基因芯片技术在德州市女性宫颈HPV感染中的应用研究

王 晶，刘 梅

人乳头瘤病毒(human papilloma virus，HPV) 是双链闭环小DNA病毒，可侵袭皮肤和黏膜等组织并引起人类多种良、恶性病变。根据HPV是否有致癌作用，可分为高危型(high risk，HR)HPV和低危型(low risk，LR)HPV。现已证实HR-HPV的HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-33、HPV-35、HPV-39、HPV-45、HPV-51、HPV-52、HPV-56、HPV-58、HPV-59、HPV-68、HPV-73、HPV-82主要与宫颈癌的发生有关；LR-HPV的HPV-6、HPV-11、HPV-41、HPV-42、HPV-43、HPV-44主要引起生殖器和肛周的湿疣类病变以及宫颈上皮内瘤变[1]。据报道全世界每年约有50万人罹患宫颈癌，造成30万人死亡，我国每年新发病例约占10万，约占世界宫颈癌新发病例的1/4[2]。由于HPV的致病性与型别密切相关，基因分型检测对宫颈癌的早期筛查、防治、预后判断等具有重要的临床意义。为此，笔者收集德州市人民医院3 006例宫颈分泌物标本进行HPV基因分型检测，以了解德州地区HPV的感染率及分布情况，为宫颈癌的防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 研究对象 2008年10月至2013年7月期间在德州市人民医院妇产科门诊就诊的患者或健康体检者，行宫颈筛查。年龄16～65岁，来自德州13个县市区。

1.2 标本采集 采集标本前3天无阴道灌洗、性生活及妇科检查。由临床专科医师进行采取，暴露宫颈，用棉拭子擦去宫颈口多余分泌物，将子宫颈采样刷插入子宫颈管内，轻缓施力，令刷毛均匀散布于子宫颈上，以拇指与食指抓紧刷柄并顺时针转动5～6圈，将采样刷头分开并推入装有保存液的小瓶中，将采样的小瓶盖扭紧，注明标本编号、患者姓名、送检医师及日期等资料，将装有所采样本的小瓶连同检验申请单送至检验科。

1.3 结果判断 肉眼观察呈蓝紫色圆点为阳性，根据芯片上HPV亚型相应的分布点判断HPV亚型。每一张芯片上有PCR反应质控点和杂交显色点各1个。质控点不显色提示试剂失效或操作有误，需重新试验；出现多个阳性点为多重感染。

1.4 数据分析 所有数据录入计算机，应用SPSS10.0 软件列连表资料分析。

2 结果

2.1 HPV感染率 在3 006份宫颈标本中HPV的检出率为17.80%(535/3 006)，其中HR-HPV的检出率为14.77%(444/3 006)，LR-HPV检出率为3.03%(91/3 006)。共检出16个HR-HPV亚型，按检出率由高到低排列依次为HPV-16 (3.23%，97/3 006)、HPV-52(1.33%，40/3 006)、HPV-68(1.26%，38/3 006)、HPV-31(1.10%，33/3 006)、HPV-53(0.96%，29/3 006)、HPV-33(0.86%，26/3 006)、HPV-18(0.80%，24/3 006)、HPV-CP8304(0.77%，23/3 006)、HPV-66(0.73%，22/3 006)、HPV-39(0.40%，12/3 006)、HPV-58(0.37%，11/3 006)、HPV-59(0.37%，11/3 006)、HPV-56(0.30%，9/3 006)、HPV-45(0.27%， 8/3 006)、HPV-51(0.23%，7/3 006)、HPV-35(0.13%，4/3 006)。可见HPV-16、HPV-52和HPV-68检出率居前3位，为高危型优势亚型。LR-HPV各型检出率由高到低排列依次为：HPV-6(1.50%，45/3 006)、HPV-11(1.13%，34/3 006)、HPV-42(0.30%，9/3 006)、HPV-44(0.10%，3/3 006)、HPV-43(未检出)。

2.2 HPV多重感染率 535例HPV阳性标本有79例多重感染，占14.77%。多重感染中，包括二重感染60例(11.21%)、三重感染14例(2.61%)、四重感染5例(0.93%)。3个高危型优势亚型(即HPV-16、HPV-52和HPV-68)乃是多重感染的主要组成。

2.3 HPV感染的年龄分布 HPV阳性率在56～65岁组达到高峰，为38.40%，其余年龄段的感染率为16.20%～19.20%。详见表1。

表1 不同年龄组的 HPV感染率

3 讨论

宫颈癌是女性常见恶性肿瘤之一，其发病率仅次于乳腺癌，宫颈癌发生与HR-HPV的感染关系密切。不同HR-HPV亚型致癌作用不同，同一型别HR-HPV的持续性感染才有可能引起宫颈上皮细胞的非典型增生，进而发展为原位癌[3]。HPV分型检测能够明确感染者的HPV亚型及感染类型(单一感染或多重感染)，同时根据感染的HPV亚型预测患者的发病风险，以制定正确合理且有效的治疗方案和随访时间[4]。除此之外，HPV分型检测与病理检查结果相结合，有助于发现低度病变的宫颈癌患者，有效降低漏检率。

本研究显示，德州地区女性HPV总阳性率17.80%，与深圳地区14.50%相近[5]，高于呼和浩特地区的13.04%[6]，低于浙江省台州地区的35.08%[7]。除HPV-43型外，各种基因型均有检测，在高危亚型中HPV-16检出率最高，占阳性总感染率的18.13%(97/535)，其后依次是HPV-52、HPV-68。高危优势型不同于叶德华[8]报道的成都市龙泉驿区女性宫颈HPV感染的常见型别：HPV-52、HPV-58、HPV-16，表明HPV感染基因型有其明显的人群及地域区别。不同亚型HPV感染对宫颈细胞恶性病变的发生、发展有不同的影响，所以对亚型的统计是必要的。

目前，对HPV感染与年龄的相关性有不同观点，罗慧琴等[9]报道在16～24岁年龄段女性HPV感染率最高为57.43%，认为与该年龄段性生活频繁或性伴侣多有关，其次是55岁以上年龄段女性为51.56%，出现“两头高”的现象。但本研究中HPV阳性率则在56～65岁组达到高峰，为38.40%，其余年龄段的感染率稳定在16%～19%之间，这与国内吴心音等[10]的报道一致，提示绝经期女性由于卵巢功能下降，雌激素水平降低，机体免疫力及清除HPV感染的能力下降，易导致HPV持续性感染，应是重点筛查的人群。

本研究还显示，多重感染占总感染的14.77%，以二重感染最多见，占多重感染的75.95%。无论单一感染还是多重感染，HPV-16、HPV-52、HPV-68均为优势亚型。Fife等[11]认为多重感染者发展为癌的危险性较单一感染者大。由于HR-HPV亚型及感染类型对宫颈癌发生的不同影响，以及

HR-HPV携带的地域和人群等差异，混合HR-HPV检测不能满足临床的需要，应尽快在国内推广HR-HPV亚型具体分型，以提高相关筛查和诊断的特异性和临床提示作用。

宫颈筛查已被证明是降低宫颈癌发病率的有效途径，HPV基因分型检测能够发现致癌诱因，使早期发现极大地提高，并使筛查更具针对性，是宫颈筛查的划时代进步。本研究通过导流杂交基因芯片技术检测德州地区HPV常见型，获得了HPV感染率、优势亚型分布、感染类型以及年龄依赖的HPV携带等第一手分子流行病学资料，为HPV检测项目的选择提供了依据，也可以为进一步HPV疫苗的临床应用和宫颈癌防治策略的制定提供参考。

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