0%（P<0.01）；且治疗组MMSE评分、ADAS-cog评分改善情况均明显优于对照组（P<0.05）。

现代药理研究表明抵当汤能通过改善模型大鼠的血液流体力学状态和血液“凝”的病理状态，下调内皮素mRNA，提高体内细胞转化率等达到抗衰老的作用[8]。温晓辉等[9]认为抵当汤通过调节血脂，减少细胞黏附分子的生成，以发挥保护内皮功能的作用，从而能防治动脉粥样硬化的形成，减少各种心脑血管疾病的发生。本研究表明抵当汤可以显著改善阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力，缩短Morris水迷宫实验逃避潜伏期，增加跨台次数，作用优于对照药多奈哌齐，研究结果与文献报道吻合[10]。其作用机制尚有待进一步深入研究，有学者认为可能与本方具有抗氧化、清除氧化代产物、改善血液流变学和增加脑血流量等作用有关[10]。

[参考文献]

[1] 樊华.糖尿病与阿尔茨海默病发病风险相关性研究进展[J].实用老年医学，2010，24（4）：342-345.

[2] 陈可冀.老年性痴呆基础和临床研究进展思考[J].中国中西医结合杂志，1998，18（6）：324-326.

[3] 王康锋，张立娟.抵当汤加减治疗老年性痴呆疗效观察[J].中国中医药信息杂志，2012，19（10）：74-75.

[4] 蔡高梅，毕建忠.TRAIL在Aβ25-35诱导的大鼠海马组织中的表达[J].医学临床研究，2008，25（10）：1856-1858.

[5] 吕诚，胡小令，祝高春，等.β-淀粉样蛋白所致模拟老年性痴呆动物模型的建立[J].江西医学院学报，2005，45（1）：28，39.

[6] 王康锋.老年性痴呆病机及治法探讨[J].中国民间疗法，2011，19（10）：8-9.

[7] 王康锋.中医治疗老年性痴呆的思路与方法[J].河南中医，2011，31（12）：1350-1351.

[8] 施雪音.抵当汤与桃核承气汤抗衰老作用比较的实验研究[D].杭州：浙江中医药大学，2010.

[9] 温晓辉，潘丽，王鑫国，等.抵当汤对去卵巢大鼠血脂异常及ET-1mRNA，VCAM-1mRNA表达的影响[J].河北中医，2010，32（5）：751.

[10] 夏卫军，金妙文，张莉.抵当汤治疗老年期血管性痴呆的实验研究[J].中药药理与临床，2000，16（4）：6-8.

（收稿日期：2014-02-08 本文编辑：郭静娟）

3 讨论

抵当汤是医圣张仲景创立的理血名方，由水蛭、虻虫、桃仁、大黄四味药物组成，主治下焦蓄血证。《伤寒论》记载“太阳病六七日，表证犹存，脉微而沉，反不结胸，其人发狂者，以热在下焦，少腹当硬满，小便自利者，下血乃愈，所以然者，以太阳随经，瘀热在里故也，抵当汤主之。”“太阳病，身黄，脉沉结，少腹硬，小便不利者，为无血也，小便自利，其人如狂，血证谛也，抵当汤主之。”本方当时是为下焦蓄血所设，但后世医家大大拓宽了它的应用范围，目前已应用于阿尔茨海默病、高血压脑出血、外伤性脑梗死、顽固性失眠、肿瘤、慢性前列腺炎、糖尿尿病肾病、肾静脉血栓形成等几十种疾病。我们近年来受本方主治中“喜忘”“如狂”等症状的启示，认为瘀血内阻是阿尔茨海默病的重要病机[6-7]，采用抵当汤治疗阿尔茨海默病，收效满意。有研究报道[3]，本方治疗阿尔茨海默病总有效率达80.0%，明显优于西药对照组的70.0%（P<0.01）；且治疗组MMSE评分、ADAS-cog评分改善情况均明显优于对照组（P<0.05）。

现代药理研究表明抵当汤能通过改善模型大鼠的血液流体力学状态和血液“凝”的病理状态，下调内皮素mRNA，提高体内细胞转化率等达到抗衰老的作用[8]。温晓辉等[9]认为抵当汤通过调节血脂，减少细胞黏附分子的生成，以发挥保护内皮功能的作用，从而能防治动脉粥样硬化的形成，减少各种心脑血管疾病的发生。本研究表明抵当汤可以显著改善阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力，缩短Morris水迷宫实验逃避潜伏期，增加跨台次数，作用优于对照药多奈哌齐，研究结果与文献报道吻合[10]。其作用机制尚有待进一步深入研究，有学者认为可能与本方具有抗氧化、清除氧化代产物、改善血液流变学和增加脑血流量等作用有关[10]。

[参考文献]

[1] 樊华.糖尿病与阿尔茨海默病发病风险相关性研究进展[J].实用老年医学，2010，24（4）：342-345.

[2] 陈可冀.老年性痴呆基础和临床研究进展思考[J].中国中西医结合杂志，1998，18（6）：324-326.

[3] 王康锋，张立娟.抵当汤加减治疗老年性痴呆疗效观察[J].中国中医药信息杂志，2012，19（10）：74-75.

[4] 蔡高梅，毕建忠.TRAIL在Aβ25-35诱导的大鼠海马组织中的表达[J].医学临床研究，2008，25（10）：1856-1858.

[5] 吕诚，胡小令，祝高春，等.β-淀粉样蛋白所致模拟老年性痴呆动物模型的建立[J].江西医学院学报，2005，45（1）：28，39.

[6] 王康锋.老年性痴呆病机及治法探讨[J].中国民间疗法，2011，19（10）：8-9.

[7] 王康锋.中医治疗老年性痴呆的思路与方法[J].河南中医，2011，31（12）：1350-1351.

[8] 施雪音.抵当汤与桃核承气汤抗衰老作用比较的实验研究[D].杭州：浙江中医药大学，2010.

[9] 温晓辉，潘丽，王鑫国，等.抵当汤对去卵巢大鼠血脂异常及ET-1mRNA，VCAM-1mRNA表达的影响[J].河北中医，2010，32（5）：751.

[10] 夏卫军，金妙文，张莉.抵当汤治疗老年期血管性痴呆的实验研究[J].中药药理与临床，2000，16（4）：6-8.

（收稿日期：2014-02-08 本文编辑：郭静娟）