林蛙油中雌激素的化学成分及药理作用研究

王 哲,康 岚,朱键勋,肖井雷,姜大成

(长春中医药大学，长春 130117)

林蛙为脊索动物门两栖纲蛙科动物，中国林蛙全身可入药，特别是林蛙油，林蛙油的药用部位属动物内部器官的干燥输卵管，其占中国林蛙雌蛙总重的15%[1]。林蛙油为滋补良药，其性咸，味甘、平，归肺、肾二经，具有补肾益精、养阴润肺、清热解毒的功效，可用于治疗阴虚体弱、病后失调、神疲乏力、心悸失眠、盗汗不止、痨嗽咳血、产后无乳等症[2-3]。林蛙油中富含有蛋白质、氨基酸、维生素、脂肪酸、磷脂、甾体激素及一些微量元素，其中总蛋白含量占69.2%，糖类占9.8%，脂肪占4.1%，水分占16.1%，其他0.8%[4]。近些年来，越来越多的人们认识到了哈蟆油的营养、保健价值，使其成为了一种驰名中外的名贵食疗性中药，并赋予了其滋补软黄金的美誉。

1 林蛙油中雌激素成分的化学研究

1.1 放免法测定林蛙油中雌激素含量 放射免疫分析(RIA)是以放射性核素标记抗原与反应系统中未标记抗原竞争性结合特异性抗体为基本原理来测定待测样品中抗原量的一种分析方法，其具有灵敏度高，特异性强，测量简单，用血量少，成本低等优点。王春霖[5]采用放射免疫分析方法对哈蟆油中甾体激素进行定量分析，结果测得雌二醇、孕酮和睾酮的含量分别为(52.3±5.8)，(918 7.9±19.4)和(52.3±5.89) pg/100 mg；李成义等[6]利用放免法分析了哈士蟆卵油、哈士蟆卵及哈士蟆油中雌二醇和孕酮的含量,其中哈士蟆油中雌二醇和孕酮的含量分别为102 400 0.0 pmol/L和200.0 nmol/L。

1.2 液相法测定林蛙油中雌激素含量 高效液相色谱法(HPLC)广泛用于复杂成分化合物的微量分析，具有分离效率高，选择性好，检测灵敏度高等特点。2010年刘娟等[7]应用高效液相色谱法测定蛤蟆油中雌二醇的含量，雌二醇在0.001～0.016 μg(r=0.999 7)范围内呈良好线性关系。2010年曹阳等[8]应用RP-HPLC法测定林蛙卵中雌二醇的含量,雌二醇在4.24～50.9 μg/mL范围内相性关系良好(r=0.999)。

1.3 气质法测定林蛙油中激素类含量 气质联用法(GC-MC)具有灵敏度高、速度快、时间短、精密度高及效能高等特点。2010年陈燕超等[9]利用气质法对林蛙油进行了研究，测定出8种甾体类成分，其中测得胆固醇、胆甾-3-酮、胆甾-3,5二烯-7-酮、菜油甾醇、胆甾-4-烯-3-酮、胆甾-4，6-二烯-3-酮、豆甾醇-22，23-二氢及胆甾-8-烯-7-酮的相对含量分别为32.36%、0.925%、2.811%、0.611%、7.657%、1.395%、0.316%和0.768%。

2 林蛙油中雌激素成分的药理研究

2.1 林蛙油对机体生长及性器官的影响 2008年吴朝霞等[10]探讨了林蛙油对去势大鼠血清中雌二醇、孕酮、睾酮及白介素2有升高作用,但对促黄体生成素及促卵泡素有明显抑制作用。张蔚君等[11]报道林蛙油对正常小鼠体质量作用不明显，但可显著抑制体虚小鼠体质量的减轻，并对雌性幼年小鼠有显著促性成熟作用，可使去势幼年大鼠前列腺及睾丸生长。

2.2 林蛙油的抗衰老研究 2012年叶豆丹等[12]报道林蛙油可使免疫力低下的小鼠体内不饱和脂肪酸含量增加，从而达到抗氧化的作用，延缓小鼠衰老。张炜煜等[13]在2012年研究了林蛙油对正常小鼠和衰老模型小鼠体内雌二醇含量及血常规各项指标的分析，得到服用林蛙油对机体的雌二醇含量没有明显作用，但对机体的免疫低下和抗衰老有一定作用[14]。

3 结语

随着世界各国对林蛙油的需求量不断加大，林蛙油作为食品、保健品的安全性也成为了焦点。从而阐明林蛙油所含雌性激素的种类、含量及对人体的影响程度，揭示其营养保健价值和药理作用，为名贵中药材林蛙油的合理应用提供科学依据，为林蛙产业的健康发展及促进其地方产业经济的发展具有重要意义[15]。

[1]姜大成.中国林蛙与哈蟆油[M].长春:吉林科学技术出版社,2010:219.

[2]姜大成,肖井雷.18份东北不同产地哈蟆油的质量评价[J].中药材,2007,30(10):1212.

[3]田春雨,薄建柱,薄海美,等.10份不同产地哈蟆油营养保健价值的评价研究[J].辽宁中医杂志,2009,36(7):1186-1188.

[4]崔桂友.哈蟆油的形态结构观察和化学成分测定[J].生物学杂志,2000,17(l):27-29.

[5]王春霖.哈士蟆油甾体激素定量分析及药理作用[J].中药通报,1985,10(2):44.

[6]李成义,孙文伟,姜熙罗,等.蛤士蟆卵油化学成分的分析[J].中国药学杂志,1994,29(12):712.

[7]刘娟,刘爽,刘程诚.高效液相色谱法测定蛤蟆油中雌二醇的含量[J].辽宁中医杂志,2010,38(1):138-139.

[8]曹阳,张若文,钱忠直,等.RP-HPLC测定林蛙卵中的雌二醇的含量[J].中药新药与临床药理,2010,21(5):540-542.

[9]陈燕超,胡岩,钱忠直,等.GC-MS法对哈蟆油中甾体类化合物的分析[J].长春中医药大学学报,2010,26(5):660-661.

[10]吴朝霞,王晓华,刘桦,等.莪术、哈蟆油对去势后大鼠雌激素水平及受体表达的影响[J].南京医科大学学报,2008,28(5):746-749.

[11]张蔚君,任昕,钱立,等.哈蟆油对生长及性器官的影响[J].沈阳药科大学学报,1998,15(02):136-137.

[12]叶豆丹,王化宇,李星,等.哈蟆油延缓衰老的作用机制研究[J].中国药房,2012,23(47):4419-4421.

[13]张炜煜,李霞,王化宇,等.哈蟆油对小鼠体内雌二醇含量及血常规影响的研究[J].中药材,2012,35(10):1553-1556.

[14]徐英江,田秀慧,张秀珍,等.超高液相色谱串联质谱法对水产品8种雌激素的测定[J].分析测试学报,2010,29(2):152-156.

[15]王玉飞,周凯,李继革.GC/MS/MS法同时测定海产品中四种雌激素残留[J].中国卫生检验杂志,2006,26(1):21-23.