鼻炎通窍喷雾剂的质量标准研究

盛蓉，周立，张勤修，呼梅，蒲志强

·炮制制剂·

鼻炎通窍喷雾剂的质量标准研究

盛蓉1，周立1，张勤修1，呼梅1，蒲志强2

目的：建立鼻炎通窍喷雾剂的质量标准。方法：采用薄层色谱法对麻黄、黄芩、白芷进行定性鉴别；用高效液相色谱法测定盐酸麻黄碱和黄芩苷的含量。结果：麻黄、黄芩、白芷的薄层色谱图斑点清晰，阴性无干扰。盐酸麻黄碱进样量在0.0798 µg～1.1172 µg 浓度范围内与峰面积线性关系良好，平均回收率为97.26%，RSD为2.33%（n=6）；黄芩苷进样量在0.1364 µg～2.046 µg 浓度范围内与峰面积线性关系良好，平均回收率为98.15%，RSD值为2.03%(n=6)。结论：所用方法专属性强，灵敏度高，重现性好，可用于鼻炎通窍喷雾剂的质量控制。

]鼻炎通窍喷雾剂；薄层色谱法；高效液相色谱法；麻黄碱；黄芩苷

鼻炎通窍喷雾剂为我院开发的新医院制剂，该方由麻黄、黄芩、白芷、辛夷等中药组成，具有通利鼻窍的功效，临床用于鼻塞不通、流黄稠涕、急慢性鼻炎、副鼻窦炎。为有效控制该制剂质量，参考药典[1]及相关文献[2～10]，建立了麻黄、黄芩、白芷的薄层色谱鉴别方法，并对方中君药麻黄和黄芩制定了高效液相色谱测定盐酸麻黄碱和黄芩苷含量的方法[11～14]，所用方法简便，专属性强，重现性好，可用于鼻炎通窍喷雾剂的质量控制。

1 仪器与试药

HP-1100型高效液相色谱仪（美国惠普），四元泵，DAD检测器，HP化学工作站；AS10200超声波清洗器（220V，280W），电子分析天平BP211D（德国Sartorius）。

对照品：盐酸麻黄碱 (171241-200506)、黄芩苷（110715-200514）、黄芩素（111595-200402）、汉黄芩素（1514-200202）、欧前胡素 (110826-200712)、异欧前胡素（110827-200407 ）；对照药材：麻黄（121051-200704）、黄芩（120955-200607）、白芷（120945-200707），均由中国药品生物制品检定所提供。乙腈、甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯，硅胶G、硅胶H（青岛海洋化工厂）；鼻炎通窍喷雾剂3批(100601、100602、100603)及阴性样品均由本院制剂室提供。

2 薄层色谱鉴别

2.1 麻黄

取本品10 mL，加浓氨试液1 mL，用乙醚振摇提取2次，每次10 mL，合并乙醚液，加盐酸乙醇溶液（1→20）1 mL于乙醚液中，摇匀，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取麻黄对照药材1 g，加浓氨试液数滴，再加三氯甲烷10 mL，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL充分振摇，滤过，取滤液作为对照药材溶液。另取盐酸麻黄碱对照品适量，加甲醇制成每1 mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。取缺麻黄阴性样品按供试品溶液的制备方法制备，作为阴性样品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述溶液各5 μL，分别点于同一以0.2%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－浓氨试液(20:5:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，阴性均无干扰，薄层色谱见图1。

2.2 黄芩

取本品10 mL，加盐酸调节pH至3，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩对照药材1 g，加乙酸乙酯－甲醇（3:1）的混合溶液30 mL，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，取上清液作为对照药材溶液。另取黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg、0.5 mg、0.5 mg的对照品溶液。取缺黄芩阴性样品按供试品溶液的制备方法制备，作为阴性样品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述溶液各2 μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯－乙酸乙酯－甲醇－甲酸(10:3:1:2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应位置上，显相同的暗斑，阴性均无干扰，薄层色谱见图1。

2.3 白芷

取本品10 mL，加乙醚振摇提取2次，每次10 mL，合并乙醚液，挥干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取白芷对照药材0.5 g，加乙醚10 mL，浸泡1小时，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为对照药材溶液。另取欧前胡素、异欧前胡素对照品，加乙酸乙酯制成每1 mL各含1 mg的混合溶液，作为对照品溶液。取缺白芷阴性样品按供试品溶液的制备方法制备，作为阴性样品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述溶液各5 μL，分别点于同一以0.2%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)－乙醚 (3:2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应位置上，显相同颜色荧光斑点，阴性均无干扰，薄层色谱见图1。

图1 麻黄、黄芩、白芷薄层鉴别

3 盐酸麻黄碱含量测定

3.1 色谱条件

色谱柱：迪马柱Diamonsil-C18(250×4.6 mm，5 µm）；流动相：乙腈:0.1%磷酸（含0.1%的三乙胺）（3:97）；流速：1 mL．min-1；检测波长210 nm；柱温30℃。

3.2 溶液制备

3.2.1 对照品溶液的制备 精密称取盐酸麻黄碱对照品7.98 mg，加甲醇制成每1 mL含盐酸麻黄碱159.6 µg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。

3.2.2 供试品溶液制备 精密量取样品液2 mL ，置25 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

3.2.3 阴性样品溶液的制备 取缺麻黄阴性样品溶液2 mL，按3.2.2“供试品溶液制备”方法制备，作为阴性样品溶液。

3.3 系统适用性试验

取上述对照品、阴性样品和供试品溶液各5 μL，照“3.1”项下的色谱条件注入液相色谱仪，记录色谱图，见图2。结果阴性无干扰，待测峰与其他峰分离度良好。理论塔板数按盐酸麻黄碱峰计不低于3000，分离度大于1.5。

图2 盐酸麻黄碱色谱图

3.4 方法学考察

3.4.1 线性关系考察 取对照品溶液，按照“3.1”项下色谱条件，分别进样0.5、1、3、5、7 μL，记录色谱图，以盐酸麻黄碱的进样量(µg)为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为：Y=1992.10165X-1.62788（R=0.9999），结果表明盐酸麻黄碱进样量在0.0798 µg～1.1172 µg范围内线性关系良好。

3.4.2 精密度试验 取对照品溶液，连续进样6次，每次5 μL，测定，峰面积的RSD为1.87% (n=6)，表明方法精密度良好。

3.4.3 稳定性试验 取同一批供试品溶液，分别在0、1、2、4、8 h依次进样，盐酸麻黄碱峰面积的RSD为1.83%(n=5)，表明供试品溶液在8h内稳定。

3.4.4 重复性试验 取同一批样品(批号100601) 2 mL，共6份，按供试品溶液制备方法制备样品，测定，结果盐酸麻黄碱的平均含量为 1.011 mg．mL-1，RSD值为1.94%(n=6)。

3.4.5 加样回收试验 精密量取已知含量的样品(批号100601) 1 mL，共6份，至25 mL量瓶中，分别精密加入盐酸麻黄碱对照品溶液(0.1596 mg．mL-1)5 mL，用甲醇定容至刻度，摇匀，按上述色谱条件测定，计算回收率。结果见表1。

表1 盐酸麻黄碱加样回收试验

结果平均回收率为 97.26 % ，回收率在 95 %～105 %之间，RSD 值为2.33 % , 表明本法回收率良好。

3.4.6 样品测定 取3批鼻炎通窍喷雾剂样品，按供试品溶液制备方法制备样品，在上述色谱条件下进行测定，结果见表2。

表2 样品含量测定（n=2）

4 黄芩苷含量测定

4.1 色谱条件

色谱柱：依利特Hypersil ODS2（150×4.6mm， 5µm）；流动相：甲醇：0.2%磷酸（42:58）；流速1 mL．min-1，检测波长280 nm，柱温25℃。

4.2 溶液制备

4.2.1 对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷对照品3.41 mg，加甲醇制成每1 mL含136.4 μg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。

4.2.2 供试品溶液制备 精密量取样品液2 mL ，置50 mL量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

4.2.3 阴性样品溶液的制备 取缺黄芩阴性样品溶液1 mL，按4.2.2“供试品溶液制备”方法制备，作为阴性样品溶液。

4.3 系统适用性试验

取上述对照品、阴性样品和供试品溶液，照“4.1”项下的色谱条件注入液相色谱仪，记录色谱图，见图3。结果阴性无干扰，待测峰与其他峰分离度良好。理论塔板数按黄芩苷峰计算不低于2500，分离度＞1.5。

图3 黄芩苷色谱图

4.4 方法学考察

4.4.1 线性关系考察 取对照品溶液，分别进样1、2、5、10、15 µL记录色谱图，以黄芩苷的进样量(µg)为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程Y=2417X+10.285，r=0.9999，结果表明，进样量在0.1364 µg～2.046 µg范围内，黄芩苷峰面积与进样量呈良好的线性关系。

4.4.2 精密度试验 取对照品溶液10 µL，连续进样6次测定，结果峰面积的RSD为1.92% (n=6)，表明方法精密度良好。

4.4.3 稳定性试验 取同一批供试品溶液，分别在0、1、 2、4、8 h依次进样，黄芩苷峰面积的RSD为1.81%(n=5)，表明供试品溶液在8h内稳定。

4.4.4 重复性试验 取同一批样品(批号100601)6份，每份2 mL，按供试品溶液制备方法制备样品，测定，结果黄芩苷的平均含量为12.54 mg．mL-1，RSD值为1.89%(n=6)。

4.4.5 加样回收试验 精密量取已知含量的样品(批号100601) 1 mL，共6份，至50 mL量瓶中，分别精密加入黄芩苷对照品溶液(2.342 mg．mL-1)5 mL，按供试品制备方法制样，按上述色谱条件测定，计算回收率。结果见表3。

表3 黄芩苷加样回收试验

结果黄芩苷的平均回收率为98.15%，回收率在95 %～105 %之间，RSD值为2.03%(n=6)，表明本法回收率良好。

4.4.6 样品测定 取3批鼻炎通窍喷雾剂样品，按供试品溶液制备方法制备样品，在上述色谱条件下进行测定，结果见表4。

表4 样品含量测定（n=2）

5 讨论

5.1 在后期初步稳定性实验中发现，样品放置一段时间后，白芷薄层色谱图中欧前胡素斑点极不明显，而异欧前胡素较稳定。查阅相关文献[15]，有研究表明，白芷中欧前胡素的含量随温度及放置时间的延长有明显降低，故该制剂在拟订质量标准时，未将白芷的薄层鉴别列入质量标准。

5.2 麻黄含量测定中，在制备供试品溶液时，对提取溶媒进行了考察，分别用水、甲醇、50%甲醇、0.1%盐酸甲醇、流动相作为样品提取溶媒，结果表明用甲醇作为提取溶媒，盐酸麻黄碱含量较高。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版一部[S].北京:中国医药科技出版社,2010:97、282、300.

[2] 石娟,张宇洁,孙传法. 参果颗粒质量标准的研究[J].中成药,2005,27(5):535.

[3] 李馨,刘爽,王金宏,等. 哮喘片中麻黄的薄层色谱研究[J].黑龙江医药,2009,22(5):628.

[4] 庾燕珍,邓慧敏,何文玲. 哮喘宁片的质量标准研究[J].中草药,2009,40(5):736.

[5] 陈磊.夏菊滴鼻液质量标准的研究[J].现代中西医结合杂志,2009,18(11):1288.

[6] 温勇,王德杭,陈瑞云,等.小柴胡汤的质量标准研究[J].中药新药与临床药理,2009,20(6):562.

[7] 张新广,王冬梅,丁少波.溃结愈灌肠剂的制备及质量标准研究[J].中国药房,2010 ,21(23):2144.

[8] 邹文莉,马逾英,郭丁丁,等.白芷在中药复方制剂中的使用及质量控制[J].中成药,2007,29(9):1350.

[9] 宿洁,苗艳,吴爱英.防芷真炎片的薄层色谱鉴别[J].中国药师,2008,11(9):1129.

[10] 张琼光,黄志军,陈亚宁,等. 小儿鼻炎颗粒的质量标准研究[J].中国医院药学杂志,2009,29(9):758.

[11] 李巧如,李小川,张鹏. 高效液相色谱法测定小儿化痰止咳片中盐酸麻黄碱的含量[J].中国药房,2006,17(22):1732.

[12] 洪美华,林达,蔡诗填.小儿咳喘灵颗粒质量标准的研究[J].中国药品标准,2008,9(3):194.

[13] 刘向荣,汤韶明. 桉叶止咳糖浆的质量标准研究[J].药物分析杂志,2008,28(11):1915.

[14] 徐艳丽,郎轶咏.HPLC测定半夏止咳糖浆中盐酸麻黄碱含量[J]. 中成药,2009,31(10):附8.

[15] 杨林,何丹,王振宁. 白芷香豆素固体分散体稳定性研究[J].中药材,2008,31(12):1906.

（责任编辑：李芸霞）

Study on the quality standard of Biyan Tongqiao Spray/

SHENG Rong1, ZHOU Li1, ZHANG Qin-xiu1, HU mei1, PU Zhi-qiang2//(1. Affiliated Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610072, China ; 2. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075,China )

Objective: To establish the quality standard of Biyan Tongqiao Spray. Method: TLC was used for the qualitative identifcation of Ephedra Herb, Scutellariae Radix and Angelicae Dahuricae Radix in Biyan Tongqiao Spray. HPLC was used to simultaneously determine the contents of ephedrine and baicalin. Result: TLC spots were clear without negative interference. HPLC experiment showed good linear relationship at the ranges of 0.0798 μg ～1.1172 μg for ephedrine and 0.1364 μg～2.046 μg for baicalin. The average recoveries were 97.26% with RSD of 2.33% (n=6) for ephedrine and 98.15% with RSD of 2.03% for baicalin (n=6).Conclusion: The method has characters of good specifcity, sensitivity and reproducibility, so it can be used for the quality control of Biyan Tongqiao Spray.

Biyan Tongqiao Spray; TLC; HPLC; ephedrine; baicalin.

P 917

A

1674-926X(2014)02-015-04

成都中医药大学附属医院科研基金：鼻炎通窍喷雾剂的研制，课题编号：2008-D-YY-02

1.成都中医药大学附属医院，四川 成都 610072；

2.成都中医药大学，四川 成都 610075

盛蓉(1967-)，女，副主任药师，主要从事中药质量控制与医院制剂研发

Tel:028-87783257 Email:sheng6710@126.com

2013-07-31