225例肝病患者自身抗体检测结果分析

孙萍 唐志琴 穆红

225例肝病患者自身抗体检测结果分析

孙萍 唐志琴 穆红

作者单位：300192 天津市，天津市第一中心医院检验科

目的 探讨各种肝病患者中自身抗体检测在自身免疫性肝病（autoimmune liver disease，ALD）包括自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis，AIH）、原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis，PBC）及原发性硬化性胆管炎（primary sclerosing cholangitis，PSC）中的临床意义。方法选择我院2013年1月－2014年2月消化科、肝胆外科、移植外科等收治的各种肝病患者225例，分为ALD患者组和其他肝病患者组。用间接免疫荧光法检测225份临床血清标本中抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）、抗平滑肌抗体（antismooth muscle antibody，SMA）和抗线粒体抗体（anti－mitochondrial antibody，AMA），用欧蒙印迹法检测抗肝肾微粒体抗体（liver kidney microsomal，LKM）、抗肝细胞溶质抗原Ⅰ型抗体（liver cytosol－1，LC－1）、抗可溶性肝抗原抗体／抗肝胰抗体（anti－soluble liver antigen antibody／liver pancreas antigen，SLA／LP）、AMAⅡ型（AMA－M2）并查阅临床资料，对检测结果作出分析。结果ALD患者组ANA阳性率为77．78%，SMA阳性率为7．41%，AMA阳性率为55．56%，LKM阳性率为7．41%，AMA－M2阳性率为48．15%，SLA／LP阳性率为7．41%，LC－1阳性率为3．70%。其他肝病患者组ANA阳性率为26．26%，SMA阳性率为4．55%，AMA阳性率为11．11%，LKM阳性率为0．51%，AMA－M2阳性率为5．05%，SLA／LP阳性率为2．53%，LC－1阳性率为1．52%。ALD患者组自身抗体阳性率与其他肝病患者组相比较，ANA、AMA、LKM、AMA－M2差异均有统计学意义（P均＜0．05）。结论ALD患者自身抗体检出率较高，为临床医生鉴别病毒性肝炎、ALD及其他肝病提供可靠依据。

肝病；自身免疫性肝病；自身抗体

我国最常见的肝病为病毒性肝炎，但也存在相当数量的非病毒性肝病，包括自身免疫性肝病（autoimmune liver disease，ALD）、脂肪肝、肝硬化、酒精肝、药物性肝炎等。ALD通常包括自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis，AIH），原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis，PBC）、原发性硬化性胆管炎（primary sclerosing cholangitis，PSC），上述二种或三种疾病常同时存在进而成为重叠综合症［1－3］。而自身抗体检测对这些疾病的鉴别诊断、诊断具有重要价值［4］。本文研究收集我院肝病患者225例，对其自身抗体进行检测，并结合临床做出回顾性分析，探讨ALD相关自身抗体的检测意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料选择我院2013年1月至2014年2月消化科、肝胆外科、移植外科等收治的肝病患者225例，其中男性109例，女性116例，年龄1～72岁。包括AIH患者15例，PBC患者10例，PSC患者2例，病毒性肝炎患者28例，脂肪肝患者4例，肝硬化患者81例，酒精肝患者6例，药物性肝炎患者1例，肝占位患者13例，先天性胆道闭锁患者4例，肝损伤患者61例。

1.2 主要仪器和试剂间接免疫荧光法检测采用欧蒙（北京）医学诊断技术有限公司的马赛克间接免疫荧光法检测试剂盒和尼康荧光显微镜。欧蒙印迹法检测仪器为欧蒙（北京）医学诊断技术有限公司的印迹法自动操作仪EUROBlotMaster及其提供的配套试剂盒。

1.3 方法

1.3.1 间接免疫荧光法试剂盒专用于体外检测人血清或血浆中的抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）、抗平滑肌抗体（antismooth muscle antibodies，SMA）和抗线粒体抗体（anti－mitochondrial antibody，AMA）。选择HEp2、猴肝脏的冰冻切片作为抗原的生物薄片，待检血清自1∶100起稀释，与组织细胞孵育30 min；加入异硫氰酸荧光素标记的抗体结合30 min；洗片、封片后荧光显微镜观察结果。组织或细胞内出现特异性绿色荧光、血清稀释度＞1∶100判断为阳性。

1.3.2 欧蒙印迹法用于检测抗肝肾微粒体抗体（liver kidney microsomal，LKM）、抗肝细胞溶质抗原Ⅰ型抗体（liver cytosol－1，LC－1）、抗可溶性肝抗原抗体／抗肝胰抗体（anti－soluble liver antigen antibody／liver pancreas antigen，SLA／LP）、AMAⅡ型（AMA－M2）。将1．5 ml样本缓冲液放入EUROBlot-Master温育槽中的实验反应膜条，温育5 min，之后吸去温育槽中液体。在温育槽中加入1．5 ml已稀释的血清。于室温在摇摆摇床上温育30 min。吸去温育槽中的液体并在摇摆摇床上用1．5 ml已稀释的清洗缓冲液清洗膜条3次，每次5 min。在温育槽中加入1．5 ml已稀释的酶结合物（碱性磷酸酶标记的抗人IgG）。于室温在摇摆摇床上温育30 min。吸去温育槽中的液体并在摇摆摇床上用1．5 ml已稀释的清洗缓冲液清洗膜条3次，每次5 min。在温育槽中分别加入1．5 ml底物溶液，于室温在摇摆摇床上温育10 min。吸去温育槽中液体，用蒸馏水清洗膜条3次，每次1 min。将完全干燥的膜条黏附于塑料膜上观察颜色反应，经扫描仪扫描实验膜条上的条带结果，直接报告靶抗体阴性或阳性。

1.4 统计学处理使用SPSS 18．0统计学软件进行统计分析。计数资料的比较采用χ2检验，以P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ALD患者自身抗体阳性率结果ALD患者自身抗体ANA阳性率为77．78%，SMA阳性率为7．41%，AMA阳性率为55．56%，LKM阳性率为7．41%，AMA－M2阳性率为48．15%，SLA／LP阳性率为7．41%，LC－1阳性率为3．70%，见表1。

2.2 其他肝病患者自身抗体阳性率结果198例其他肝病患者自身抗体ANA阳性率为26．26%，SMA阳性率为4．55%，AMA阳性率为11．11%，LKM阳性率为0．51%，AMA－M2阳性率为5．05%，SLA／LP阳性率为2．53%，LC－1阳性率为1．52%，见表2。

2.3 ALD患者组与其他肝病患者组自身抗体阳性率比较ALD患者组自身抗体阳性率与其他肝病患者组相比较，ANA、AMA、LKM、AMA－M2阳性率差异均有统计学意义（P均＜0．05），见表3。

3 讨论

ALD是一组由于机体存在自身抗体而引起的肝细胞或肝内外胆管细胞损伤为主要特征的慢性肝病，特点为在肝脏病理性炎症损伤的同时，血清中存在与肝脏相关的自身抗体。目前认为遗传易感人群在激发因素诱导下，自身免疫耐受平衡被打破，机体针对自身抗原做出免疫应答，引起肝脏胆管损伤导致ALD的发生［5］。自从人们在1965年首次发现PBC患者血清中存在AMA以来，该自身抗体已成为诊断PBC的主要指标，其中AMA－M2为PBC特异性抗体［6］。抗AMA抗体是以线粒体为靶抗原、无种属和器官特异性的自身抗体，PBC患者中的抗AMA抗体阳性率高达95%，此项检测已成为PBC诊断的重要实验室指标。抗AMA－M2抗体以线粒体内膜上的丙酮酸脱氢酶复合物为靶抗原的抗AMA－M2抗体亚型抗体，是PBC患者高度特异性自身抗体，敏感性为95%～98%，特异性为86%～97%［7，8］。部分PBC患者血清中还存在ANA，其中多核点型和核膜型ANA对PBC患者有较高特异性，可作为AMA阴性患者诊断PBC的指标［8－10］。在本文研究中，PBC患者ANA阳性率为80．00%，AMA、AMA－M2阳性率均为90．00%，这与相关研究［11］结果基本一致，且本文研究中ANA以多核点型为主。在本文研究中抗AMA、AMA－M2抗体的阳性率均为90．00%，较以上报道的结果偏低，究其原因可能与检测方法的差异及病例数偏少等因素有关，此尚需进行进一步积累、研究。还有10．00%的PBC患者SLA／LP、LC1阳性，这或许与重叠综合症有关。有报道［12］显示，AIH患者自身抗体谱特征主要表现为ANA、SMA、LKM、SLA／LP、LC－1阳性，特别是SLA／LP、LC－1只在AIH组中表现为阳性。本文研究中AIH患者ANA阳性率较高，为80．00%，SMA、LKM阳性率均为13．33%，AMA阳性率为40．00%，AMA－M2阳性率为26．67%，SLA／LP阳性率为6．67%，这与上述报道基本相符，但未检出LC－1，可能与患者的个体差异有关。在本文研究中，PSC病例数较少，只有2例，其中1例ANA阳性。PSC的诊断还要依据胆管的影像学检查、肝活检分为大胆管PSC、小胆管PSC。

表1 ALD患者自身抗体检测阳性率结果［n（%）］

表2 其他肝病患者自身抗体检测阳性率结果［n（%）］

表3 ALD患者与其他肝病患者自身抗体检测阳性结果比较［n（%）］

在本文研究中，肝硬化、肝损害病例数较多，且肝硬化患者、肝损害患者各自身抗体阳性率均较高。之所以肝硬化、肝损害患者自身抗体检出率较高，是因为肝硬化是一种或者多种致病因素长期反复存在造成肝脏广泛实质性损害，进而肝细胞弥漫性坏死、结节状再生，纤维组织增生，肝脏结构紊乱，质地变硬。由于部分患者早期症状不明显，就诊时间较晚，肝硬化、肝损害、肝占位只是其最终的表现形式，形成原因很复杂，其中也包括ALD、慢性病毒性肝炎。另外，在本文研究中，病毒性肝炎ANA阳性率为14．29%。据有关文献［13］报道在慢性肝炎、肝硬化患者体内存在免疫应答，可引起机体自身免疫紊乱继而产生自身抗体，与本文研究结果相符。在本文研究中，还出现了酒精肝33．33%的ANA阳性和16．67%的SMA阳性，这可能是因为酒精对肝细胞的毒性通过肝脏的代谢，逐步造成对肝细胞的破坏，使肝细胞膜表面的脂质成分过度氧化，从而破坏了肝细胞膜。酒精不但可以损伤肝细胞，还可造成肝脏毛细胆管的损伤，或诱导自身抗体的产生。在本文研究中，先天性胆道闭锁患者有1例ANA阳性。先天性胆道闭锁是由于先天性胆道发育障碍引起的胆道梗阻，此外，有人提出本病与自身免疫、胆管缺血有关。还有人发现胆道闭锁与硬化性胆管炎有相似的炎症过程，发病率女性较男性高［14］，由此可能说明有ANA阳性的可能性。本文研究中，脂肪肝、药物性肝炎患者未发现自身抗体。

既往由于对ALD认识的不足、实验条件及检测水平限制，遇有肝功能异常患者，多数诊断为病毒性肝炎，因此早期诊断对ALD诊断、治疗及预后至关重要［15］。随着实验室技术发展，临床医生对ALD认识程度明显提高，自身抗体的检测越来越受到重视。临床可根据患者自身特异性抗体的联合检测结果，更准确、快速的鉴别、诊断ALD与其他肝病，对于提高ALD的诊断率有着重要的意义。

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（本文编辑：杨军）

Autoantibody test results analysis of 225 patients with liver disease

SUN Ping，TANG Zhi－qin，MU Hong．Department of Clinical Labortoary，Tianjin First Central Hospital，Tianjin 300192，China

ObjectiveTo investigate the clinical value of autoantibodies detection in autoimmune liver disease（ALD）including autoimmune hepatitis（AIH），primary biliary cirrhosis（PBC）and primary sclerosing cholangitis（PSC）．MethodsFrom January 2013 to February 2014，225 patients from department of gastroenterology，department of hepatobiliary surgery and transplant surgery were collected．Antinuclear antibody（ANA），antismooth muscle antibody（SMA）and anti－mitochondrial antibody（AMA）were detected by indirect immunofluorescence method．Liver kidney microsomal antibody（LKM），liver cytosol－1（LC－1），soluble antigen／liver pancreatic（SLA／LP）and AMA－M2were tested by Europe and Mongolia blotting detection．The clinical datas were consulted and the detected results were analyzed statistically．ResultsThe positive rates of ANA，SMA，AMA，LKM，AMA－M2，SLA／LP and LC－1 in patients with ALD were 77．78%，7．41%，55．56%，7．41%，48．15%，7．41%and 3．70%，respectively．The positive rates of ANA，SMA，AMA，LKM，AMA－M2，SLA／LP and LC－1 in patients with other liver diseases were 26．26%，4．55%，11．11%，0．51%，5．05%，2．53%and 1．52%，respectively．There were statistical significance in the differences of positive rates of ANA，AMA，LKM，AMA－M2between ALD and other liver diseases group（Pall＜0．05）．ConclusionAutoantibodies of ALD have a higher detection rate，and they provide a reliable basis for clinicians to identify viral hepatitis，ALD and other liver diseases．

Liver disease；Autoimmune liver disease；Autoantibody

10.3969／j.issn.1674－7151.2014.02.009

2014－04－18）