有柄石韦中绿原酸的提取工艺优化

程丹丹，辛晓伟，高德民

(山东中医药大学 药学院,山东 济南 250355)

有柄石韦[Pyrrosiapetiolosa(Christ)Ching]为水龙骨科(Polypodiaceae)石韦属(Pyrrosia)植物。始载于《神农本草经》，具有清肺泄热、利水通淋、清湿热止血之功效。临床上用于热淋、血淋、石淋、小便不通[1]。石韦的主要活性成分为绿原酸，a.生育酚、里白烯、24-methy-lene-9，19-cyclolanost 、胡萝卜苷、香草酸等[2]。绿原酸具有抗菌消炎，抗氧化，兴奋中枢神经等作用，药典将其列为质量指标成分。实验主要针对绿原酸的提取工艺进行研究，为进一步开发利用及药理研究提供科学依据。

1 材料、仪器和试剂

1.1 材料

有柄石韦(采自胶东地区2013.09)，绿原酸标准品(上海金穗生物科技有限公司20130916)

1.2 仪器与试剂

海菁华754PC紫外-可见光分光光度计、KO-250E医用超声波清洗器、试剂均为分析纯，购自天津富宇试剂公司。

2 方 法

2.1 样品的制备[3]

石韦经粉碎，石油醚脱脂，分别称取5份，每份50 g,按表1条件[3]制备，得到水提物(W)，甲醇提取物(M)，50 % 甲醇提物[M(50 %)]，60 %乙醇提取物[E(60 %)]，丙酮提取物(A)。再称取9份，按表2条件制备，抽滤备用。

2.2 样品中绿原酸的测定

采用紫外光谱快速测定样品中绿原酸的含量[4]。用紫外可见光分光光度计在330 nm处测定各样品中吸光度。以浓度对吸光度值做标准曲线，所得绿原酸标准曲线及回归曲线方程为y=11 651x+10，r=0.999 7。

3 结 果

3.1 结果分析

结果显示不同的提取方法，绿原酸的提取率有很大差异(图1，表2)。60 %乙醇较其它溶剂提取率更高。其中实验号8条件下提取率最高，且明显高于其它条件下的提取率。实验号2，3，4的得率最低，试验号1,5,6,9的提取率相差不大。综合分析可知，影响因素的大小顺序为：超声时间>料液比>超声温度>浸渍时间。最佳提取条件为：料水比113 g·mL-1，浸渍时间50 min，超声温度80 ℃，超声时间20 min。即A3B2C3D3。

图1 不同浸提物中绿原酸的含量

表2 因素水平表

表2 正交试验设计及结果分析

3.2 试验验证

根据正交试验结果对A3B2C3D3条件进行多次实验，以验证该工艺的合理性和稳定性，结果无显著差异。

4 讨 论

绿原酸是有柄石韦中有效成分之一。其含量最高，具有广泛的活性。查阅资料可知测定有柄石韦中绿原酸的含量多采用高效液相色谱法[5]，也是药典收载的绿原酸测定方法，但需要较长时间，更高的费用，因此可采用紫外光谱对其含量测定，方便快捷，节省资源。超声时间对绿原酸提取率的影响最为明显，浸渍时间最不明显，料液比，超声温度对结果影响相差不大，最佳的工艺条件为A3B2C3D3。

查阅大量文献以及药典(2010版)可知很多工艺都是采用50 %甲醇提取，但实验发现60%乙醇提取率更高，为进一步研究提供参考。

参考文献：

[1] 中华人民共和国国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010.

[2] 王楠，王金辉，程杰，等.有柄石韦的化学成分[J].沈阳药科大学学报,2003,20(6)：425-427.

[3] 刘艳清,汪洪武.野菊花中绿原酸提取工艺的研究[J].时珍国医国药,2008,19(7):1612-1613.

[4] 邢丽红，李文龙，瞿海斌.金银花提取物中5种有机酸含量测定的紫外光度法[J].药物分析杂志,2011,31(3):547-551.

[5] 谢文湖，江丰.HPLC法测定不同产地中药石韦的绿原酸含量[J].江西化工,2009(2):67-69.