加压提取三七总皂苷体外抗氧化活性成分研究

★ 罗颂武 张旭红

(1.广州市红十字会医院药学部 广东 广州 510240；2. 广东药学院 广东 广州 510006)

三七(Radix Notoginsen)又名田七，为我国传统名贵中药材，明代著名的药学家李时珍称其为“金不换”。三七入药历史悠久，具有散瘀止血、消肿定痛之功效。三七总皂苷是三七主要活性成分，研究表明，皂苷类成分具有抗衰老、降血脂、增强机体免疫力等广泛的药理效应，这主要与皂苷类成分可清除自由基，具有抗氧化活性有关[1]。加压提取是一项新的提取技术，适用于大部分中药材[2,3]。在加压提取中药有效成分的过程中，因施加了一定的压力，在高于沸点时，溶剂仍保持液体状态，使溶剂的溶解性得到改善，同时，可促使药材的细胞壁破裂，其中有效成分的溶出速率加快，明显增加药材有效成分的提取率[4]。本研究采用DPPH法研究加压提取皂苷成分体外抗氧化活性，考察加压提取技术对有效成分活性的影响，以期为加压提取技术提取三七总皂苷提供理论依据。

1 材料

1.1 药材 三七块根(购自广州市医药公司)。

1.2 试剂 三七皂苷Rg1标准品(中国药品生物制品检定所，批号：110745-200312)；DPPH(1，1-二苯基-2-三硝基苯肼)(sigma公司)；乙醇、甲醇香草醛、高氯酸、冰醋酸等均为分析纯。

1.3 仪器 紫外可见分光光度计(北京普析通用，型号：TU-1800)；高压磁力搅拌反应釜(烟台科立化工设备有限公司，型号：PCF-1)；电子天平(赛多利斯，型号：KY-GSA124S)；旋转蒸发仪(上海亚荣，型号：RE-3000)。

2 方法

2.1 三七总皂苷提取法

2.1.1 加压提取法 称取三七干燥粗粉20g,倒入加压提取器中，加50%乙醇(料液比1∶10),于压力4.5kg/cm2、温度60℃下密封加压提取，时间1h，浓缩，挥干溶剂得浸膏备用。

2.1.2 醇回流法 称取三七干燥粗粉20g,加50%乙醇(料液比1∶10)，采用回流法提取，1h/次,共提取2次,合并滤液,浓缩,挥干溶剂得浸膏备用。

2.2 三七总皂苷测定

2.2.1 供试品溶液的制备 精密称取精制三七总皂苷样品24.8mg，置于25mL容量瓶中,加甲醇液至刻度并充分溶解，即得供试品溶液(每mL含样品0.992mg)。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取对照品三七皂苷Rg12.48mg，置于25mL量瓶中,加甲醇液至刻度并充分溶解，即得对照品溶液(每mL含对照品三七皂苷0.0992mg)。

2.2.3 线性关系考察 分别精密吸取0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0mL对照品溶液,挥干溶剂，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2mL。取高氯酸0.8mL，置60℃水浴中加热20min，取出，立即于冷水中冷却，加入5.0mL冰醋酸摇匀。相应试剂随行空白对照,在最大吸收波长560nm处测定吸收度A,以三七皂苷Rg1含量(mg)为横坐标,吸收度A为纵坐标,求回归方程为:Y=5.270X+0.0511,r=0.9995。结果表明：三七皂苷Rg1在0.02425～0.12125mg之间有良好线性关系。

2.2.4 检测波长的选择 吸取标准液,按2.2.3项方法显色,以紫外分光光度计扫描(200～800nm),最大吸收波长(即检测波长)为560nm。

2.3 体外抗氧化活性成分测定 取甲醇稀释上述备用提取物至一定浓度待测。按表1加样，静置30min。分别于最大波长517nm处测定吸收度(A)。平行检测3次，取其平均值。按公式计算清除率Y=[1-(Ai-Aj)/A0]×100%(Ai为加入样品溶液后DPPH溶液的吸光度；Aj为样品溶液与DPPH溶液混合后的吸光度；A0为未加样品溶液时DPPH溶液的吸光度)。

3 结果

不同提取法提取的三七总皂苷含量分别为：醇回流法7.45%、加压提取法8.02%。醇回流法提取的提取物对自由基的清除率为61.4%，采用加压提取技术提取的提取物对自由基的清除率为65.9%。

4 讨论

加压提取是一项新兴的提取技术，具有提取时间短、溶剂消耗少、提取效率高等优点。但由于加压提取是在加压加热条件下进行，可能造成所得有效成分的化学结构发生改变而影响生物活性。因此，加压提取技术应用于中药材的开发，探讨其对中药材有效成分生物活性的影响十分重要。

含三萜类皂苷的提取物对DPPH自由基具有较强的清除能力。从结构上分析，DPPH是一种以氮原子为中心的自由基，其稳定性主要来自共振稳定作用及3个苯环的空间障碍，使结构中的氮原子上不成对电子不易发挥电子成对作用。三萜类皂苷作为自由基清除剂，其结构中的取代基多于甾体类皂苷，单电子易与氮原子配对，破坏DPPH自由基结构稳定作用[5]。

本研究结果显示，加压提取法提取物中三七总皂苷含量高于醇回流法，对自由基的清除率略有提高。因此，与醇回流提取相比，加压提取不影响皂苷类成分的抗氧化活性。加压提取法提取物对自由基的清除率高于醇回流提取物的原因可能是，加压提取法提取物中三七总皂苷含量高于醇回流法，具有抗氧化活性的成分含量增多，自由基清除率也随之增强,其物质基础有待于进一步研究。

[1]岳莉，赵文英，黄巧燕，等.加压提取对皂苷类成分抗氧化及抑菌活性的影响[J]. 青岛科技大学学报(自然科学版)，2011，32(4)：375-378.

[2]ANEKPANKUL T，GOTO M，SASAKI M. Extraction ofanti-cancer damnacanthal from roots of Morinda citrifolia by subcritical water[J]. Separation and Purification Technology，2007，55:343-349.

[3]杨薇薇，张永忠，李成刚，等.加压提取红三叶草总异黄酮的研究[J]. 中草药，2009，40(9)：1 406-1 407.

[4]李鹏，李绍平，付超美，等.加压溶剂提取技术在中药质量控制中的应用[J]. 中国中药杂志，2004，29(8):723-726.

[5]许申鸿，杭瑚．溶剂及pH值对1，1-二苯基-2-苦肼基自由基分析法的影响[J]. 分析测试学报，2000，19(3)：50-52.