白芷中抗内毒素血症有效组分的谱效关系

张 慧, 海广范, 栗志勇, 张 婷, 吕洁丽

（1.新乡医学院药学院药理学教研室, 河南 新乡 453003； 2.安阳市三医院胸外科 河南 安阳 453000；3.新乡医学院三全学院, 河南 新乡 453003； 4.新乡医学院药学院中药学教研室, 河南 新乡 453003）

[制 剂]

白芷中抗内毒素血症有效组分的谱效关系

张 慧1, 海广范1, 栗志勇2, 张 婷3, 吕洁丽4*

（1.新乡医学院药学院药理学教研室, 河南 新乡 453003； 2.安阳市三医院胸外科 河南 安阳 453000；3.新乡医学院三全学院, 河南 新乡 453003； 4.新乡医学院药学院中药学教研室, 河南 新乡 453003）

目的 研究白芷抗内毒素血症的有效活性成分。方法 采用腹腔注射醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高实验和小鼠注射脂多糖+D-氨基半乳糖溶液所致内毒素血症模型， 考察白芷的石油醚、 乙酸乙酯、 正丁醇、 水提部位的抗炎、 抗内毒素血症作用。 结果 白芷正丁醇萃取部位抗炎、 抗内毒素血症作用最强， 其色谱峰为欧前胡素 （8号峰）、 氧化前胡素 （9 号峰）、 异欧前胡素 （12 号峰） 及两个未知成分。 结论 10 批不同产地白芷的正丁醇萃取部位均能明显延长内毒素血症小鼠的存活时间，说明白芷抗内毒素血症谱效关系成立。

白芷;内毒素血症;指纹图谱;谱效关系

内毒素血症是由于血中细菌或病灶内细菌释放出大量内毒素至血液，或输入大量内毒素污染的液体而引起。细菌内毒素具有十分复杂的生物学活性，内毒素血症可引起一系列病理生理改变，包括脓毒症、休克、 弥散性血管内凝血 （DIC）、 多器官功能障碍综合征 （MODS） 等。 经典的抗感染和支持治疗如抗生素的应用、抗内毒素抗体的应用等并不能有效地清除内毒素，反而具有一定的负面影响;而传统中医药在此方面具有独特的功效，中药在预防和治疗内毒素血症方面有着很大的潜力和美好的前景［1］。

白芷为伞 形 科 植物 Angelica dahurica （ Fisch. ex Hoffm.） Benth.et Hook.f.或 杭 白 芷 Angelica dahurica （ Fisch.ex Hoffm.）Benth.et Hook.F. Var.formosana （ Boiss.） Shan et Yuan 的干 燥根;辛， 温; 归胃、 大肠、 肺经［2］。 白芷具 有抗菌作用，对多种细菌，如大肠杆菌、痢疾杆菌、变形杆菌、伤寒杆菌、绿脓杆菌、霍乱杆菌、人型结核杆菌、 金黄 色 葡 萄 球 菌 等 均 有 抑 制 作 用［3］。 Song等［4］研究证明白芷提取物提前 30 min 腹腔注射给药能对抗小鼠注射 LPS 或 D-GalN （ N-乙酰半乳糖胺） 产生的内毒素血症，使血浆中 TNF-α水平显著降低，有对抗内毒素作用。本课题组前期研究也发现白芷醇提液具显著的抗内毒素血症作用。为了整体有效反映白芷抗内毒素血症作用的物质基础，本研究对白芷醇提液进行系统溶剂提取，对其抗内毒素血症有效部位进行考察， 并采用 HPLC对白芷抗内毒素血症活性有效部位的指纹图谱进行了初步研究， 并运用数理统计方法将药效学信息与 HPLC指纹图谱化学信息进行相关性研究，以期表征白芷的抗内毒素血症效应组分，为白芷抗内毒素血症活性成分的研究提供思路，为探讨谱效相关性奠定基础［5］。

1 仪器与材料

1.1 仪器 试剂 SHIMADZU LC-6AD型 HPLC仪、SPD-20A型紫外检测器 （日本岛津公司）; 色谱柱Lichrospher5-C18（250 mm×4.6 mm） （江苏汉邦科技有限公司）;721 紫外分光光度计 （上海光谱仪器有限公司）; 石油醚 （批号 20100306）、 乙酸乙酯 （批号 20100508）、 正丁 醇 （ 批 号 20100410）为分析纯， 甲醇 （批号 20100521） 为色谱纯， 均由天津市东丽区天大化学试剂厂生产。热毒平颗粒（江西 钟 山 药 业 有 限 责 任 公 司， 国 药 准 字Z20063056）。 欧前胡素， 异欧前胡素 （ 上海友思生 物 技 术 有 限 公 司， 批 号 分 别 为 091028，101123）。氧化前胡素对照品 （广州威佳科技有限公司， 批号 100324）。 BET-48G细菌内毒素检测仪 （天大天发公司）; 细菌内毒素工作标准品 （湛江博康海洋生物有限公司， 批号 130723）; 鲎试剂（湛江博康海洋生物有限公司， 批号 130423）; 细菌内毒素检查用水 （湛江博康海洋生物有限公司生产， 批号 130521）。

1.2 试药 10 批白芷药材产地为: 河南孟州（S1）; 四川达县 （S2）; 河北安国 （S3）; 四川遂宁 GAP基地 （ S4）; 浙江磐安 （S5）; 河南长葛（S6）; 安徽亳州 （S7）; 河南禹州 （S8）; 四川永胜 GAP基地 （S9）; 四川南川 （S10）。 由新乡医学院中药学教研室吕洁丽博士鉴定均为白芷 Angelica dahurica （Fisch.Ex Hoffm.） Benth.et Hook 的干燥根。

1.3 动物 昆明种小鼠， 体质量 18 ～22 g， 4 周龄， SPF级， 购自山东鲁抗医药股份有限公司实验动物室， 生产许可证号:SCKX鲁 20080003。

2 方法

2.1 白芷抗内毒素血症有效部位的筛选

2.1.1 供试品的制备 取 S4 白芷1 kg， 加入60%乙醇2 L， 回流提取1 h， 提取2 次， 合并两次的提取液，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取，即分别得到各不同极性提取部位。挥干各提取物中残留溶剂，分别加入适量吐温 -80， 待提取物溶解， 加水配制成 100 mL溶液， 使 1 mL药液相当于原药材10 g中所含该类成分， 备用。

2.1.2 白芷不同提取部位对腹腔注射醋酸 （HAc）所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响实验［6］取小鼠50 只， 雌雄各半， 随机分为 5 组， 0.5%吐温 -80 对照组， 白芷石油醚部位组、 乙酸乙酯部位组、 正丁醇部位组， 水提部位组， 每组10只。各组均灌胃给药 （相当于原生药 25 g/kg）， 连续给药7 d， 每日1次。 末次给药1 h后尾静脉注射1%伊文思蓝各 4 mg/kg， 并立即于腹腔内注射0.6%冰醋酸 0.01 mL/g。 20 min 后处死动物， 剖开腹腔， 每次用2 mL蒸馏水冲洗腹腔，冲洗3次，收集洗出液 5 m L， 以蒸馏水作参比在 590 nm处测定吸收度值。

2.1.3 白芷不同提取部位对小鼠注射性内毒素血症模型的影响实验［6-7］取小鼠 60 只， 雌雄 各半，随机分为6 组， 分别为 0.5%吐温 -80 对照组， 阳性对照组 （热毒平颗粒 3 g/kg）， 白芷石油醚部位组、乙酸乙酯部位组、正丁醇部位组、水提部位组， 每组10 只。 各组均灌胃给药 （相当于原生药25 g/kg）， 连续给药 7 d， 每日 1 次。 末次给药后0.5 h， 各组小鼠均腹腔注射内毒素溶液 +D-氨基半乳糖溶液 ［（LPS， 15 mg/kg） + （D-GalN， 0.6 g/kg） 溶于生理盐水］， 记录小鼠 72 h 之内的存活时间。

2.1.4 数据的统计与分析 实验数据以均数 ±标准差 （） 表示，采用 SPSS 19.0 软件 进行 t检验， 以 P＜0.05 为差异有统计学意义。

2.2 白芷抗内毒素血症有效部位 （正丁醇部位）指纹图谱的研究

2.2.1 10 批白芷正丁醇部位供试液的制备 分别取 10 批不同产地白芷药材样品粉末 20 g， 加 6 倍量 60%乙醇回流提取2 次， 每次 1 h， 合并两次提取液，先用环己烷、乙酸乙酯萃取，去除低极性化学成分，再正丁醇萃取，即得白芷正丁醇部位供试液。收集正丁醇液，减压浓缩得干膏，残渣甲醇溶解定容至 20 m L， 从中取 250 μL用甲醇稀释至7.5 mL， 过 0.45 μm微孔滤膜， 供 HPLC分析。

2.2.2 色谱条件 柱温 30 ℃， 流动相 0 ～15min，5%甲醇 ～30%甲醇，15 ～25 min， 30% ～80%甲醇， 25 ～30 min， 80%甲醇， 30 ～40 min， 80% ～90%甲醇， 波长 254 nm， 体积流量 1 m L/min。

2.2.3 方法学考察 ①精密度实验 将同一白芷正丁醇部位供试液，按以上色谱条件进行测定，连续进样5次，应用中药色谱图分析和数据管理系统软件，以其中一张为参照谱图，计算其余4张谱图与它的相似度。5 次谱图的全图谱相关系数均 99%以上，相似度良好，仪器精密度良好。②重复性实验 取白芷药材等量 5 份， 按 “2.2.1” 项方法，制备供试品溶液，按以上确定的色谱条件进行测定，连续进样，应用中药色谱图分析和数据管理系统软件，以其中一张为参照谱图，计算其余四张谱图与它的相似度。5张谱图的全图谱相关系数均99%以上， 说明实验方法重复性较好。 ③稳定性实验 取正丁醇部位供试品溶液，按以上色谱条件进行测定， 一天内分别在 0、 2、 4、 12、24 h 连续进样5次，应用中药色谱图分析和数据管理系统软件，以其中一张为参照谱图，计算其余四张谱图与它的相似度。5 张谱图的全图谱相关系数均 99%以上，说明供试品溶液在24 h内稳定性较好。

2.2.4 白芷正丁醇部位指纹图谱的测定 根据“2.2.2” 项色谱条件， 对 10 批不同来源的白芷药材的正丁醇部位提取物进行测定， 记录 40 min 色谱图。通过比较各色谱图，以中药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004 A版相似度评价系统软件进行匹配分析，按照中位数法建立各样品的对照指纹图谱。

2.3 10 批不同产地白芷正丁醇部位抗内毒素血症作用的检测

2.3.1 10 批白芷正丁醇部位样品溶液的制备 方法同 “2.2.1” 项， 正丁醇提取液减压浓缩得干膏， 加入适量吐温 -80，待提取物溶解， 加水配制成 100 mL溶液，使 1 mL药液相当于原药材 10 g中所含该类成分，无菌滤过，滤液于4℃保存备用，即得。

2.3.2 小鼠抗内毒素血症作用研究 小鼠 120 只，随机分成 12 组， 吐温 -80 对照组、 阳性组 （热毒平颗粒 3 g/kg）， 10 批不同产地白芷正丁醇部位组，每组10只， 均灌胃给药， 白芷正丁醇部位给药剂量25 g/kg（相当于原生药）， 连续给药 7 d， 每日 1次。 末次给药后0.5 h， 各组小鼠腹腔注射内毒素溶液 （LPS， 15 mg/kg） 和 D-氨基半乳糖溶液 （DGalN， 0.6 g/kg）， 记录小鼠 72 h 之内的存活时间。

2.4 白芷抗内毒素血症作用与正丁醇部位 HPLC指纹图谱的谱-效相关性分析

2.4.1 多元回归分析 用 10 个不同产地白芷正丁醇部位图谱的数据来建立方程， 自变量 （X） 为 13个共有峰的量化峰面积 （X1-X13）， 因变量 （ Y）为小鼠72 h 之内的存活时间。 使用软件 SPSS19.0，采用逐步后退法建立方程。

2.4.2 灰色关联度分析［8-9］灰色系统是指部分信息已知而部分信息未知的系统，灰色系统理论所要考察和研究的是信息不完备的系统，通过已知信息来研究和预测未知领域从而达到了解整个系统的目的。灰色系统理论与概率论、模糊数学一起并称为研究不确定性系统的三种常用方法，具有能够利用“少数据” 建模寻求现实规律的良好特性， 克服了数据不足或系统周期短的矛盾。

灰色关联分析过程:

做关联分析先要指定参考数据列。参考数据列常记为 x0，记第 1 个时刻的为 x0（1），第 2 个时刻的值为 x0（2），第 k个时刻的值为 x0（k）。 因此，参考序列 x0可表示为 x0=（x0（1），x0（2），L x0（n））

关联分析中被比较数列常记为 x1，x2，L，xk，类似参考序列 x0的表示方法，有 x1=（x1（1），x1（2），L，x1（n）），L，xk=（xk（1），xk（2），L，xk（n））

①求各序列的初值象。

每一个数列的第一个数 xi，除其它数 xi（k），这样既可使数列无量纲又可得到公共交点 xi（1）即第1点。

②求差序列。 各个时刻 xi与 x0的绝对差

③求两极最大差和最小差。记

ζ是分辨系数，一般在0与1之间选取。

⑥排关联序 将m个子序列对同一母序列的关联度按大小顺序排列起来，便组成关联序，记为｛X}， 它直接反映各个子序列对母序列的贡献的大小，据此可寻找指纹特征峰对应的化学成分与药效间的联系。

2.5 与抗内毒素血症作用关联性较大的色谱峰（即主要具有抗内毒素血症作用色谱峰） 所对应物质抗内毒素作用的初步验证实验［10]

2.5.1 样品液配制 将与抗内毒素血症作用关联性较大的色谱峰所对应成分且已用标准品对照鉴定出来的物质，分别加细菌内毒素检查用水配制成1 mg/mL溶液， pH 6.5 ～7.0， 煮沸消毒 1 h。

2.5.2 抗内毒素检测 将冻干细菌内毒素工作标准品加 12 mL鲎试剂溶解水， 使内毒素浓度为10 EU/mL， 分别取 0.5 mL加入已有 0.5 mL各化合物无菌液试管内， 振摇均匀， （ 55 ±2）℃ 温育30 min， 分别取 0.2 mL加入 0.1 mL鲎试剂中， 同时作阳性、阴性对照 （双管法）， 超声振荡 15 s，置细菌内毒素测定仪中于 （37 ±1）℃ 孵化 1 h，轻轻取出平放，观察反应情况。反应液澄清或稍有混浊但倾斜试管可流动者判为有抗内毒素作用。

3 结果

3.1 白芷抗内毒素血症有效部位的筛选结果

3.1.1 白芷不同提取部位对腹腔注射醋酸 （HAc）所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响 由表1可见， 与吐温 -80 对照组相比，白芷各不同提取部位对醋酸导致小鼠腹腔毛细血管通透性增高均有抑制作用， 其中正丁醇提取部位作用最强 （P＜0.01）。

表1 白芷不同提取部位对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 （）Tab.1 Extracts of Angelica dahurica on m ice’ s abdom inal capillary permeability （）

表1 白芷不同提取部位对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 （）Tab.1 Extracts of Angelica dahurica on m ice’ s abdom inal capillary permeability （）

注: 与吐温 -80 对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别 剂量 /（ 原生药 g/kg） 动物数/只 OD值吐温 -80 对照组10 1.52 ±0.42石油醚部位组 25 10 0.87 ±0.52*乙酸乙酯部位组 25 10 0.79 ±0.25*正丁醇部位组 25 10 0.58 ±0.14**水提部位组 25 10 0.92 ±0.48 -*

3.1.2 白芷不同提取部位对小鼠注射性内毒素模型的影响 由表2 可见， 与吐温 -80 对照组相比，白芷各不同提取部位对注射 LPS 和 D-GalN产生内毒素血症小鼠存活时间均有延长作用，其中正丁醇提取部位作用最强 （P＜0.01）。

表 2 白芷不同提取部 位对注 射 LPS和 D-GalN产 生内毒素血症小鼠存活时间的影响 （）Tab.2 Extracts of Angelica dahurica on the survival tim e of endotoxem icm ice（ induced by the intra-abdom inal injection of LPS and D-GalN） （）

表 2 白芷不同提取部 位对注 射 LPS和 D-GalN产 生内毒素血症小鼠存活时间的影响 （）Tab.2 Extracts of Angelica dahurica on the survival tim e of endotoxem icm ice（ induced by the intra-abdom inal injection of LPS and D-GalN） （）

注: 与吐温 -80 对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

/min吐温 -80 对照组组别 剂量 /（ 原生药 g/kg） 动物数/只 生存时间10 752.2 ±19.3阳性对照组 3（成药） 10 1198.5 ±24.7**石油醚部位组 25 10 975.3 ±38.9*乙酸乙酯部位组 25 10 986.3 ±37.4*正丁醇部位组 25 10 1168.9 ±31.8**水提部位组-25 10 856.0 ±28.9

3.2 白芷正丁醇部位对照指纹图谱的建立 以中药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004 A版相似度评价系统软件进行匹配分析，按照中位数法建立各样品的对照指纹图谱， 共 13 个共有峰， 结果见图1。 与标准品对照可知8号为欧前胡素、 9号为氧化前胡素、 12 号峰为异欧前胡素 （见图 2）。10 批白芷正丁醇部位 HPLC指纹图谱叠加图， 见图3。

图1 各样品的对照指纹图谱Fig.1 Chromatographic peaks of reference sam ple standards

图2 混合标准品图Fig.2 M ixed standards

图 3 10 批白芷正丁醇部位 HPLC指纹图谱叠加图 HPLCFig.3 Chromatographic overlapping of the n-butanol extract（ten batches）

3.3 10 批不同产地白芷正丁醇部位抗内毒素血症作用的检测 10 批不同产地白芷 （S1-S10） 正丁醇部位提取物均能明显延长注射 LPS 和 D-GalN产生内毒素血症小鼠的存活时间 （P＜0.05 ～0.01），其中 S2、 S3、 S4、 S5、 S8、 S10 抗内毒素血症作用较强 （P＜0.01）。 结果见表 3。

表 3 10 批 不 同 产地白芷 正 丁醇部位 对 注 射 LPS和 DGalN产生内毒素血症小鼠存活时间的影响 （）Tab.3 Extracts of Angelica dahurica on the survival time of endotoxem icm ice（ induced by the intra-abdom inal injection of LPS and D-GalN （ ten batches）（）

表 3 10 批 不 同 产地白芷 正 丁醇部位 对 注 射 LPS和 DGalN产生内毒素血症小鼠存活时间的影响 （）Tab.3 Extracts of Angelica dahurica on the survival time of endotoxem icm ice（ induced by the intra-abdom inal injection of LPS and D-GalN （ ten batches）（）

注: 与吐温 -80 对照组比较，*P＜0.05 ，**P＜0.01; 另:10批不同产地白芷药材编号依次为 S1-S10

/min 5%吐温-80 对照组组别 剂量 /（ 原生药 g/kg） 动物数/只 生存时间10 761.5 ±28.4阳性对照组 3（ 成药） 10 1 241.5 ±37.5**S1 25 10 964.9 ±31.8*S2 25 10 1 061.5 ±28.4**S3 25 10 1 162.9 ±33.8**S4 25 10 1 232.9 ±24.8**S5 25 10 1 242.9 ±34.8**S6 25 10 992.9 ±24.8*S7 25 10 1 012.9 ±42.8*S8 25 10 1 082.9 ±31.8**S9 25 10 972.9 ±39.8*S10 25 10 1 142.9 ±35.8 -**

3.4 白芷抗内毒素血症作用与 HPLC指纹图谱的谱-效相关性分析

3.4.1 多元回归分析结果 自变量 （ X） 为 13 个共有峰的量化峰面积 （X1-X13） ， 因变量 （ Y） 为小鼠 72 h 之内的死亡时间。 使用软件 SPSS 19.0，采用逐步后退法建立方程。得到的方程为 Y= 7.137-0.02X1+0.058X2-0.041X3-0.298X4-0.102X5-0.019X7+0.123X8+0.063X9+ 0.002X11+0.031X12可看出共同被引入方程的是 1、2、 3、 4、 5、 7、8、 9、11、 12 号峰， 其中与延长小鼠72 h之内的存活时间 （抗内毒素血症作用）具有正相关的色谱峰为 2、 8、 9、 11、 12 号峰， 负相关色谱峰为 1、 3、 4、 5、 7 号峰。

3.4.2 灰色关联度分析结果 由表 4 可看出通过将 10 个批次白芷的 13 个共有色谱峰与其相应引起小鼠 72 h之内的存活时间相关联发现， 关联度X11＞X8＞X5＞X12＞ X9＞ X2＞ X4＞ X13＞ X3＞X10＞ X7＞ X1＞ X6。 与多元回归分析结果结合分析， 可综合得出， 2、 8、 9、 11、 12 号峰是与抗内毒素血症作用关联性较大的正相关色谱峰 （其中关联度11 ＞8 ＞12 ＞9 ＞2），即主要具有抗内毒素血症作用，其中8号为欧前胡素、9号为氧化前胡素、 12 号峰为异欧前胡素， 色谱峰 2 和 11 具体成分与结构尚待进一步研究证实。

表 4 白芷正丁醇部位指纹图谱共有峰与 72 h小鼠存活时间关联结果Tab.4 Connection of comm on peaks of the n-butanol extract and 72-hour survival tim e for endotoxem icm ice

3.5 与抗内毒素血症作用关联性较大的色谱峰所对应物质抗内毒素作用的验证实验结果 所加异欧前胡素、氧化前胡素试管反应液澄清，欧前胡素试管反应液稍有混浊但倾斜试管可流动。由此可见欧前胡素、氧化前胡素、异欧前胡素均有体外抗内毒素作用。

4 讨论

中药的功效，并不是单个化学成分，而是药材饮片或成药制剂内所含有效物质整体作用的结果。中药指标成分的控制，难以真正反映和评价中药的药效，需要对物质群整体进行控制。 中药指纹图谱采用色谱及其联用技术最大限度地获取有用的化学信息，同时结合化学计量学的理论与方法，进行数据解析和特征信息的提取，合理量化、优化指纹图谱。 中药指纹图谱能够反映中药单药及复方“多组分多靶点的整合调节作用”的特点，它以“识别指纹图谱”的表现形式来控制中药复方制剂的质量。尽管中药指纹图谱方法采用多指标比对的方法控制中药质量，被认为整体地控制了中药的物质群体，但是单纯的化学指纹图谱并不能很准确地评价中药的成分与其药效之间存在的相关联系。而建立在中药指纹图谱基础之上的中药指纹图谱谱效相关性研究，将标示活性成分群特征峰的中药指纹图谱与药效结果对应起来，将中药指纹图谱中化学成分的变化与中药药效结果联系起来，建立中药谱效关系，反映中药复方制剂内在质量［11-12］。 建立谱-效模型，将药效学信息与化学指纹图谱信息进行相关性研究，寻找与药效相关的指纹峰或成分群，有利于中药活性物质基础的筛选和中药质量有效性控制，是寻找中药活性成分一种新思路。

在建立中药谱-效相关关系方面，有多种统计学方法［13］，包括主成分回归分析、相关分析、典型相关分析、多元线性回归分析、逐步回归分析、灰色关联度分析、聚类分析等，其中回归分析是一种较通用也常用的方法，但是由于将分析的所有变量一次性全部引入进行分析，因同时引入的变量较多，使各因素的影响变小，掩盖了主要因素的作用，使其不能通过显著性检验，从而难以保证两者关联的准确性。 本实验采用逐步后退回归法［13］46，它能最大程的的保留有贡献的变量，但无法同时反映所保留各个变量与因变量的相关程度的大小。

近年来，灰关联度方法也逐渐用于研究中药指纹图谱与 其药 效 学 之间 的 关 系［14-16］。 灰关 联 分 析是灰色系统理论的一种新的分析方法，是根据因素之间发展趋势的相似或相异程度，亦即“灰色关联度”，作为衡量因素间关联程度的一种方法。 灰色关联分析方法可描述系统发展过程中因素间相对变化的情况，如果二者在发展过程中的相对变化基本一致，则认为二者关联度大，反之，则认为二者关联度就小。由于灰色关联分析就是通过对序列几何关系来比较系统中多因素关系的紧密程度，其紧密程度可由序列曲线的几何形状接近（或相近）程度来度量。序列曲线的几何形状接近程度的存在两个方面的差异，一个是序列曲线正相关，一个是序列曲线负相关，对于正相关和负相关仅仅通过关联系数无法反映。

本研究同时运用多元回归和灰色关联度结合方法将药效学信息与 HPLC指纹图谱化学信息进行相关性研究，综合得出 2、8、9、11、12 号峰是与抗内毒素血症作用正相关色谱峰（8 号为欧前胡素、9 号为氧化前胡素、12 号峰为异欧前胡素）。 并对欧前胡素、氧化前胡素、异欧前胡素体外抗内毒素作用进行了初步验证，结果欧前胡素、氧化前胡素、异欧前胡素均有体外抗内毒素作用。 色谱峰2 和11具体成分与结构及抗内毒素作用尚待进一步研究验证。

本研究通过对白芷进行“谱-效” 相关性的分析，建立了一种能够使其图谱和药效相对应和统一的质量标准控制的模式。这仅仅是对白芷谱效学的尝试性研究，初步表征了白芷抗内毒素血症作用的物质基础，今后仍需要大量的验证和进一步的研究。

［ 1 ］ 王文江，姚咏明.中医药抗内毒素血症治疗的研究进展［J］.中国中西医结合急救杂志，2004，9（11）:317-320.

［ 2 ］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010 年版一部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:97.

［ 3 ］ Lechner D，Stavri M，Oluwatuyi M，et al.The anti-staphylococcal activity of Angelica dahurica （ BaiZhi） ［ J］ .Phytochemistry，2004， 65（3）:331-335.

［ 4 ］ Song D K，Kim JY，Li G， et al.Agents protecting against sepsis from the roots of Angelica dahurica［ J］ .Biol Pharm Bull，2005，28 （2）:380-382.

［ 5 ］ 陶金华，狄留庆，文红梅，等.中药指纹图谱谱效相关性研究思路探讨［ J］ .中国中药杂志，2009，34（18） :2410-2413.

［ 6 ］ 陈 奇，邓文龙，张世玮，等.中药药理研究方法学［M］.北京:人民卫生出版社，1994:305-307.

［ 7 ］ MurakamiK， KobayashiF， Ikegawa R.Metalloproteinase inhibitor prevents hepatic injury in endotoxemic mice［ J］.Eur JPharmacol，1998，341（1） :105-110.

［ 8 ］ 孙芳芳.浅议灰色关联度分析方法及其应用［J］.科技信息，2010，17（2）:364-366.

［ 9 ］ 陈思峰，党耀国，方志耕，等.灰色系统理论及应用［M］.北京:科学出版社，2010:62-105.

［10］ 刘云海，陈永顺，谢 委，等.柴胡总皂苷抗内毒素活性研究［J］.中药材，2003，26（6）:423-426.

［11］ 李 戎，闫智勇，李文军，等.创建中药谱效关系学［J］.中医教育，2002，21（2）:62.

［12］ 罗国安，王义明，曹 进，等.建立我国现代中药质量标准体系的研究［ J］.世界科学技术-中医药现代化，2002，4 （4）: 5-11.

［13］ 陈 峰.医用多元统计分析方法［M］.北京:中国统计出版社，2006:30.

［14］ 陶 红，林庆锋，张 韬，等.治疗手足口病中药的灰关联分析［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18（4）:282-284.

［15］ 刘瑜彬，王 晖，唐晓峰，等.灰关联聚类法评价补中益气汤对大鼠气虚发热的效果［ J］.中国实验方剂学杂志，2010，16（18）:124-128.

［16］ 朱诗塔，雷 鹏，李新中，等.掌叶大黄不同炮制品指纹图谱与其止血作用的灰关联度分析［J］.中南药学，2009，7（1）: 55-58.

The fingerprint-pharmacology of Angelica dahurica to endotoxem ia

ZHANG Hui1， HAIGuang-fan1， LIZhi-yong2， ZHANG Ting3， LÜJie-li4*
（ 1.College of Pharmacy of Pharmacology Teaching and Research Section， Xinxiang Medical University， Xinxiang 453003， China;2.Department of Cerebral Surgery， The Third People's Hospital of Anyang City， Anyang 455000， China;3.Sanquan Medical College， Xinxiang Medical University，Xingxiang 453003， China;4.Collegeof Pharmacy of ChineseMateria Medica Section， Xinxiang Medical University， Xinxiang 453003， China）

AIM To study the active constituents in Angelica dahurica against endotoxemia.METHODSThe petroleum ether，ethyl acetate， n-butanol， aqueous extracts from Angelica dahurica were obtained， their antiinflammation and anti-endotoxin experiments were carried out on the mouse model of capillary hyperpermeability caused by the injection of acetate acid and the endotoxemiamodel by the intra-abdominal injection of LPS and DGalN.RESULTS The n-butanol extract had the best anti-inflammation and anti-endotoxin effect on the mice. Their chromatographic peaks isolated were identified as imperatorin （ No.2） ， and oxypeucedanin （No.8） ， isoimperatorin （ No.9）.Two other substances remained unknown.CONCLUSION The fact that ten batches of Angelica dahurica n-butanol extract all extend the survival time of endotoxemic mice proves its profile of spectrumpharmacology.

Angelica dahurica;endotoxemia;fingerprint;spectrum-pharmacology relationship

R969.1

:A

1001-1528（2014）12-2491-07

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.12.011

2013-12-04

国家自然科学基金青年基金项目 （ 81202916 ）

张 慧 （ 1982—） ， 女， 硕 士， 讲 师， 研 究 方 向: 中 药 活 性 成 分 及 药 效 学 研 究。 Tel:15565434721， E-mail:zhanghui12070300@163.com

*通信作者: 吕洁丽 （1980—） ， 女， 博士， 副教授， 研究方向: 中药活性成分及药效学研究。 Tel: （0373 ） 3029101， E-mail:ruoxin0371@163.com