不同剂量叶酸对托吡酯致胚胎毒性作用的干预研究

郑丽娜，芦珊珊，谢 巍，王立娜，郭 丽

(1.河北省唐山市妇幼保健院药剂科，河北 唐山 063000；2.河北医科大学第四医院药品科，河北 石家庄 050011)

叶酸(folic acid，FA)是由蝶啶、对氨基苯甲酸和谷氨酸组成的一种B族维生素，是细胞生长和分裂不可缺少的重要物质[1]。FA参与体内一碳单位的转移和代谢，对 DNA、RNA 的合成，细胞增殖和组织分化有重要意义[2]。以神经管畸形、唇腭裂等为主的多种出生缺陷与妇女怀孕早期体内缺乏FA存在病因学联系[3]。托吡酯(topiramate，TPM)是一种新型的抗癫痫药物，具有多重抗癫痫作用机制，但同时也有拮抗FA代谢的药理作用[4]。FA诱导胚胎甲酰四氢叶酸水平下降，引起胚胎细胞分裂障碍，使胚胎细胞分裂异常、发育畸形，从而导致胚胎停止发育、宫内发育迟缓、流产、畸胎等异常妊娠情况[5]。本实验以小鼠为研究对象，观察TPM的致畸作用及不同剂量FA干预效应的差异，从而为临床有效指导服用TPM的生育期妇女提供动物实验依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料：SPF级昆明种小鼠，雌性体质量(21.8±1.7)g，雄性体质量(22.6±1.8)g，北京华阜康生物科技股份有限公司实验动物中心提供，合格证号SCXK(京)2009-0004。自然光照，自由饮水进食，适应性饲养1周。FA(北京北大药业有限公司，每片0.4mg，批号S090528)，托吡酯(西安杨森制药有限公司，每片25mg，批号090724035),上述所用药物均用蒸馏水配制成所需浓度。

1.2 动物分组及给药：按雌雄比例2∶1合笼交配，次日清晨定时检查雌鼠阴栓，以查见阴栓者为妊娠零天，并随机分为5组，每组20只孕鼠。①空白对照组，每天灌胃蒸馏水，容量为10mL·kg-1·d-1；② TPM剂量组，60mg·kg-1·d-1经口灌胃；③TPM+低剂量FA组，TPM经口灌胃剂量同②，同时添加0.07mg·kg-1·d-1FA；④TPM+中剂量FA组，TPM经口灌胃剂量同②，同时添加0.35mg·kg-1·d-1FA；⑤TPM+高剂量FA组，TPM经口灌胃剂量同②，同时添加0.7mg·kg-1·d-1FA。各组给药剂量均相当于成人等效剂量的10倍。上述各组小鼠于分组后次日，雌性鼠开始灌胃各药物，按上述方法给药，直至妊娠结束。

1.3 观察指标：观察小鼠给药后状态，孕鼠于妊娠第22天处死,检查子宫内胚胎数及其发育状况。记录孕鼠体质量、着床数、活胎数、死胎数、吸收胎数。测量仔鼠的体质量、身长、尾长等。

2 结 果

2.1 对孕鼠生殖能力的影响：与空白对照组相比较，各组着床数差异无统计学意义。TPM组、TPM+低剂量FA组、TPM+中剂量FA组活胎率、吸收胎率和死胎率与空白对照组比较差异无统计学意义，TPM+高剂量FA组与空白对照组比较差异无统计学意义。TPM+FA高剂量组与TPM组比较活胎率显著升高、吸收胎率和死胎率明显降低，差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

2.2 对胎鼠生长发育的影响：与空白对照组比较，TPM组与TPM+低剂量FA组胎鼠体质量、身长、尾长均显著降低，差异有统计学意义(P<0.01)，TPM+中剂量FA组与TPM+高剂量FA组差异无统计学意义。TPM+中剂量FA组、TPM+高剂量FA组与TPM组相比较，胎鼠体质量、身长、尾长差异均有统计学意义(P<0.01)。见表2。

2.3 对胎鼠畸形方面的影响：与空白对照组比较，TPM组、TPM+低剂量FA组和TPM+中剂量FA组畸形数明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)。TPM+高剂量FA组与TPM组相比较畸形数差异有统计学意义(P<0.01)，畸形类型主要表现为唇腭裂(cheilopalatognathus)、小头(microcephaly)、脊膜膨出(meningocele)、短肢(micromelia)等。见表3。

表1 药物对孕鼠生殖能力的影响Table 1 Effects of drugs on reproductive ability of pregnant mice (n，%)

*P<0.01vscontrol group #P<0.01vsTPM group by χ2test

TPM：topiramate；FA：folic acid

GroupsLive birth numberWeight of fetal mice(g)Length of fetal mice(cm)Tail length of fetal mice(cm)Control group2231.57±0.082.39±0.131.17±0.06TPM group1971.09±0.05∗1.86±0.27∗0.99±0.05∗TPM+FA low-dose group1981.21±0.07∗1.98±0.20∗1.02±0.07∗TPM+FA mid-dose group2031.42±0.06#2.15±0.17#1.09±0.04#TPM+FA high-dose group2111.48±0.09#2.24±0.27#1.10±0.05#

*P<0.01vscontrol group #P<0.01vsTPM group byANOVA

TPM：topiramate；FA：folic acid

表3 药物对胎鼠畸形方面的影响Table 3 Effects of drugs on deformity of pregnant mice

*P<0.01vscontrol group #P<0.01vsTPM group by χ2test

TPM：topiramate；FA：folic acid

3 讨 论

本研究结果显示，TPM对小鼠的生殖能力、胎鼠的生长发育及致畸方面有明显影响，补充低剂量FA并不能有效拮抗这种毒性作用，而中剂量FA仅在胎鼠生长发育方面有一定的干预效应，高剂量FA干预TPM毒性作用的效果更明显。

FA又称蝶酰谷氨酸，是细胞生长和分裂所必需的物质，在人体合成代谢中发挥着重要作用[6]。人类自身不能合成FA，必须依赖食物供给。若孕妇缺乏FA，便会引起胚胎细胞分裂障碍，导致胚胎细胞分裂异常和胚胎细胞发育畸形[7]。有研究表明，孕妇缺乏FA会导致胎儿先天性异常，特别是神经管畸形的发生[8]。正常妊娠期妇女为满足胎儿生长发育每天需要FA量为400～500μg[9]。我国从20世纪80年代末期开始，在全国各地区推广服用FA增补剂，已经有效地降低了神经管畸形的发生，使高发地区预防率达到85%，低发地区预防率达到40%[10]。但对服用抗癫痫药物孕妇的用量尚无报道。本研究证实低剂量FA拮抗TPM的毒性作用不明显，这可能与TPM使血清FA水平降低有关。因此，对应用TPM治疗的癫痫妊娠妇女应早期、足量补充FA，以预防畸形的发生。

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