反复脑缺血再灌注小鼠造模影响因素的Logistic回归分析※

田元祥 赵建新 徐 蕾 王奕力 孙 奇 王先敏

(中国中医科学院中医临床基础医学研究所，北京 100700;新疆维吾尔自治区中医药研究院科研科，新疆 乌鲁木齐 830000)

反复脑缺血再灌注模型(repeated cerebral ischemiareperfusion，RCIR)在造模过程中，实验小鼠死亡率极高。我们在长期研究过程中观察到，对RCIR造模技术陌生的手术操作者，实验小鼠死亡率在60% ～80%左右，经过规范培训的熟练手术操作者，实验小鼠死亡率在20%～40%左右。为了探讨造模过程中与造模结局相关的影响因素，我们对RCIR造模过程中小鼠体质量、操作者因素与造模结局之间的关系进行研究，以期降低造模过程中实验动物的死亡率，结果如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物与环境 取健康SPF级雄性昆明小鼠48只，其中1只未手术，47只进行RCIR造模。适应饲养7 d后，体质量 32.5 ～37.7 g，平均(35.11 ±1.41)g。由北京市华阜康生物科技股份有限公司提供，动物合格证号:SCXK(京)2009－0007。实验在北京华大蛋白质研发中心有限公司清洁级动物室进行，实验动物室许可证号:SYXK(京)2013－0034。

1.2 造模与记录方法 取47只雄性昆明小鼠，造模采用文献［1］成熟方法，第1次缺血20 min后，松开夹闭的血管再灌注10 min，再次缺血20 min。在适应饲养时对每只小鼠进行编号，记录每只小鼠体质量。在造模过程中始终标明小鼠编号进行跟踪，直至该鼠出现造模结局(成活或死亡)，2位操作员的造模成活情况分别记录。为了方便描述，对结局进行定义。造模结局A:是指在第1次缺血时死亡;造模结局B:是指在第2次缺血时死亡;造模结局C:是指在手术第2 d死亡;造模结局D:指存活;造模结局E:是指造模结局A、B、C的总和。2位操作员年资相仿，并经过同期规范培训，分别记为操作员X和操作员W，操作员X造模25只，操作员W造模22只。

1.3 统计学方法 应用SPSS 11.5软件进行统计学分析，根据数据情况分别采用单因素方差分析、卡方检验、t检验及二分类Logistic回归分析法。

2 结果

2.1 小鼠体质量对4种造模结局的影响 见表1。

表1 小鼠体质量对4种造模结局的影响 ±s

表1 小鼠体质量对4种造模结局的影响 ±s

n 体质量(g) F值 P值造模结局A 10 35.16 ±1.73造模结局 B 9 35.09 ±1.17 0.006 3 0.999 3造模结局 C 3 35.17 ±0.21造模结局D 25 35.10 ±1.49

表1数据采用单因素方差分析法分析，4种造模结局的小鼠体质量无统计学差异(F=0.006 3，P=0.999 3)。

2.2 小鼠体质量对2种造模结局的影响 造模结局A、B、C都是小鼠死亡，只是发生的阶段不同，为了消除这3种阶段对结果可能出现的影响，将造模结局A、B、C合并，即造模结局E。采用t检验方法对结果进行分析，结果见表2。

表2 小鼠体质量对2种造模结局的影响 ±s

表2 小鼠体质量对2种造模结局的影响 ±s

n 体质量(g)t P造模结局 E 22 35.13 ±1.35－0.076 5 0.939 4造模结局D 25 35.10 ±1.49

由表2可见，2种造模结局小鼠体质量比较差异无统计学意义(t=－0.076 5，P=0.939 4)。

2.3 2位操作员小鼠造模结局比较 造模结局A、B、C、D中，C只有3例，其中操作员W 1例，操作员X 2例，例数太少，不符合统计学检验方法的要求，因此将造模结局B、C合并为B+C计算，采用卡方检验对结果进行分析，结果见表3。

表3 2个操作员小鼠造模结局比较 只

由表3可见，2个操作员之间小鼠造模结局未见统计学差异(χ2=2.796，P=0.247 1)。

2.4 2位操作员3种造模结局小鼠体质量比较 基于造模结局小鼠体质量，采用t检验对结果进行分析，结果见表4。

表4 2位操作员3种造模结局小鼠体质量比较

由表4可见，3种结局小鼠体质量在2个操作员之间均未见统计学差异(均P＞0.05)。

2.5 2位操作员2种造模结局小鼠比较 表3、4是基于A、B+C、D 3种造模结局分类进行的统计分析，是否分类过多会对结果有明显影响。因此，将造模结局合并成2种:造模结局E和D。D是所有存活的小鼠，E是所有死亡的小鼠。采用χ2检验对基于小鼠数的结果进行分析，结果见表5。

表5 2位操作员2种造模结局小鼠比较 只

由表5可见，2个操作员之间造模小鼠成活率无统计学差异(χ2=0.997，P=0.318 0)。

2.6 2位操作员2种结局小鼠体质量比较 在表5基础上，又基于2种造模结局小鼠体质量，采用t检验对结果进行分析，结果见表6。

由表6可见，2种结局小鼠的体质量在2位操作员之间均未见统计学差异(P＞0.05)。

表6 2位操作员2种结局小鼠体质量比较 ±s

表6 2位操作员2种结局小鼠体质量比较 ±s

造模结局n E体质量(g) n D体质量(g)操作员X 10 34.84 ±1.49 15 34.85 ±1.62操作员 W 12 35.38 ±1.22 20 35.47 ±1.25 t 0.908 4 1.070 7 P 0.376 0 0.295 7

2.7 2位操作员和体质量对小鼠造模结局的影响 进行二分类Logistic回归分析，以造模结局E、D为因变量，以体质量和操作员为自变量，检验水准α设为0.05，分析2个操作员和体质量对小鼠造模结局的影响，结果见表7。

表7 2种结局小鼠二分类Logistic回归分析

由表7可见，操作员及体质量与造模结局无明显影响(P＞0.05)。

3 讨论

3.1 在一定范围内，小鼠体质量对造模结局无影响 文献研究发现，实验动物的体质量对造模结局有一定的影响［2－3］。如赵洪云等［2］在大鼠心肌梗死模型制作中发现，大鼠的体质量过小，实验器官也小，手术操作难度大，对手术创伤的耐受性差;体质量过大，术后死亡率明显增高。甄毅岚等［3］研究发现，体质量小，＜20 g的小鼠颈部血管易分离，操作简单，但体质差，成活率低;体质量大，＞30 g的小鼠，颈部脂肪较多，实验中分离血管的难度加大，容易造成血管破裂，影响造模的成功率。本研究采用体质量在32.5～37.7 g之间的小鼠研究表明，体质量对实验动物造模结局未见明显影响(P＞0.05)，与文献结果相反。可能与甄毅岚等［3］采用的小鼠体质量在20～39 g较宽范围不同，即本实验结果能够说明小鼠体质量在32.5～37.7 g之间，体质量对造模结局没有影响，其他体质量范围的影响有待于以后研究。

3.2 对造模结局无影响的体质量差可以扩大到5.2 g 选择什么范围体质量的小鼠对造模结局影响小，以往的实验中一般掌握为5 g，但没有研究数据作为佐证，文献的认识也不一致［4－5］。王芙蓉等［4］根据经验认为，小鼠的体质量差别不超过7 g，对梗死体积就没有显著的影响。但这是经验认为，没有实验研究的科学依据。甄毅岚等［3］将4 g作为一个分组的区间，也未对4 g是否对研究结果有影响做研究数据分析。本实验采用单一性别的雄性小鼠，体质量最小为 32.5 g，最大为 37.7 g，跨度为 5.2 g，并提供了具体的研究数据进行统计学分析，结果在这个体质量范围内，体质量对造模结局没有影响。所以，能有科学根据地说，对造模结局无影响的体质量差可以扩展到5.2 g。

3.3 年资相仿并经过同期规范培训的操作员对造模结局无影响 为了规范化实验研究的操作，本实验选取了未接触过本实验造模流程的2位操作员，同期进行规范化实验方法培训，并进行了2批次50只小鼠的预实验，然后投入本次正式实验中。在相同的时间和环境中，使用相同的实验器械，结果表明经过同期规范培训年资相仿的实验员对造模结局无影响(P＞0.05)。结果提示，实验前规范化的培训和一定数量的预实验，操作人员的实验水平便可以达到实验要求。

［1］ 赵建新，田元祥，李国明，等.拟血管性痴呆小鼠模型皮层及海马细胞病理组织学动态观察［J］.中国病理生理杂志，2000，16(11):1214－1216.

［2］ 赵洪云，管慧红，钟雪云，等.开胸冠状动脉结扎法制作大鼠心肌梗死模型［J］.国外医学:内科学分册，2005，32(12):540－542.

［3］ 甄毅岚，王亚男，李晟，等.线栓法制备不同体重KM小鼠局灶性脑缺血/再灌注模型的建立及评价［J］.中国实验动物学报，2013，21(2):39－44，插5.

［4］ 王芙蓉，姜永生，肖文伍，等.颈内动脉线栓法建立小鼠局灶性脑缺血再灌注模型［J］.卒中与神经疾病，2003，10(2):112－114.