细菌性阴道炎临界值室内质控物的研制及评价

许瑞娜，华建江，刘和录，陈 望，徐志康，李红萍，丁 华，李 娴

细菌性阴道炎临界值室内质控物的研制及评价

许瑞娜，华建江，刘和录，陈 望，徐志康，李红萍，丁 华，李 娴

目的：研制细菌性阴道炎（BV）临界值室内质控物并建立相应的质控程序。方法：用生理盐水将唾液酸酶原液稀释至浓度为7 U/mL，加入复合酶稳定剂和叠氮钠防腐剂，分装于用1%小牛血清白蛋白封闭过的离心管，制备出BV临界值室内质控物；在南方惠侨检验信息系统上建立BV的室内质控程序及半定量质控图，以评价其检测效能和应用效果。结果：BV临界值室内质控物浓度处于试验方法的临界值水平，其稳定性较好，在室温、4℃、-20℃的保存条件下，分别可稳定220、310、365 d；建立的BV室内质控程序及半定量质控图可直观、有效地监测、检验试剂的灵敏度和可靠性。结论：BV临界值室内质控物与建立相应的质控程序,可作为BV质控物商品化之前的一个补充，具有一定的临床应用价值。

细菌性阴道炎；临界室内质控物；研制

0 引言

诊断细菌性阴道炎的传统方法是Amsel法[1]，此法操作繁琐、费时费力且易受多种因素的干扰，目前已被唾液酸酶法所取代。由于各生产厂家的试剂质量参差不齐，甚至同一厂家不同批号之间试剂的稳定性也有差异，因此，必须采取严格的质控措施才能保证检测结果的准确性。然而，目前市面上尚无商品化的BV质控物，故笔者研制出BV临界值室内质控物并建立了相应的质控程序，经1 a的实际应用，效果较好，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器

AT-1600型全自动细菌性阴道病检测仪，由广州江元医疗科技有限公司生产。

1.1.2 试剂

广州江元医疗科技有限公司生产的细菌性阴道病检测试剂盒（唾液酸酶法），均在有效期内使用。

1.1.3 质控物配方材料

唾液酸酶原液、复合酶稳定剂、小牛血清白蛋白、叠氮钠均为美国SIGMA公司生产；分装容器为一次性塑料离心管，由江苏康健医疗用品有限公司生产，规格为0.5 mL。

1.2 方法

1.2.1 质控物容器封闭方法

将0.5 mL规格的一次性塑料离心管用1%小牛血清白蛋白加至满管，置于4℃冰箱中封闭24 h后，弃掉管内液体，置生物安全柜内自然晾干待用。

1.2.2 质控物制备方法及分装

用生理盐水将唾液酸酶原液稀释并加入若干浓

度的复合酶稳定剂和防腐剂叠氮钠，稀释至唾液酸酶浓度为7 U/mL并分装于封闭过的离心管中。

1.2.3 质控物保存方法

将分装好的自配BV临界值质控物分成3组，每组各365管，分别保存于室温、4℃、-20℃下备用。

1.2.4 质控物的检测

每日取各保存温度下的临界质控物各1管作为样本，同时取生理盐水作为阴性对照，与日常标本一同上机检测，连续测定365 d。严格按照仪器操作说明书进行操作，仪器自动判断结果。

1.2.5 室内质控程序

在南方惠侨检验信息系统上建立BV的室内质控程序及半定量质控图。（1）质控频率与浓度水平：每天1次，9：00前完成；每次做临界值和阴性对照2个水平，阴性对照为无菌生理盐水。（2）质控结果转换规则：检测结果为“阴性”，在检验信息系统中输入“0”；检测结果为“弱阳性”，在检验信息系统中输入“1”；检测结果为“阳性”，在检验信息系统中输入“2”；检测结果为“强阳性”，在检验信息系统中输入“3”。（3）质控控制限设立：临界阳性质控的上失控线设为1.5，下失控线设为0.5；阴性对照的上失控线设为0.5，下失控线设为-0.5。（4）失控判断规则：超过上下失控线者均判为失控。

2 结果

2.1 质控物效能检测

用仪器配套检测试剂检验BV临界值质控物，结果均为弱阳性，可监测相应试剂的灵敏度；阴性对照结果全部为阴性，可监测相应试剂的特异性。与预期效应一致。

2.2 质控物稳定性检测结果

在室温、4℃、-20℃ 3种条件下各保存365 d后，质控物外观均清亮、无沉淀、未发生混浊，说明其防腐效果良好。3种保存条件下的质控物连续测定365 d，监测过程中若出现失控，经失控原因分析判定为该保存温度下质控物变质失效，则不再继续监测此保存温度的质控物。在室温、4℃、-20℃保存条件下，分别可稳定220、310、365 d。结果显示，BV临界值质控物在各温度条件下有较好的稳定性，特别是在-20℃保存，其稳定期可达1 a。

2.3 质控物实际应用结果

应用广州江元医疗科技有限公司生产的BV试剂，在AT-1600型全自动细菌性阴道病检测仪上检验BV临界值质控物，检测结果根据质控转换规则输入南方检验信息系统的“质量控制图表”中，系统自动形成半定量BV质控图，以监测自配BV临界值质控物的失控与在控情况。应用1 a来，BV阴性对照未出现失控记录（如图1所示），BV临界值质控物在各温度下均失控2次（如图2所示），根据失控程序分析其原因是同一批号试剂灵敏度下降引起，更换不同批号试剂结果均在控。由此可见，BV临界值质控物可起到监测相应试剂灵敏度及特异性的作用。

图1 BV阴性对照图

图2 -20℃保存BV临界值质控物质控图

3 讨论

细菌性阴道炎（BV）是育龄妇女最常见的下生殖道感染性疾病，且易复发[2]，其与早产、输卵管炎等多种妇产科疾病密切相关[3]。因此，BV的检查对妇产科疾病的防治具有重要意义。唾液酸酶[4]是BV致病菌所产生的特异性酶之一，其活性与病原菌数量呈正比，检测唾液酸酶活性可了解病原体定居和繁殖的情况，是近年来诊断细菌性阴道病的新方法。根据卫生部《医疗机构临床实验室管理办法》规定，医疗机构临床实验室应当对开展的临床检验项目进行室内质量控制，绘制质量控制图。然而，目前多数体液定性检测项目（如BV、HCG等）尚无商品化质控物，无法满足实验室质量控制的需求[5]。故笔者研制出BV临界值质控物并建立相应的质控程序。

本实验采用BV临界值质控品来评价检测试剂的敏感度，用阴性质控品评价试剂的特异性。根据试剂厂家提供的灵敏度分析，唾液酸酶活性＞7 U/ mL的试验结果应为阳性，唾液酸酶活性＜7 U/mL的试验结果应为阴性。笔者配制的BV临界值质控物中唾液酸酶浓度为7 U/mL，处于试验方法的临界值水平，

（▶▶▶▶）（◀◀◀◀）可验证检测试剂的灵敏度。临界值质控物配制的关键技术在于保证其稳定性，可根据酶的特性加入复合酶稳定剂及叠氮钠防腐剂。由于酶的含量较低，特预先将塑料离心管进行封闭处理，以防止质控物在保存过程中降解和被塑料离心管壁吸附[6]。实验结果显示，在室温、4℃、-20℃保存条件下，笔者研制的BV临界值质控物分别可稳定220、310、365 d，说明容器的预封闭处理对BV临界值质控物的稳定性起到了理想效果。在实际临床应用中，监测到BV临界值质控物在各温度下均失控2次（如图2所示）。据分析，失控原因是由于同一批号的试剂接近失效期致使其灵敏度下降所引起的，经更换新批号试剂重测，其结果均在控。由此可见，BV临界值质控物和阴性质控物联合应用可起到监测相应试剂的灵敏度和特异性的作用。

本研究显示，BV临界值质控物分别在室温和4℃保存条件下于第221天和第311天监测时，结果均为阴性，而在-20℃保存条件下结果仍为弱阳性。这可能是由于在-20℃下唾液酸酶的浓度可长时间保持稳定，而在室温和4℃下其浓度引起缓慢下降所致。可见，不同保存温度可对BV临界值质控物的稳定性产生不同影响。通过较长时间的应用与观察，自制BV临界值质控物在-20℃保存条件下其稳定性最佳，用此质控物与建立的相应质控程序作为BV质控物商品化之前的一个补充，既符合室内质控工作的要求又具有经济效益，有一定的临床应用价值。

[1]Amsel R，Totten P A，Spiegel C A，et al.Nonspecific vaginitis：diagnostic criteria and microbial and epidemiologic associations[J].The American journal of medicine，1983，74（1）：14-22.

[2]李玉杰.细菌性阴道病的治疗及护理[J].中国现代药物应用，2009，3（5）：154.

[3]王冬，王振红，邸慧明，等.胎儿纤维连接蛋白与细菌性阴道病和绒毛膜羊膜炎关系的研究[J].中华妇产科杂志，1999，34（7）：399.

[4]CauciS，CulhaneJ F，Di Santolo M，et al.Among pregnant women with bacterial vaginosis，the hydrolytic enzymes sialidase and prolidase are positively associated with interleukin-1β[J].American journal of obstetricsandgynecology，2008，198（1）：132.e1-7.

[5]刘和录，许瑞娜，余素燕，等.5种定性试验质控物的研制与应用[J].国际检验医学杂志，2012，33（5）：589-590.

[6]陆兵，谢英华.重组人表皮生长因子的稳定性[J].生物技术通讯，2001，12（3）：194-197.

（收稿：2013-03-04 修回：2013-05-06）

Development and Evaluation of Indoor Quality Control Substance for Critical Value of Bacterial Vaginitis

XU Rui-na,HUA Jian-jiang,LIU He-lu,CHEN Wang,XU Zhi-kang,LI Hong-ping,DING Hua,LI Xian
(Department of Clinical Laboratory,Shenzhen Shajing Affliated Hospital of Guangzhou Medical University, Shenzhen 518104,Guangdong Province,China)

ObjectiveTo develop a piece of indoor quality control substance for the critical value of bacterial vaginitis(BV) and the corresponding quality control procedure.MethodsThe sialidase stock solution was diluted until the concentration came to 7 U/mL,the compound enzyme stabilizer and sodium azide preservative were added into the solution,the solution was put into the centrifuge tube sealed with calf serum albumin,then the indoor quality control substance for the critical value of BC came into being.The indoor quality control procedure and semi-quantitative quality control diagram were established based on NFHB-Lab Information System in order to evaluate the efficacy.ResultsThe indoor quality control substance for the critical value of BV was stable,and had a service life of 220,310 or 365 d respectively when the ambient temperature was room temperature,4℃ or-20℃.The quality control procedure and semi-quantitative quality control diagram could be used for monitoring the sensitivity and reliability of the agent.ConclusionThe indoor quality control substance for the critical value of BV and the corresponding quality control procedure are of significance for clinical application.[Chinese Medical Equipment Journal，2014，35（1）：40-41，53]

bacterial vaginisis;threshold level of indoor quality control substance;development

R318；R711．31

A

1003-8868（2014）01-0040-03

10.7687/J.ISSN1003-8868.2014.01.040

2012年深圳市宝安区科技计划项目（2012159）

许瑞娜（1982—），女，检验技师，主要从事临床医学检验方面的研究工作，E-mail：449214582@qq.com。

518104广东深圳，广州医学院附属深圳沙井医院检验科（许瑞娜，华建江，刘和录，陈 望，徐志康，李红萍，丁 华，李 娴）