PCNA在腺性膀胱炎中的表达及临床意义

王 磊，王 炜，王 照，尹海军*，徐学军，高景宇

(1.河北医科大学第一医院泌尿外科，河北 石家庄 050031；2.河北省承德市疾病预防控制中心,河北 承德 067000)

增殖细胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen，PCNA)是一种相对分子质量36 000的非组蛋白细胞核多肽，是DNA聚合酶δ的辅助蛋白，对DNA复制的调节起重要作用[1]。PCNA的阳性表达程度与肿瘤的增殖活性、转移复发率及预后情况有显著的相关性[2-3]，现已成为检测肿瘤细胞增殖动力的有效指标。本研究应用免疫组织化学方法观察PCNA在正常膀胱黏膜、腺性膀胱炎和膀胱移行细胞癌(bladder transitional cell carcinoma，BTCC)中的表达，以探讨其在腺性膀胱炎中的表达及其临床意义。

1 资料与方法

1.1 标本来源：采用河北医科大学第一医院2006—2009年人腺性膀胱炎标本30例，正常膀胱黏膜30例，膀胱移行细胞癌30例。所有标本均经病理证实。腺性膀胱炎标本均为术前活组织检查标本，正常膀胱黏膜为活组织检查标本，膀胱移行细胞癌标本为经尿道膀胱肿瘤电切术后及膀胱全切术后标本。术前未行任何治疗。病理分级，G1级18例，G2级6例，G3级6例。临床分期，Tis-T1(浅表性)21例，T2～T4(浸润性)9例。

1.2 主要仪器及试剂：鼠抗人PCNA单克隆抗体(美国Santa Cruz公司产品)；辣根过氧化氢酶二氨基苯胺(diaminobenzidine,DAB)显色试剂盒；SP试剂盒。以上产品购于河北博海生物工程开发有限公司。

1.3 PCNA免疫组织化学法：从所取标本上切取小于0.5cm×0.5cm×0.1cm的组织块，用4%多聚甲醛固定，石蜡包埋。石蜡切片脱蜡至水后，1%甲醇双氧水，室温孵育10min，微波修复抗原，冷却至室温后，滴加正常山羊血清封闭液，室温20min，甩去血清后滴加PCNA一抗，置4℃湿盒中过夜。0.01mol/L PBS冲洗3次×5min，滴加生物素化二抗37℃孵育20min。0.01mol/L PBS冲洗3次×5min，滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃孵育20min。0.01mol/L PBS冲洗3次×5min，将DAB显色试剂盒中显色剂A、B、C各1滴加入1mL蒸馏水中，混匀，加至切片上，显微镜下控制显色时间。每次实验均设阴性对照，以PBS代替一抗。

1.4 PCNA染色判断标准:PCNA以细胞核发现棕黄色为阳性信号。借助医学真彩色计算机图像分析系统，每张切片连续观察10个高倍视野(400倍)，计算出各自的阳性细胞百分比。阳性细胞数<10%为阴性，阳性细胞数>10%为阳性。

1.5 统计学方法:应用SPSS13.0统计软件进行数据处理，计数资料以百分率表示,组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

PCNA在正常膀胱黏膜无阳性表达，在腺性膀胱炎黏膜细胞核内见散在棕黄色阳性颗粒，在膀胱移行细胞癌细胞核内密布棕黄色阳性颗粒。腺性膀胱炎和膀胱移行癌PCNA表达阳性率均明显高于正常膀胱黏膜，差异有统计学意义(P<0.05)；腺性膀胱炎PCNA表达阳性率明显低于膀胱移行癌，差异无统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 3组PCNA阳性表达比较Table 1 Comparison of PCNA positive among three groups (n=30，n，%)

*P<0.05vsnormal tunica mucosa of bladder #P<0.05vscystitis glandularis specimens by χ2test

3 讨 论

腺性膀胱炎是一种膀胱黏膜上皮增生性病变，组织学上膀胱黏膜固有层有柱状上皮形成的腺样结构(Brunn细胞巢)，并可见有黏液形成。固有层内有不同程度的充血、水肿和淋巴细胞、浆细胞浸润。近年来随着腔内泌尿外科的发展，临床和病理医师对本病的认识逐渐提高，腺性膀胱炎确诊率有增高趋势。关于腺性膀胱炎与膀胱肿瘤的关系，目前仍有争论。一种观点认为腺性膀胱炎是移行上皮的正常变异，与炎症无关，亦非癌前病变[4]。而另一种观点认为腺性膀胱炎是癌前病变，一些腺性膀胱炎最终会进展为腺癌[5]。

虽然，腺性膀胱炎(特别是肠上皮型)发展为膀胱腺癌的病例也时有报道[6-8]，但要证实腺性膀胱炎为膀胱肿瘤的癌前病变尚缺乏确切的证据。膀胱癌是我国泌尿系统发病率最高的恶性肿瘤，术后复发或转移是导致治疗失败的常见原因，因此，研究腺性膀胱炎与膀胱移行细胞癌之间的关系，对于早期发现膀胱癌、降低术后复发或转移，提高患者的生存率具有重要意义。

PCNA是真核生物复制复合体的核心成分，作为真核细胞DNA聚合酶δ的辅助蛋白，协调DNA的复制过程。同时，PCNA还作为功能转换因子，通过不同调控方式与多种细胞因子作用，参与DNA损伤修复、细胞周期调控及凋亡等许多重要的细胞事件，且与肿瘤等细胞增殖性疾病的发生发展存在相关性[1]。在多种恶性肿瘤如肾癌、结肠癌、睾丸肿瘤、肝癌、喉癌、乳腺癌、甲状腺癌等中，PCNA的表达明显增高。在PCNA与膀胱肿瘤关系的研究中发现，PCNA在膀胱癌中有较高表达率，并且其表达与判断预后的指标如肿瘤病理分级、临床分期等也具有相关性：PCNA在膀胱良性病变中无表达或呈弱阳性表达；在膀胱癌中病理分级越高，分化程度越低，PCNA的表达也越强；发生浸润、转移的膀胱癌较表浅性膀胱癌的PCNA表达明显增强；复发膀胱肿瘤的PCNA阳性细胞数高于未复发者。因此，PCNA的表达可作为判断膀胱癌预后的指标之一[9-10]。

本研究观察了PCNA在腺性膀胱炎中的表达情况，并与其在正常膀胱黏膜及膀胱移行细胞癌中的表达进行比较，以探讨腺性膀胱炎与膀胱移行细胞癌的关系，以期为临床上膀胱癌的早期发现与诊断提供依据。结果发现，PCNA在腺性膀胱炎的阳性表达率(46.7%)显著高于正常膀胱黏膜PCNA的表达阳性率(0.0%)，但低于其在膀胱移行细胞癌中的表达阳性率(73.3%)。表明腺性膀胱炎是介于膀胱正常黏膜与膀胱移行细胞癌之间的一个阶段，腺性膀胱炎中细胞的增殖活跃程度高于正常膀胱黏膜，但低于膀胱移行细胞癌，不能等同于癌症，可又具有恶变潜能，PCNA的表达可能促进膀胱肿瘤的发生，提示腺性膀胱炎可能是癌前病变。PCNA可用于腺性膀胱炎与膀胱肿瘤关系的研究。

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