气相色谱仪测定血液中DHA、EPA含量

冯剑军

摘 要：二十二碳六烯酸（DHA）、二十碳五烯酸（EPA）是人体血液中的两种物质，对人体的健康有着重要的影响。因此，使用科学方法对血液中DHA，EPA进行检测是非常重要的。使用气相色谱仪对血液中的DHA和EPA进行检测实验，详细介绍了实验材料、方法和结果，最终证实，气相色谱仪适用于检测血液中的DHA和EPA。

关键词：气相色谱仪；血液；DHA；EPA

中图分类号：TQ016.51 文献标识码：A 文章编号：2095-6835（2014）03-0042-02

DHA，即二十二碳六烯酸，俗称脑黄金，是一种对人体非常重要的不饱和脂肪酸，属于Omega-3不饱和脂肪酸家族中的重要成员。EPA ，即二十碳五烯酸，是鱼油的主要成分，属于Ω-3系列多不饱和脂肪酸。目前测定这两种脂肪酸的方法有很多种，而气相色谱仪法是比较常用的一种。通过对气相色谱仪测定血液中DHA，EPA含量进行探讨，以期更准确地测定血液中DHA和EPA的含量。

1 实验材料的准备

仪器：GC112A气相色谱仪、WYB-Ⅱ静音无油空气泵、SPGN-ⅡA高纯氮发生器、SPGH-300高纯氢发生器、XH-B型漩涡混合器、CF-长风水浴箱、B600A型低速离心机、TFG-1200通风柜。

试剂：甲醇、乙酸乙酯、正己烷等，均为分析纯；DHA甲酯标准品、EPA甲酯标准品；内标溶液（1 mg/mL，正二十三碳烷酸无水乙醇溶液）；盐酸甲醇溶液（氯化钠与浓硫酸反应，产生的氯化氢气体导入甲醇中，经标定物质的量浓度为1.3 mol/L）。

312名来我院产检的孕妇，体检未发现重大疾病，且无不良嗜好。空腹抽取静脉血2 mL，及时分离血清，待检。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件的选择

毛细管柱：老化过后毛细管柱，型号FFAP，规格30 m（长）×0.25 mm（内径）×0.25μm（液膜厚度）。柱温：初始180 ℃，保持3.0 min，然后2 ℃/min升至250 ℃；汽化室温度260 ℃；检测器温度300 ℃；分流比1∶60；进样量1.0 μL。

2.2 样品处理

用定量移液器取200 μL血清放入5 mL尖底具塞试管内，加入物质的量浓度为4.5 mol/L的浓硫酸2滴酸化，加内标液10 μL，用漩涡混合器混合3 min；用乙酸乙酯漩涡混合提取2次（1 mL和0.5 mL），3 000 r/min离心3 min，合并提取液放入5 mL尖底具塞试管备用；把乙酸乙酯提取液用小流量高纯氮气吹干；加入物质的量浓度为1.3 mol/L的HCL-CH3OH溶液1 mL后密封，置60 ℃恒温水浴箱中酯化30 min后，冷却。加入分析纯的正己烷1 mL，漩涡混合1 min，静置3 min，提取正己烷层放置在5 mL尖底具塞试管内备用，把正己烷提取液用小流量高纯氮气吹干，加30 μL正己烷溶解。

2.3 应用及评价

2.3.1 色谱分离条件的结果

经过试验，在色谱条件下人血清游离脂肪酸甲酯达到完全分离，互不干扰。

2.3.2 标准曲线配制

质量浓度为1 mg/mL的脂肪酸混合标准溶液，分别用正己烷将DHA混合准溶液稀释成含50 μg/mL、125 μg/mL、250 μg/mL、500 μg/mL、750 μg/mL、1 000 μg/mL系列质量浓度的标准溶液，将EPA混合准溶液稀释成含10 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、250 μg/mL系列质量浓度的标准溶液。以各标准溶液的质量浓度X（mg/mL）为横坐标，对照品的峰面积Y为纵坐标作图，按内标法计算，得出标准曲线。结果DHA的标准曲线为Y=0.005X+0.004 5，R=0.998；EPA的标准曲线为Y= 0.0062X-0.003 6，R=0.996。

2.3.3 精密度实验

平行制备6份血清样品，分别加入高、中、低质量浓度（分别为250 μg/mL、100 μg/mL、50 μg/mL）的DHA甲酯、EPA甲酯混合标准溶液，1 d内各重复测定5次，记录色谱图，按峰面积计算天内RSD；每天测1次，共测5 d，计算天间RSD。结果见表1.

2.3.4 重复性实验

平行制备6份样品，在1 d内测定2次，按峰面积除以取样量后所得值计算RSD。结果DHA甲酯和EPA甲酯含量的RSD分别为3.00%和2.89%，表明方法的重复性良好。

2.3.5 稳定性实验

取同一份样品，于开始时、第一天、第三天、第五天进行测定，按峰面积计算RSD。结果DHA甲酯和EPA甲酯的RSD分别为2.57%和2.62%，表明该样品溶液至少5 d内可以保持基本稳定。

2.3.6 回收率实验

取已知含量的样品9份平行分为3组，每组分别加入高、中、低3种质量浓度DHA甲酯、EPA甲酯混合标准溶液，经气相色谱分析，按内标法计算，以测得量与添加量计算平均回收率。结果见表2.

2.3.7 DHA和EPA含量

取1 μL各样品注入气相色谱仪，以内标法计算DHA甲酯和EPA甲酯的含量。312名孕妇血液中DHA含量为（14.88±10.54）mg/L，变异系数（CV）为 31.56 %，EPA含量为（10.54±10.43）mg/L，CV为79.63%.

3 讨论

脂肪酸的分析过程较为复杂，其中样品的前期处理过程非常关键。衍生化过程中DHA、EPA的酯化效率决定了两种物质含量检测的准确度。目前脂肪酸酯化的方法有三氟化硼酯化法、甲醇—氢氧化钾室温酯化法、甲醇—氢氧化钠加热回流酯化法和薄层层析法。此次采用了盐酸/甲醇溶液酯化法，DHA、EPA的萃取效率高，可完全分离，互不干扰，保证了结果的准确性。且以正二十三碳烷酸无水乙醇溶液为内标，其保留时间与DHA，EPA相近，能够准确测定DHA，EPA含量。

这种方法精密度和重复性良好，短时间内较稳定，并且在加标回收率试验中，DHA平均回收率为92.0%～93.6%，RSD为3.0%～3.6%，EPA的平均回收率为92.3%～94.0%，RSD为2.8%～4.0%，适用于人血液中DHA，EPA的检测。

4 结束语

气相色谱仪具有分析速度快、应用范围广、分离效率和分析灵敏度高等优点，常用于测定血液中DHA和EPA的含量。结合一系列具体的实验研究，认为气相色谱仪适用于检测血液中的DHA和EPA。相信这种方法在以后会得到普遍应用。

参考文献

[1]李庆民，陈桂范，高实，等.气相色谱外标法测定鱼油中EPA和DHA的含量[J].沈阳药科大学学报，1996（04）.

[2]杨玉林，芮振荣，潘希和.毛细管气相色谱法分析鸡蛋中DHA、EPA和亚麻酸的含量[J].上海预防医学杂志，2001（04）. 〔编辑：陈文强〕

摘 要：二十二碳六烯酸（DHA）、二十碳五烯酸（EPA）是人体血液中的两种物质，对人体的健康有着重要的影响。因此，使用科学方法对血液中DHA，EPA进行检测是非常重要的。使用气相色谱仪对血液中的DHA和EPA进行检测实验，详细介绍了实验材料、方法和结果，最终证实，气相色谱仪适用于检测血液中的DHA和EPA。

关键词：气相色谱仪；血液；DHA；EPA

中图分类号：TQ016.51 文献标识码：A 文章编号：2095-6835（2014）03-0042-02

DHA，即二十二碳六烯酸，俗称脑黄金，是一种对人体非常重要的不饱和脂肪酸，属于Omega-3不饱和脂肪酸家族中的重要成员。EPA ，即二十碳五烯酸，是鱼油的主要成分，属于Ω-3系列多不饱和脂肪酸。目前测定这两种脂肪酸的方法有很多种，而气相色谱仪法是比较常用的一种。通过对气相色谱仪测定血液中DHA，EPA含量进行探讨，以期更准确地测定血液中DHA和EPA的含量。

1 实验材料的准备

仪器：GC112A气相色谱仪、WYB-Ⅱ静音无油空气泵、SPGN-ⅡA高纯氮发生器、SPGH-300高纯氢发生器、XH-B型漩涡混合器、CF-长风水浴箱、B600A型低速离心机、TFG-1200通风柜。

试剂：甲醇、乙酸乙酯、正己烷等，均为分析纯；DHA甲酯标准品、EPA甲酯标准品；内标溶液（1 mg/mL，正二十三碳烷酸无水乙醇溶液）；盐酸甲醇溶液（氯化钠与浓硫酸反应，产生的氯化氢气体导入甲醇中，经标定物质的量浓度为1.3 mol/L）。

312名来我院产检的孕妇，体检未发现重大疾病，且无不良嗜好。空腹抽取静脉血2 mL，及时分离血清，待检。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件的选择

毛细管柱：老化过后毛细管柱，型号FFAP，规格30 m（长）×0.25 mm（内径）×0.25μm（液膜厚度）。柱温：初始180 ℃，保持3.0 min，然后2 ℃/min升至250 ℃；汽化室温度260 ℃；检测器温度300 ℃；分流比1∶60；进样量1.0 μL。

2.2 样品处理

用定量移液器取200 μL血清放入5 mL尖底具塞试管内，加入物质的量浓度为4.5 mol/L的浓硫酸2滴酸化，加内标液10 μL，用漩涡混合器混合3 min；用乙酸乙酯漩涡混合提取2次（1 mL和0.5 mL），3 000 r/min离心3 min，合并提取液放入5 mL尖底具塞试管备用；把乙酸乙酯提取液用小流量高纯氮气吹干；加入物质的量浓度为1.3 mol/L的HCL-CH3OH溶液1 mL后密封，置60 ℃恒温水浴箱中酯化30 min后，冷却。加入分析纯的正己烷1 mL，漩涡混合1 min，静置3 min，提取正己烷层放置在5 mL尖底具塞试管内备用，把正己烷提取液用小流量高纯氮气吹干，加30 μL正己烷溶解。

2.3 应用及评价

2.3.1 色谱分离条件的结果

经过试验，在色谱条件下人血清游离脂肪酸甲酯达到完全分离，互不干扰。

2.3.2 标准曲线配制

质量浓度为1 mg/mL的脂肪酸混合标准溶液，分别用正己烷将DHA混合准溶液稀释成含50 μg/mL、125 μg/mL、250 μg/mL、500 μg/mL、750 μg/mL、1 000 μg/mL系列质量浓度的标准溶液，将EPA混合准溶液稀释成含10 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、250 μg/mL系列质量浓度的标准溶液。以各标准溶液的质量浓度X（mg/mL）为横坐标，对照品的峰面积Y为纵坐标作图，按内标法计算，得出标准曲线。结果DHA的标准曲线为Y=0.005X+0.004 5，R=0.998；EPA的标准曲线为Y= 0.0062X-0.003 6，R=0.996。

2.3.3 精密度实验

平行制备6份血清样品，分别加入高、中、低质量浓度（分别为250 μg/mL、100 μg/mL、50 μg/mL）的DHA甲酯、EPA甲酯混合标准溶液，1 d内各重复测定5次，记录色谱图，按峰面积计算天内RSD；每天测1次，共测5 d，计算天间RSD。结果见表1.

2.3.4 重复性实验

平行制备6份样品，在1 d内测定2次，按峰面积除以取样量后所得值计算RSD。结果DHA甲酯和EPA甲酯含量的RSD分别为3.00%和2.89%，表明方法的重复性良好。

2.3.5 稳定性实验

取同一份样品，于开始时、第一天、第三天、第五天进行测定，按峰面积计算RSD。结果DHA甲酯和EPA甲酯的RSD分别为2.57%和2.62%，表明该样品溶液至少5 d内可以保持基本稳定。

2.3.6 回收率实验

取已知含量的样品9份平行分为3组，每组分别加入高、中、低3种质量浓度DHA甲酯、EPA甲酯混合标准溶液，经气相色谱分析，按内标法计算，以测得量与添加量计算平均回收率。结果见表2.

2.3.7 DHA和EPA含量

取1 μL各样品注入气相色谱仪，以内标法计算DHA甲酯和EPA甲酯的含量。312名孕妇血液中DHA含量为（14.88±10.54）mg/L，变异系数（CV）为 31.56 %，EPA含量为（10.54±10.43）mg/L，CV为79.63%.

3 讨论

脂肪酸的分析过程较为复杂，其中样品的前期处理过程非常关键。衍生化过程中DHA、EPA的酯化效率决定了两种物质含量检测的准确度。目前脂肪酸酯化的方法有三氟化硼酯化法、甲醇—氢氧化钾室温酯化法、甲醇—氢氧化钠加热回流酯化法和薄层层析法。此次采用了盐酸/甲醇溶液酯化法，DHA、EPA的萃取效率高，可完全分离，互不干扰，保证了结果的准确性。且以正二十三碳烷酸无水乙醇溶液为内标，其保留时间与DHA，EPA相近，能够准确测定DHA，EPA含量。

这种方法精密度和重复性良好，短时间内较稳定，并且在加标回收率试验中，DHA平均回收率为92.0%～93.6%，RSD为3.0%～3.6%，EPA的平均回收率为92.3%～94.0%，RSD为2.8%～4.0%，适用于人血液中DHA，EPA的检测。

4 结束语

气相色谱仪具有分析速度快、应用范围广、分离效率和分析灵敏度高等优点，常用于测定血液中DHA和EPA的含量。结合一系列具体的实验研究，认为气相色谱仪适用于检测血液中的DHA和EPA。相信这种方法在以后会得到普遍应用。

参考文献

[1]李庆民，陈桂范，高实，等.气相色谱外标法测定鱼油中EPA和DHA的含量[J].沈阳药科大学学报，1996（04）.

[2]杨玉林，芮振荣，潘希和.毛细管气相色谱法分析鸡蛋中DHA、EPA和亚麻酸的含量[J].上海预防医学杂志，2001（04）. 〔编辑：陈文强〕

摘 要：二十二碳六烯酸（DHA）、二十碳五烯酸（EPA）是人体血液中的两种物质，对人体的健康有着重要的影响。因此，使用科学方法对血液中DHA，EPA进行检测是非常重要的。使用气相色谱仪对血液中的DHA和EPA进行检测实验，详细介绍了实验材料、方法和结果，最终证实，气相色谱仪适用于检测血液中的DHA和EPA。

关键词：气相色谱仪；血液；DHA；EPA

中图分类号：TQ016.51 文献标识码：A 文章编号：2095-6835（2014）03-0042-02

DHA，即二十二碳六烯酸，俗称脑黄金，是一种对人体非常重要的不饱和脂肪酸，属于Omega-3不饱和脂肪酸家族中的重要成员。EPA ，即二十碳五烯酸，是鱼油的主要成分，属于Ω-3系列多不饱和脂肪酸。目前测定这两种脂肪酸的方法有很多种，而气相色谱仪法是比较常用的一种。通过对气相色谱仪测定血液中DHA，EPA含量进行探讨，以期更准确地测定血液中DHA和EPA的含量。

1 实验材料的准备

仪器：GC112A气相色谱仪、WYB-Ⅱ静音无油空气泵、SPGN-ⅡA高纯氮发生器、SPGH-300高纯氢发生器、XH-B型漩涡混合器、CF-长风水浴箱、B600A型低速离心机、TFG-1200通风柜。

试剂：甲醇、乙酸乙酯、正己烷等，均为分析纯；DHA甲酯标准品、EPA甲酯标准品；内标溶液（1 mg/mL，正二十三碳烷酸无水乙醇溶液）；盐酸甲醇溶液（氯化钠与浓硫酸反应，产生的氯化氢气体导入甲醇中，经标定物质的量浓度为1.3 mol/L）。

312名来我院产检的孕妇，体检未发现重大疾病，且无不良嗜好。空腹抽取静脉血2 mL，及时分离血清，待检。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件的选择

毛细管柱：老化过后毛细管柱，型号FFAP，规格30 m（长）×0.25 mm（内径）×0.25μm（液膜厚度）。柱温：初始180 ℃，保持3.0 min，然后2 ℃/min升至250 ℃；汽化室温度260 ℃；检测器温度300 ℃；分流比1∶60；进样量1.0 μL。

2.2 样品处理

用定量移液器取200 μL血清放入5 mL尖底具塞试管内，加入物质的量浓度为4.5 mol/L的浓硫酸2滴酸化，加内标液10 μL，用漩涡混合器混合3 min；用乙酸乙酯漩涡混合提取2次（1 mL和0.5 mL），3 000 r/min离心3 min，合并提取液放入5 mL尖底具塞试管备用；把乙酸乙酯提取液用小流量高纯氮气吹干；加入物质的量浓度为1.3 mol/L的HCL-CH3OH溶液1 mL后密封，置60 ℃恒温水浴箱中酯化30 min后，冷却。加入分析纯的正己烷1 mL，漩涡混合1 min，静置3 min，提取正己烷层放置在5 mL尖底具塞试管内备用，把正己烷提取液用小流量高纯氮气吹干，加30 μL正己烷溶解。

2.3 应用及评价

2.3.1 色谱分离条件的结果

经过试验，在色谱条件下人血清游离脂肪酸甲酯达到完全分离，互不干扰。

2.3.2 标准曲线配制

质量浓度为1 mg/mL的脂肪酸混合标准溶液，分别用正己烷将DHA混合准溶液稀释成含50 μg/mL、125 μg/mL、250 μg/mL、500 μg/mL、750 μg/mL、1 000 μg/mL系列质量浓度的标准溶液，将EPA混合准溶液稀释成含10 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、250 μg/mL系列质量浓度的标准溶液。以各标准溶液的质量浓度X（mg/mL）为横坐标，对照品的峰面积Y为纵坐标作图，按内标法计算，得出标准曲线。结果DHA的标准曲线为Y=0.005X+0.004 5，R=0.998；EPA的标准曲线为Y= 0.0062X-0.003 6，R=0.996。

2.3.3 精密度实验

平行制备6份血清样品，分别加入高、中、低质量浓度（分别为250 μg/mL、100 μg/mL、50 μg/mL）的DHA甲酯、EPA甲酯混合标准溶液，1 d内各重复测定5次，记录色谱图，按峰面积计算天内RSD；每天测1次，共测5 d，计算天间RSD。结果见表1.

2.3.4 重复性实验

平行制备6份样品，在1 d内测定2次，按峰面积除以取样量后所得值计算RSD。结果DHA甲酯和EPA甲酯含量的RSD分别为3.00%和2.89%，表明方法的重复性良好。

2.3.5 稳定性实验

取同一份样品，于开始时、第一天、第三天、第五天进行测定，按峰面积计算RSD。结果DHA甲酯和EPA甲酯的RSD分别为2.57%和2.62%，表明该样品溶液至少5 d内可以保持基本稳定。

2.3.6 回收率实验

取已知含量的样品9份平行分为3组，每组分别加入高、中、低3种质量浓度DHA甲酯、EPA甲酯混合标准溶液，经气相色谱分析，按内标法计算，以测得量与添加量计算平均回收率。结果见表2.

2.3.7 DHA和EPA含量

取1 μL各样品注入气相色谱仪，以内标法计算DHA甲酯和EPA甲酯的含量。312名孕妇血液中DHA含量为（14.88±10.54）mg/L，变异系数（CV）为 31.56 %，EPA含量为（10.54±10.43）mg/L，CV为79.63%.

3 讨论

脂肪酸的分析过程较为复杂，其中样品的前期处理过程非常关键。衍生化过程中DHA、EPA的酯化效率决定了两种物质含量检测的准确度。目前脂肪酸酯化的方法有三氟化硼酯化法、甲醇—氢氧化钾室温酯化法、甲醇—氢氧化钠加热回流酯化法和薄层层析法。此次采用了盐酸/甲醇溶液酯化法，DHA、EPA的萃取效率高，可完全分离，互不干扰，保证了结果的准确性。且以正二十三碳烷酸无水乙醇溶液为内标，其保留时间与DHA，EPA相近，能够准确测定DHA，EPA含量。

这种方法精密度和重复性良好，短时间内较稳定，并且在加标回收率试验中，DHA平均回收率为92.0%～93.6%，RSD为3.0%～3.6%，EPA的平均回收率为92.3%～94.0%，RSD为2.8%～4.0%，适用于人血液中DHA，EPA的检测。

4 结束语

气相色谱仪具有分析速度快、应用范围广、分离效率和分析灵敏度高等优点，常用于测定血液中DHA和EPA的含量。结合一系列具体的实验研究，认为气相色谱仪适用于检测血液中的DHA和EPA。相信这种方法在以后会得到普遍应用。

参考文献

[1]李庆民，陈桂范，高实，等.气相色谱外标法测定鱼油中EPA和DHA的含量[J].沈阳药科大学学报，1996（04）.

[2]杨玉林，芮振荣，潘希和.毛细管气相色谱法分析鸡蛋中DHA、EPA和亚麻酸的含量[J].上海预防医学杂志，2001（04）. 〔编辑：陈文强〕