脱氧核苷酸钠注射液联合甘草酸二铵胶囊对人血白蛋白所致免疫性肝纤维化大鼠的影响

于首元 于兆安

（河南省南阳市张仲景医院，河南 南阳 473000）

脱氧核苷酸钠注射液联合甘草酸二铵胶囊对人血白蛋白所致免疫性肝纤维化大鼠的影响

于首元 于兆安

（河南省南阳市张仲景医院，河南 南阳 473000）

目的 观察脱氧核苷酸钠注射液（DNA注射液）联合甘草酸二铵胶囊（甘利欣）对人血白蛋白（HSA）诱导的大鼠肝纤维化形成的影响。方法 采用HSA诱导大鼠肝纤维化并随机分为DNA注射液联合甘利欣组、甘利欣组、秋水仙碱组、模型组和对照组5组。观察血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性、总蛋白（TP）、白蛋白（Alb）含量、白蛋白和球蛋白比值（A/G），放射免疫分析法测定层连蛋白（LN）、透明质酸（HA）、fn Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）的含量，化学法测定肝脏羟脯氨酸（HyP）的含量。光镜观察肝细胞结构和肝纤维化程度。结果 DNA注射液联合甘利欣能明显降低HSA诱导的肝纤维化大鼠ALT，AST活性（P＜0.05，P＜0.01），提高Alb、TP含量及A/G比值（P＜0.05，P＜0.01），降低血清LN、HA、Ⅳ-C含量（P＜0.05，P＜0.01）。DNA注射液联合甘利欣能使大鼠胶原纤维沉积明显减轻，假小叶结构显著减少。结论 DNA注射液联合甘利欣方可抑制HSA诱导的大鼠肝纤维化形成和发展，改善肝功能。

脱氧核甘酸钠注射液；甘草酸二铵胶囊；白蛋白；肝纤维化；DNA注射液

肝纤维化发病率高，是大多数慢性肝病发展为肝硬化的必经阶段，严重影响患者的预后。如何防治肝纤维化是目前亟待解决的课题之一，我院2012年2月至2012年10月应用脱氧核苷酸钠注射液（DNA注射液）联合甘利欣（甘利欣）对大鼠人血白蛋白（HSA）所致免疫性肝纤维化的影响作实验研究并探讨其抗肝纤维化的作用机制，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

①动物：Wistar大鼠，雄性，体质量260～350 g，由郑州大学试验动物中心提供。②药物：DNA注射液（北京赛生药物有限公司生产，哈尔滨誉衡药业有限公司代理，规格：2 mL：50 mg，批准文号：国药准字H11022106），甘草酸二胺胶囊（商品名：甘利欣，江苏正大天晴药业股份有限公司生产）。

1.2 方法

1.2.1 造模与给药

取48只大鼠按随机数字表法分成5组。除正常对照组8只外，其余每组10只。参照文献[1]制作大鼠免疫性肝纤维化模型。HSA（HSA广东佰易药业有限公司生产）用0.9%氯化钠注射液稀释，与等量的不完全弗氏佐剂（美国sigma产品）完全乳化。除正常对照组外，每只大鼠皮下多点注射HSA稀释液0.5 mL（含HSA 4 mg）共4次，前2次间隔14 d，后2次间隔l0 d。均由眼底静脉丛取血，分离血清，用免疫扩散法测定大鼠白蛋白抗体，待动物血清出现白蛋白抗体后将大鼠随机分为模型组，DNA注射液联合甘利欣组（联合用药组）、甘草酸二胺胶囊组、秋水仙碱组。尾静脉注射HSA，每周2次，第1周2.5毫克/只，每次0.5 mL，以后每次攻击增加0.5 mg，直至4.5 mg，维持此量，共16次。正常对照组尾静脉同时注射等容量0.9%氯化钠注射液。在尾静脉攻击前1 d各组动物给药：DNA注射液（50 mg/kg）、甘利欣方高剂量组（50 mg/kg），秋水仙碱组（0.1 mg/kg，临床用药的12倍）。每日1次，直至实验结束。对照组、模型组给予等体积的氯化钠注射液。实验结束时，将大鼠用3.5%水合氯醛麻醉，取血，采血后颈椎脱臼除死大鼠，解剖取肝，放人10% PBS配制的甲醛液中固定。

表1 DNA注射射液联合甘利欣对肝纤维化大鼠血清ALT，AST，ALB，TP，A/G的影响（）

表1 DNA注射射液联合甘利欣对肝纤维化大鼠血清ALT，AST，ALB，TP，A/G的影响（）

注：与模型组相比1）P＜0.05，2）p＜0.01

分组 剂量(mg/kg) n AST(U/L) ALT(g/L) ALB(g/L) TP(g/L) A/G对照组 - 8 97.52±9.812) 36.75±5.262) 47.85±4.632) 64.86±8.952) 3.77±1.522)模型 - 8 146.28±12.95 73.13±6.40 35.33±3.41 53.15±3.85 1.85±0.45 DNA注射液 50 8 112.34±13.211) 68.73±5.10 43.87±2.12 55.56±4.75 3.57±2.241)联合甘利欣甘利欣 50 8 105.07±12.32 2) 64.07±8.121) 44.40±4.742) 58.21±7.422) 3.13±1.522)秋水仙碱 0.1 7 104.11±15.101) 64.44±5.84 44.41±5.642) 57.16±6.172) 3.25±.1232)

表2 DNA注射液联合甘利欣对大鼠血清Ⅳ-C，LN，HA的影响（）

表2 DNA注射液联合甘利欣对大鼠血清Ⅳ-C，LN，HA的影响（）

注：与模型组相比1）P＜0.05，2）p＜0.01

分组 剂量(mg/kg) n Ⅳ-C(μg/L) IN(μg/L) HA(μg/mL) Hyp(μg/mg)对照 - 8 37.96±2.232) 46.68±15.872) 47.02±11.812) 0.75±0.252)模型 - 8 54.76±9.94 98.09±10.02 115,00±29.87 16.53±0.43 DNA注射液联合甘利欣 50 8 43.95±6.351) 74.31±13.73 77.35±6.782) 1.26±0.341)甘利欣 50 8 43.16±2.942) 67.30±25.931) 51.10±12.512) 1.7±0.332)-2秋水仙碱 0.1 7 42.50±6.261) 74.42±22.85 96.7±29.352) 1.06±0.282)

1.2.2 观测方法

①肝功能检测：测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT），天门冬氨酸氨基转移酶（AST），血清总蛋白（TP），血清白蛋白（ALB），白蛋白和球蛋白比值（A/G）。②血清HA，LN和Ⅳ-C和肝脏Hyp的测定按试剂盒说明书要求操作。③病理学观察：取同一块肝组织做病理切片检察，常规HE染色，观察肝组织学改变，Von Gieson（VG）胶原纤维颜色。肝纤维化按4级分[2]：0级（记0分）；I级（记1分）；Ⅱ级（记2分）：Ⅲ级（记3分）。

1.2.3 统计学处理

计量资料用t检验，等级资料用Ridit分析。采用SPSS 10.0统计软件进行统计处理。

2 结 果

2.1 对肝功能的影响

与对照组比较，模型组大鼠血清ALT、AST活性明显升高，血清ALB和TP明显降低，A/G比值明显倒置，提示HSA所致肝纤维化大鼠肝细胞明显受到损害。给予秋水仙碱、DNA注射液联合甘利欣、甘草酸二胺胶囊均能使AST，ALT显著下降，ALB，TP，A/G均明显升高，而联合用药组明显好于单用甘草酸二胺胶囊组组，表明DNA注射液联合甘草酸二胺胶囊有显著保肝降酶作用（表1）。

2.2 对血清Ⅳ-C，LN，HA，Hyp的影响

模型组大鼠血清Ⅳ-C，LN，HA和Hyp明显高于正常组，Ⅳ-C，LN，HA，Hyp含量增高，表明肝纤维化已经形成。与模型组比较，秋水仙碱和联合用药组均显著降低大鼠血清Ⅳ-C，LN，HA和Hyp的含量，表明DNA注射液联合甘利欣对白蛋白所致肝纤维化大鼠有较好的治疗作用（表2）。

3 讨 论

肝炎病毒感染引起的肝纤维化与机体免疫应答有关，采用HSA诱导的大鼠肝纤维化病理改变与病毒性肝炎相类似，更符合人慢性乙型肝炎肝纤维的形成机制。实验结果表明，HSA所致免疫性肝纤维化大鼠均有明显的肝损伤及慢性肝纤维化表现。DNA注射液联合甘利欣应用后对肝功能指标均有不同程度的改善，对ALT、AST的抑制作用明显。表明DNA注射液联合甘利欣可明显改善肝功能，具有保肝降酶作用，能使升高的HA、LN、Ⅳ-C、Hyp水平显著降低。病理组织切片和VG染色结果表明，联合用药可使白蛋白所致免疫性肝纤维化大鼠肝纤维化程度明显减轻，胶原纤维细胞和假小叶形成减少或界限模糊，表明DNA注射液联合甘利欣能抑制胶原的合成和ECM的沉积，对白蛋白所致的肝损伤、慢性肝纤维化大鼠具有保护作用和抗肝纤维化作用。DNA注射液是一种复方制剂，其组分为脱氧核糖胞嘧啶核苷酸、脱氧核糖腺嘌呤核苷酸、脱氧核糖胸腺嘧啶核甘酸及脱氧核糖鸟嘌呤核苷酸钠盐。该药是一种具有遗传特性的化学物质，与蛋白质相结合成核蛋白，为生物体的基本物质。它在个体的生长、繁殖、遗传、变异等生理生化功能方面起着重要作用，通过核糖核酸（RNA）控制蛋白质的合成，尤其对某些关键性酶蛋白的合成，起协调体内的一系列代谢作用。因此有促进细胞生长，增强细胞活力的功能，以及改变机体代谢的作用。DNA注射液联合甘利欣可以治HSA诱导的大鼠肝纤维化形成或发展，改善肝功能。提示DNA注射液联合甘利欣能显著降低血清转氨酶活力对肝细胞坏死有一定的改善作用，具有较好的抗大鼠免疫性肝损伤作用，这与临床应用DNA注射液治疗病毒性肝炎提供了一定的药理学依据，是治疗急慢性肝炎抗核酸代谢治疗的代表药物。

[1] 王宝恩,王志富,殷蔚黄,等.实验性免疫性肝纤维化模型的研究[J].中华医学杂志,1989,69(9):503.

[2] 韦艾凌.瘀痛消胶囊抗肝纤维化的实验研究[J].辽宁中医杂志,2002,29(7):446.

R657.3+1

：B

：1671-8194（2014）08-0037-02