动物源性食品中氯霉素残留检测研究进展

姚骏，李沛然，暴悦梅，王琦，曹菲菲

（1.天津市食品研究所有限公司，天津 301609；2.天津农学院动物科学与动物医学学院，天津 300384）

氯霉素（chloramphenicol，CAP）又叫左旋霉素，是光谱类抗生素，在低浓度时即可抑制多种细菌的生长，特别是流感杆菌和脑膜炎球菌[1]。CAP广泛应用于水产品养殖的病害防治，但其对人体有较大的毒副作用，主要表现为：抑制骨髓造血功能，引起再生障碍性贫血、细胞减少性贫血、血小板减少和粒状白细胞减少[2]。

为了保障人民的身体健康以及扩大农产品的贸易往来，建立灵敏高效的氯霉素残留检测方法对于保障人民身体健康以及扩大农产品贸易往来非常必要。

1 动物源性产品中氯霉素残留的检测方法

1.1 微生物测定法

该方法可分为棉签法、杯碟法等[3]。其原理是根据氯霉素对特定微生物的生理机能及代谢的抑制作用，定性或定量确定样品中氯霉素残留。梅先之等用棉签法研究了鲤鱼体内氯霉素残留，根据涂满枯草芽孢杆菌培养基上有无和大小判断氯霉素残留量，最低检出限为1μg/g[4]。杯碟法是将处理过的样品加入牛津杯，放置检测培养基上，根据抑菌圈判断氯霉素残留，主要采用八叠球菌作为试验菌种[5]。焦彦朝[6]等用杯碟法检测了鲤鱼体内氯霉素残留，检出限为0.20μg/g，平均回收率为67.5%。

1.2 色谱分析法

1.2.1 气相色谱分析法

刘永涛[7]等用毛细管电子捕获气相色谱法测定了尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）和南美白对虾（Penaeus vannamei）中氯霉素残留量，氯霉素在 1.0μg/L～500.0μg/L浓度范围内呈线性相关，相关系数r≥0.9983，加标浓度在0.2μg/kg～10.0μg/kg时，回收率为83.30%～101.22%。Allen[8]等研究了奶中氯霉素残留的GC检测方法，以m-CAP为内标，通过SylnoBFT衍生化，用电子捕获检测器（ECD）检测,检测限达到1 g/kg。

1.2.2 液相色谱分析法

黄志勇[9]等利用高效液相色谱（HPLC）研究了水产品中氯霉素残留，浓度在50μg/mL～1000μg/mL内,呈良好线性关系（R2=0.9994），检出限为 0.014μg/g。T.L.Li[10]等以乙酸乙酯为提取液，蒸干后,再用氯化钠溶解，正己烷脱脂，过C18SEP柱，278 nm检测,检测限达到 5μg/kg,回收率为（95.6±4.5）%。

1.2.3 气质联用分析法

刘宜孜[11]等报道了蜂蜜中氯霉素残留的固相萃取气相色谱质谱联机法。结果表明不同浓度氯霉素的回收率都在90%以上,加标的回收率为80%～95%，精密度（RSD）为 7.2%～18.2%，最低检出限为 0.1μg/kg。谢孟峡[12]等采用气质联用法研究了多种动物组织样品中氯霉素残留。以乙酸乙酯和磷酸盐缓冲溶液作为提取液，通过硅胶和C18固相萃取柱进行净化和富集。检测结果为不同样品的加标回收率为80%～100%，检出限为0.1μg/kg。Nagata[13]等用GC-MS研究了黄尾鱼肌肉中氯霉素，氟氯霉素和甲矾霉素残留。利用乙酸乙酯提取氯霉素，在Florisil小柱中用3∶7的甲醇-乙醚洗脱，在50℃条件下用BSA衍生10 min。质谱采用EI源，检测离子为m/z=208225。最终结果回收率高于65%，检出限为 5μg/kg。

1.2.4 液质联用分析法

李资玲[14]等利用乙酸乙酯提取浓缩鱼肉中的CAP，并且经过正己烷脱脂净化，利用HPLC-MS对样品进行外标定量分析。结果表明：CAP浓度在0.04μg/kg～1.0μg/kg 范围内时，R2=0.9999，0.10、0.20、0.40μg/kg添加水平下的回收率为91.0%～100.1%（RSD：2.6%～4.1%），检出限为 0.01μg/kg，定量限为 0.02μg/kg。Victor[15]等利用LC/MS检测了多组织中的氯霉素残留。前处理分别利用乙腈、丙酮提取组织和尿中的CAP，再过LMS固相萃取柱净化。LC采用甲酸-甲醇作流动相，MS使用大气压电离（API）模式，选择离子m/z321（M-2H）检测，结果显示肌肉中检测限为0.5μg/kg，回收率（95±0.48）%。田艳玲[16]等利用高效液相色谱-串联四极杆质谱联用测定牛奶中的氯霉素，乙腈除去蛋白，以MGⅢ-C18柱（2.1 mm×150 mm，1.8μm）反相分离，电喷雾负离子MRM模式检测，检出限为0.07μg/L，加标回收率平均为103.4%。

1.3 免疫分析法

免疫分析法（immunoassays，IAs）是以抗原与抗体的特异性、可逆性结合反应为基础的分析方法，主要包括酶联免疫法、免疫传感器法、胶体金免疫层析法和磁微粒免疫分析法。

1.3.1 酶联免疫法

谭慧[17]等利用间接酶联免疫检测（ELISA）方法检测水产品中CAP残留，检测限达到0.01μg/kg，两种添加水平（0.5μg/kg 和 2.0μg/kg）的加标回收率分别为72%～116%和86%～108%。马玲[18]等以常规两步式化学发光酶免疫法（CLEIA）为前提，采用同时加入一抗和二抗的方法，优化包被条件和竞争反应时间，形成了一步式CAP检测方法，且最优条件下检测限为0.01μg/L，同常规两步式方法相比，检测时间缩短1.5 h。

1.3.2 免疫传感器法

张丽君[19]等建立了分子印迹电化学传感器的CAP检测法，以邻苯基酚为功能单体，CAP分子印迹聚合物（MIP）膜通过电化学聚合方法在Pt电极上制备，结果表明最优条件下CAP线性范围为4.33×10-8mol/L～3.09×10-6mol/L，检出限为 2.5×10-8mol/L。Agül L[20]等建立活性炭微电极的氯霉素电化学检测法，检出限为15ng/mL，测试样品的回收率均在97%以上。

1.3.3 胶体金免疫层析法

宋红波[21]等利用胶体金技术检测了鸡肉、鱼肉和虾肉中CAP残留，加标在0.5μg/kg及以上的样品均能用胶体金试剂盒测出，并且用气象色谱法验证，并未出现假阳性情况。张燕[22]等建立并优化了渗滤式和侧流式两种免疫胶体金法，灵敏度分别达到0.8μg/L和1μg/L，通过酶联免疫试验验证了其有效性，并利用加速稳定试验证明了渗滤式试纸条可在6个月内4℃下保持结果可靠性。

1.3.4 磁微粒免疫分析法

黄薇[23]通过对比8种国内外超顺磁性纳米微粒特性，筛选出适合磁性免疫分析的磁球，并且通过免疫层析条件优化，建立起一种快速检测氯霉素的磁微粒免疫层析新方法，检出限达到4ng/mL。王西丽[24]等利用C18-磁性纳米颗粒萃取虾肉中氯霉素，得出最佳萃取条件为50℃结合5 min，甲醇洗脱3次，检出限达到0.1μg/kg，并且在 0.1μg/kg～10μg/kg 范围内，相关系数为0.9941。

2 问题和展望

色谱法灵敏度相对较高，结果准确，但是前处理比较复杂，成本较高，适合实验室检测。免疫分析法相对更加快速，成本低，适合大批量的快速检测，满足现场监控和基层检测的要求，并且随着新技术和新材料的出现，如磁微粒，氯霉素的检测会更加准确快速。

[1]王桂枝,石德时,毕丁仁.氯霉素在动物性食品中残留的危害.中国畜产与食品,1999,6(3):132-133

[2]韩伟涛,曹建亭,张志,等.酶联免疫法检测水产品中氯霉素含量[J].中国水产,2006(2):57-58

[3]宋巍巍,柴春彦,刘国艳,等.动物性食品中残留氯霉素检测方法的研究进展[J].畜牧与兽医,2007,39(4):54-56

[4]梅先芝,焦彦朝,何家香.棉签法测定鲤鱼肌肉组织残留氯霉素的研究.贵州畜牧兽医,1997,21(4):3-4

[5]宋华宾.动物性食品中抗生素残留及其检测方法研究进展[J].肉品卫生,1993(11):20-23

[6]焦彦朝,何家香,梅先芝.微生物检定法测定鲤鱼肌肉组织残留氯霉素[J].中国饲料,2000,5:22-24

[7]刘永涛,李荣,袁科平,等.气相色谱法同时测定水产品中氯霉素、氟甲砜霉素和甲砜霉素残留量[J].淡水渔业,2007,37(2):44-52

[8]Pfenning A P,Roybal J E,Rupp H S,et al.Simultaneous determination of residues of chloramphenicol, florfenicol, florfenicol amine,and thiamphenicol in shrimp tissue by gas chromatography with electron capture detection[J].Journal of AOAC International,2000,83(1):26-30

[9]黄志勇,李森,孙茂营,等.养殖水产品中氯霉素残留量的高效液相色谱测定方法[J].食品科学,2005,26(5):191－194

[10]Li T L,Chung-Wang Y J,Shih Y C.Determination and confirmation of chloramphenicol residues in swine muscle and liver[J].Journal of food science,2002,67(1):21-28

[11]刘宜孜,谢孟峡,韩杰,等.固相萃取-气相色谱-质谱联机分析蜂蜜中的氯霉素残留量 [J].北京师范大学学报:自然科学版,2004,40(2):232－236

[12]谢孟峡,刘媛,邱月明,等.固相萃取－气相色谱质谱测定动物组织中氯霉素的残留量[J].分析化学,2005,33(1):1－4

[13]Nagata T,Oka H.Detection of residual chloramphenicol,florfenicol,and thiamphenicol in yellowtail fish muscles by capillary gas chromatography-mass spectrometry[J].Journal of agricultural and food chemistry,1996,44(5):1280-1284

[14]李资玲,黄优生,熊向源,等.HPLC-ESI-MS/MS快速测定鱼肉中的氯霉素残留[J].广东农业科学,2010,7:217-219

[15]Hormazábal V,Yndestad M.Simultaneous determination of chloramphenicol and ketoprofen in meat and milk and chloramphenicol in egg,honey,and urine using liquid chromatography-mass spectrometry[J].Journal of liquid chromatography&related technologies,2001,24(16):2477-2486

[16]田艳玲,王浩.液相色谱-串联三重四极杆质谱测定牛奶中的氯霉素残留量[J].食品研究与开发,2011,32(3):125－127

[17]谭慧,麦琦.酶联免疫分析法测定水产品中氯霉素残留量[J].中国卫生检验杂志,2010,20(7):1649－1650

[18]马玲,关忠谊,吴健敏,等.氯霉素残留一步式化学发光酶免疫法的建立[J].南方农业学报,2011,42(2):205－208

[19]张丽君,陆天虹,李时银,等.氯霉素分子印迹聚合膜电极的制备及氯霉素检测[J].应用化学,2011,28(3):338－342

[20]Agül L,Guzmán A,Yá觡ez-Sede觡o P,et al.Voltammetric determination of chloramphenicol in milk at electrochemically activated carbon fibre microelectrodes[J].Analytica Chimica Acta,2002,461(1):65-73

[21]宋红波,陈军,王栋,等.胶体金免疫层析法和气相色谱法测定动物产品中氯霉素残留[J].食品科学,2012,33(8):229-232

[22]张燕,王玮,刘俊伟,等.免疫胶体金法快速检测动物源性食品中氯霉素残留的研究[J].中国食品学报,2009,9(1):196-200

[23]黄薇.磁性免疫层析技术在氯霉素残留快速检测中的应用研究[D].华中科技大学,2012

[24]王西丽,陈巧燕,李金峰,等.C18-磁性纳米颗粒萃取虾肉中氯霉素残留[J].中国兽药杂志,2012,46(10):20-23