盐酸小檗碱鼻用凝胶的研究

王丽峰，张思培，曹颖，国大亮

（1.天津中医药大学实验教学部，天津 300193；2.天津中医药大学中药学院，天津 300193）

盐酸小檗碱鼻用凝胶的研究

王丽峰1，张思培2，曹颖1，国大亮2

（1.天津中医药大学实验教学部，天津 300193；2.天津中医药大学中药学院，天津 300193）

[目的]小檗碱具有神经保护作用，特别对神经退行性疾病具有良好的治疗效果，鼻腔给药为一种向脑输送药物的新途径，药物滴人鼻腔后能传人脑脊液达到治疗神经的目的，设计一种盐酸小檗碱鼻用凝胶剂，并对其进行体外扩散评价。[方法]以卡伯姆-980为凝胶基质，以丙三醇为潜溶剂，用三乙醇胺调节pH和黏度，采用正交设计对处方进行优化，用紫外分光光度法测定体外溶出，并溶出数据进行Weibull概率拟合。[结果]盐酸小檗碱鼻用凝胶最佳处方为卡波姆-980浓度0.2%，载药量1%，pH在6.0～7.0范围内，平均黏度约为1 000～1 200 mPa·s，体外溶出结果经Weibull概率模型拟合，其Td值为104.8 min。[结论]以生物黏附性材料卡波姆-980为基质制备盐酸小檗碱鼻用凝胶，处方简单，质量稳定，药物释放平稳。

盐酸小檗碱；卡波姆；鼻用凝胶；药物释放

小檗碱，又名黄连素，除黄连外，也是小檗科植物小檗、芸香科植物黄柏的主要药效成分，在防已科、鼠李科、罂粟科等某些植物中也含有小檗碱。小檗碱最初作为清热解毒药和抗菌药应用于临床，但现代研究表明小檗碱还具有抗菌、降血糖、治疗心血管系统疾病、抗肿瘤等多种药理活性，特别在神经退行等疾病方面具有良好治疗效果[1-3]。经鼻给药是药物透过血脑屏障的捷径，药物主要以扩散原理经嗅神经进入脑[4]。本文基于小檗碱的神经保护作用及鼻脑给药系统原理，利用具有生物膜黏附性的卡波姆为基质，制备盐酸小檗碱鼻用凝胶，并考察其体外释药性能，以期获得用药方便、生物利用度高的脑神经保护制剂。

1 仪器与材料

紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司，SP-2102UV型），高剪切分散乳化机（上海弗鲁克流体机械制造有限公司，FA25-25G），PH5-3C型酸度计（萧山市分析仪器厂），旋转式黏度计（上海平轩科学仪器厂，NDJ-79），TN-100B型托盘天平（上海精科天平），恒温磁力加热搅拌器（江苏省金坛市荣华机器制造有限公司，85-2型），精密电子天平（上海精密科学仪器有限公司，FA1004N），智能药物溶出仪（天津精密仪器厂，ZRS-8G）。

盐酸小檗碱（天津中医药大学药剂实验室提供，纯度99%），卡波姆-980（美国诺誉化工上海有限公司，CP2010），盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，110713-200208），甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 实验方法与结果

2.1 盐酸小檗碱的测定参照文献[5]方法。

2.1.1 线性关系考察取约10 mg，105℃干燥5 h的盐酸小檗碱对照品，精密称定，加蒸馏水稀释至刻度，超声助溶，冷却至室温，摇匀，得盐酸小檗碱储备液。分别精密吸取盐酸小檗碱储备液0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、3.5、4.0 mL，置50 mL量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，得质量浓度分别为1.96、3.92、5.88、7.84、11.76、13.72、15.68 μg/mL的盐酸小檗碱溶液，以蒸馏水为空白，于344 nm处测定吸光度，以质量浓度为横坐标（X），吸光度为纵坐标（Y）进行线回归，得回归方程=0.062 1X-0.044，r2=0.999 5，结果表明盐酸小檗碱在1.96～15.68 μg/mL范围内呈良好线性关系。

2.1.2 精密度分别取浓度为5.88、11.76、15.68 μg/mL的盐酸小檗碱溶液，以蒸馏水为空白，于344 nm处测定吸光度5次，高、中、低3个浓度吸光度的RSD分别为0.89%、0.25%、0.50%，精密度良好。

2.1.3 稳定性分别取浓度为3.92、7.84、13.72μg/mL的盐酸小檗碱溶液，于0、1、2、3、4h以蒸馏水为空白，于344 nm处测定吸光度，高、中、低3个浓度吸光度的RSD分别为1.97%、1.17%、0.66%，稳定性良好。

2.2 盐酸小檗碱潜溶比的测定分别配制体积比为5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1的蒸馏水-甘油、蒸馏水-PEG400、蒸馏水-丙二醇溶液，加入过量盐酸小檗碱，涡旋混合30 min，静置过夜，次日离心，精密吸取上清液1 mL，稀释适当倍数，于344 nm下测定吸光度，外标法测定盐酸小檗碱的饱和溶解度。结果可见，随着多元醇类有机溶剂比例的增加，盐酸小檗碱的溶解度也呈现增加趋势，其中水与甘油等比例混合时，盐酸小檗碱的饱和溶解度最大，达到10.588 mg/mL，因此选用甘油作为潜溶剂较合适，潜溶比为5∶5。以潜溶比为横坐标，以饱和溶解度为纵坐标，绘制潜溶度图，见图1。

图1 盐酸小檗碱在不同混合溶剂中的饱和溶解度

2.3 盐酸小檗碱鼻用凝胶的处方研究参照文献[6]方法。将卡波姆-980撒入30 mL蒸馏水中，静置过夜。将甘油与等体积水混合，加入到卡波姆溶液中，滴加10%（V/V）三乙醇胺溶液，搅拌均匀，加蒸馏水定量至50 g。按L9（34）进行正交设计，见表1。以林可霉素利多卡因凝胶为参比制剂，以旋转式黏度计测定黏度，并用Excel 2003进行方差分析，实验结果见表2，方差分析见表3。

正交实验结果表明，卡波姆浓度是影响凝胶黏度的主要因素。卡波姆浓度增大后，黏度随之增大，但是黏度过大不利于鼻腔内涂展。以林可霉素利多卡因凝胶为参比制剂，最终拟定处方卡波姆浓度为0.2%，以三乙醇胺调pH 6.0～7.0。

2.4 盐酸小檗碱滴鼻凝胶的制备参照文献[7]方法。称取1 g盐酸小檗碱，置于乳钵中，加入10 g吐温-80，研均，加入10 g甘油和0.1%卡波姆-980水溶液，滴加10%（V/V）三乙醇胺溶液调pH 6.0～7.0，加水定量至100 g，搅拌均匀，-0.1 mPa真空脱气泡12 h。

表1 凝胶处方L9（34）因素水平表

表2 凝胶处方正交实验结果

表3 凝胶处方方差分析

2.5 盐酸小檗碱滴鼻凝胶的体外释放取1.0 g凝胶，加于截留分子量为10 000的透析袋中，以棉线封口，置于溶出仪转篮中，以蒸馏水为溶出介质，转篮转速为100 r/min，水温37℃，每隔5min取样5mL，同时补充同体积蒸馏水，溶出液以0.45 μm微孔滤膜过滤，以蒸馏水为空白，于344 nm下测定吸光度（Et）。取样结束后，将转篮和溶出液转移至1 L烧杯中，加热沸腾3 min，冷却至室温，于344 nm下测定吸光度（E∞）。求算各时间点相对累积溶出率（Et/E∞× 100%），以时间为横坐标，以相对累积溶出率为纵轴，绘制累积溶出曲线[8-9]，以Excel2003软件Weibull概率函数拟合，其Td值为104.8 min，m值为1.676。盐酸小檗碱鼻用凝胶的累积溶出曲线见图2。

3 讨论

鼻用凝胶主要以水为溶剂，盐酸小檗碱有一定亲水性，但极性仍较小，为了增加盐酸小檗碱的溶解度，加入了多元醇类潜溶剂，潜溶比测定结果可知选用甘油较为合适，同时甘油又可作为凝胶的保温剂。

图2 盐酸小檗碱鼻用凝胶的溶出曲线

卡波姆-980是2010年版《中国药典》最新收载的凝胶类辅料，对卡波姆-980的pH-黏度性质尚无文献报道，因此本课题在处方前研究中考察了不同pH值下卡波姆-980的特性黏度。卡波姆-980溶液在pH 4～5时即可成为凝胶态，但卡波姆的浓度增加，成为凝胶态的pH呈降低趋势。

参比制剂林可霉素利多卡因凝胶的黏度为2 170 mPa·s，但此参比制剂为外用凝胶，如果要用于鼻腔，则凝胶应有一定流动性，并有一定黏度，因此进行处方优化时，将滴鼻凝胶的黏度控制在1000～1 200 mPa·s左右。盐酸小檗碱微溶于水，因此在制备水凝胶时加入润湿剂吐温-80，但载药量不宜过大，否则易有固体颗粒析出。

[1]Zhu FQ,Wu FJ,Ma Y,et al.Decrease in the production of beta-amyloid by berberine inhibition of the experssion of beta-secretaseinHEK293cells[J].BMCNeuroscience，2011, 12:125.

[2]马丽丽,陈晓红.小檗碱在神经系统疾病中的应用进展[J].新医学，2012,43(7):437-440.

[3]王静,张艳军.小檗碱对中枢神经系统相关疾病治疗研究进展[J].天津中医药，2011,28(2):173-174.

[4]Charlton ST,Davis SS,Illum L.Evaluation of bioadhesive polymers as delivery systems for nose to brain delivery:in vitro characterisation studies[J].J Control Release，2007, 118(2):225-234.

[5]肖学凤,乔晓莉,高岚,等.黄柏中盐酸小檗碱的药代动力学研究[J].天津中医药大学学报,2008,27(4):263-265.

[6]王颖,刘志东,曹晴,等.地榆四黄散的提取工艺优化及凝胶剂的制备[J].天津中医药，2012,29(2):80-82.

[7]李琳，赵海南，李佳玮，等.盐酸小檗碱离子型眼用原位凝胶的研究[J].天津中医药大学学报，2011,30(4):229-231.

[8]尹忠鹏，庞晓晨，刘志东，等.4种促渗剂对痛宁凝胶中延胡索乙素离体鼠皮透过的研究[J].天津中医药,2013,30(3): 179-181.

[9]刘志东，尹忠鹏，庞晓晨，等.促渗剂对痛宁凝胶在体经皮渗透性的影响[J].天津中医药，2013，30（10）：618-620.

Studies on nasal gel of Berberine Hydrochloride

WANG Li-feng1,ZHANG Si-pei2,CAO Ying1,GUO Da-liang2
（1.Experimental Teaching Administration Department,Tianjin University of TCM,Tianjin 300193,China;
2.College of TCM,Tianjin University of TCM,Tianjin 300193,China）

[Objective]To design a kind of nasal gel of berberine and inspect the quality of it in vitro.Nasal administration is a new way to deliver drugs to the brain.The drug can transport into cerebrospinal fluid after nasal drops to treat Neurodegenerative diseases.[Methods]In order to optimize the prescription the orthogonal design was carried out.The experiment used Cabarbopol-980 as gel base,triethanolamine as pH and viscosity adjuster,and glycerin as cosolvent.The release of berberine from nasal gel was determined by UV and the curve was fitted by Weibull model.[Results]The optimum nasal gel was made by Carbopol-980 0.1%,berberine 1%,appearance pH was adjusted to 6.0～7.0,the average viscosity was about 1 200 mPa·s.The release curve of berberine fitted by Weibull showed that Tdwas 104.8 min.[Conclusion]Using bioadhesive material carbopol-980 to make nasal gel of berberine is easy to operate and control.The release of berberine is stable.

berberine hgdrochloride;carbopol；nasal gel;drug release

R285.5

A

1673-9043（2014）01-0036-03

10.11656/j.issn.1673-9043.2014.01.12

2013-09-16）

王丽峰（1980-），女，硕士研究生，主要从事药物制剂分析方面的工作。

国大亮，E-mail:13920632603@126.com。