食品中安定和氯丙嗪残留检测研究进展

李向丽, 张 娜， 王文林

(中山火炬职业技术学院，广东中山 528436)

食品安全是关系到国计民生的大事。近几年来，世界各地发生了诸多有关食品安全的事件，引起了国际、国内社会的广泛关注和高度重视，而肉、蛋、奶等动物性食品，在我国消费食物构成中已占有愈加重要的位置。在食品安全问题备受关注的同时，镇静剂的使用也逐渐引起人们的重视。主要是个别商贩在畜禽饲养及运输过程中擅自非法使用镇静剂类药物，最终可能导致畜禽产品中该类药物的残留，造成食品安全隐患，严重威胁人们的身体健康。目前，我国已将镇静剂类药物列入食品动物禁用的兽药及其他化合物清单[1-3]。

近年来，个别饲料生产企业为了追求饲料的转化率和高额利润，不顾国家的法律法规，在生产环节加入镇静剂类药物，尤其是养猪生产中，饲喂安定等可导致神经麻痹、安静嗜睡从而使猪活动量降低，达到快速催肥，缩短出栏时间，增加饲料报酬的目的。在运输过程中，安定和氯丙嗪均可降低猪的应激反应程度，减少能耗，降低成本。但饲喂过安定的畜禽体内会有该药物的残留，人类通过进食摄入，并经长期蓄积后可引起中毒。目前，在动物源性食品中已全面被禁止检出安定[5-8]。想要对食品中的这些镇静剂进行有效监控，建立灵敏度高、快速的检测方法尤为必要。笔者就常见的安定和氯丙嗪两类镇静剂在食品中的检测现状进行了综述。

1 免疫学方法

2 色谱技术的应用

色谱法用于测定镇静剂类成分的残留具有分离效率高、分析速度快、检测灵敏度高、样品用量少、选择性好、可多组分同时分析测定、易于自动化等优点，但因其定性能力较差，现已大量发展了色谱与其他多种分析技术联用。

2.1气相色谱法张玉洁等利用气相色谱-微电子捕获(GC-uECD)检测法建立了快速检测猪肉中地西泮残留的方法[13]。首先用乙腈超声提取猪肉中的地西泮，C18固相萃取柱净化，利用GC-uECD法进行残留检测，外标法定量。结果表明，在1～1 000 μg/L范围内药物色谱峰面积与浓度线性关系良好，相关系数达到0.999 4。对空白猪肉进行药物添加回收试验，平均回收率为83.5%～94.9%，检出限为0.31 μg/kg，定量限为1.00 μg/kg。张泽楷等提出了气相色谱法测定动物饲料中安定的残留量的方法[14]。饲料经过有机溶剂提取，采用SE-54毛细管柱(30 m×0.32 mm，0.32 μm)分离，电子捕获检测器检测，检出限(2S/N)为0.007 mg/L。方法的平均回收率为79.5%～93.1%,相对标准偏差(n=8)为2.11%～4.02%。

2.3液相色谱法范盛先等建立了猪肾脏中氯丙嗪和异丙嗪残留量检测的高效液相色谱法[20]。猪肾脏中残留的氯丙嗪和异丙嗪，用乙腈提取，再依次用酸化乙腈和正己烷净化，氮气吹干，甲醇溶解后，用Waters高效液相色谱系统，Hypersil C18柱，UV检测器，用乙腈-水-0.5 mol/L 乙酸铵(V/V/V，50∶49∶1)为流动相，流速1.2 ml/min，波长254 nm 测定，内标法定量。结果表明，氯丙嗪在猪肾脏中的最低检测限均为10 μg/kg，组织中添加量为10 μg/kg时，氯丙嗪的回收率为83%，批间变异系数均小于20%。王海娇等建立了测定猪肉中安定残留量的反相高效液相色谱法[21]。利用Al2O3层析柱对安定提取液进行净化，高效液相色谱仪测定参数:C18柱(2 mm×150 mm,3 μm);流动相为甲醇-水-25 mmol/L乙酸铵溶液(64.8∶35.0∶0.2，V/V)；流速0.12 ml/min；光电二极管阵列检测器，波长254 nm。试验结果表明，提取液中各组分分离良好，安定浓度在100 ng/ml～40 μg/ml范围内与峰面积呈线性相关，r=0.997 19,平均回收率80.8%,RSD<5%。汤文利等用高效液相色谱仪(HPLC)同时测定饲料中地西泮、安眠酮的含量[22]。在碱性条件下, 用有机溶剂提取饲料中的地西泮和安眠酮, 利用硅酸镁小柱对提取液进行富集、净化，用高效液相色谱仪进行检测。HPLC 测定参数：C18柱(4.00 mm×250 mm i.d.,5 μm);流动相为乙腈-25 mmol/L乙酸铵溶液(30∶70)；流速1.00 ml/min；利用二极管阵列检测器测定地西泮、安眠酮紫外光区的特征光谱进行定性，外标法在254、226 nm处进行定量。样品提取液中各组分分离良好，地西泮浓度在200 ng/ml～ 100 μg/ml范围内与峰面积呈线性相关，R=0.999 2,平均回收率92.28%～114.9%,变异系数(RSD)<5%,检测限(S/N=3)4 ng。

2.4液相色谱-质谱法液相色谱-质谱联用法由于进样体积小、溶剂消耗少、灵敏度高、定性准确及检测速度快等特点，是镇静剂残留检测的最主要手段。周德刚等采用高效液相色谱-串联质谱建立了猪肌肉中安定的检测方法[23]。猪肌肉组织的药物用乙腈提取，经HLB固相柱净化，采用正电喷雾离子源，在多反应监测(MRM)模式下测定。结果表明，安定在0.1～100 ng/ml内线性良好，相关系数r为0.998 5。在0.5、2.0、10.0 μg/kg添加水平下,加标回收率为68.2%～97.6%,检测限为0.1 μg/kg，定量限为0.5 μg/kg。孙雷等建立了猪肉和猪肾中包括安定和氯丙嗪在内的10种镇静剂超高效液相色谱-串联质谱分析方法[24]。样品经酶解后，调节pH呈碱性，分别用乙酸乙酯和叔丁基甲醚进行萃取，高速冷冻离心去除脂肪等杂质。提取液经Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱分离，以0.1%甲酸乙腈溶液和0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱。电喷雾正离子(ESI + )模式电离，多反应监测(MRM)模式检测，基质匹配标准溶液法进行定量。结果表明，10 种镇静剂在2～100 μg/L 范围内呈良好的线性关系，相关系数(r)均大于0.998;10 种镇静剂的检出限(S/N>3)为0.5 μg/kg，定量限(S/N>10)为1 μg/kg。3 个添加水平的回收率为64.5%～111.4%，批内、批间相对标准偏差(RSD)均小于15%。该方法具有简便快捷、灵敏度高、定性准确等特点。钱晓东等采用高效液相色谱-串联质谱法建立了同时测定水产品中地西泮、去甲地西泮、奥沙西泮和替马西泮4种镇静剂药物残留的检测方法[25]。样品用含1%氨水的乙腈提取2次，浓缩，经正己烷去脂、HLB固相萃取柱净化后，减压蒸干，用甲醇-水(5∶5，V/V)定容。采用CAPCELL PAK MGⅡC18(100 mm×2.1 mm id，3.5 μm)做分离柱，以甲醇和0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱。采用电喷雾电离，正离子扫描，选择反应监测，同位素内标法定量。结果表明，4 种药物在4～250 ng/ml 范围内呈现良好的线性关系，相关系数R2均大于0.990，定量下限均为1 μg/kg，以1、10、50 μg/kg 这3 个水平进行加标回收试验，4种药物的平均回收率为81.7%～119.8%，相对标准偏差为1.7%～17.3%。方法高效、灵敏，适合于水产品中这4 种镇静剂药物的定量及确证分析。渠岩等建立了同时测定畜禽肉中地西泮等13种镇静药物残留量的基质固相分散-超高效液相色谱-串联质谱方法[26]。样品经基质固相分散样品制备试剂盒净化后，进行超高效液相色谱-串联质谱分析，采用多反应监测模式，外标法定量。采用BEH C18液相色谱柱分离，以10 mmol/L 乙酸铵溶液- 甲醇为流动相进行梯度洗脱。结果表明，13种镇静药物的方法检出限为0.05～3.00 μg/kg，线性范围内低、中、高3个添加水平的回收率为77.4%～100.2%，相对标准偏差为1.3%～14.8%。严丽娟等利用超高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱，结合数据库，建立了乳制品中地西泮、氯丙嗪等20种镇静剂的高通量筛查方法[27]。样品以乙腈和酸化乙腈沉淀蛋白质和脂肪，冷冻离心浓缩，经超高效液相色谱分离，采用电喷雾离子源，正离子模式，基质匹配法进行定量分析，可在9 min内对20种镇静剂进行高通量筛查和定量分析。结果表明，地西泮和氯丙嗪的质量浓度分别在5～1 000 μg/L和1～500 μg/L范围内具有较好的线性关系，检出限分别为1.5 μg/L和0.3 μg/L，平均回收率为76.1%～108.2%，相对标准偏差为2.5%～9.0%。利用TargetAnalysis 软件建立镇静剂数据库,并应用于加标样品的筛查分析。通过数据库比对,样品中添加的镇静剂被全部筛查出来,鉴定准确度达到了100%，保留时间偏差小于0.1 min，质量偏差小于3 mDa，同位素峰形匹配度大于89.5%。利用此方法对购自超市的8个不同品牌的50余份乳制品进行了筛查分析,均未检出阳性样品。

3 化学发光法

化学发光法用于测定镇静剂类成分的残留具有灵敏度高、选择性好、分析速度快、线性范围宽等优点，但因其检测结果稳定性和重现性较差，并且目前可被利用的发光试剂较少，使该方法的推广应用受到制约。何树华等利用鲁米诺-铁氰化钾化学发光体系结合流动注射技术建立了测定氯丙嗪的化学发光新方法[28]。该方法有很高的灵敏度，检测限为5.17×10-9g/ml(IUPAC)，线性范围为1.0×10-8～1.0×10-6g/ml，对1.0×10-7g/ml氯丙嗪平行测定11次，其相对标准偏差为2.7%。张迎雪等提出了一种毛细管电泳化学发光联用技术同时测定氯丙嗪和异丙嗪[29]。在酸性条件下，氯丙嗪和异丙嗪能被 Ce(Ⅳ)氧化，然后将能量转移给荧光发射体——罗丹明6G，并以化学发光形式释放能量。基于此，结合流动注射技术，以10 mmol/L KH2PO4/H3PO4(pH 3.5)为运行缓冲液, 实现了2种药物的分离。此方法的线性范围分别为4.0×10-8～2.0×10-6g/ml和2.0×10-8～2.0×10-6g/ml, 检出限分别为 5.6 ng/ml和 3.4 ng/ml，对2.0×10-6g/ml异丙嗪平行测定9次, 相对标准偏差为2.8%。

4 总结与展望

随着镇静剂的应用越来越广泛，种类越来越多，检测方法不仅要求高效、灵敏和准确，还要求重现性和稳定性好。目前，色谱法在镇静剂的检测中应用最为广泛。液相色谱-质谱联用检测技术对于镇静剂类药物残留的检测，因其具有分辨率高、灵敏度好和分析速度快的优势，被农业部等部门定为标准方法在广泛应用。随着气相色谱法-质谱联用检测技术的发展，因其在灵敏度、专属性和分离效能等方面都有优势，在镇静剂类药物残留分析中受到越来越广泛的关注。但检测手段只是监控作用，从根源上解决问题还依赖于提高大众食品安全的意识，规范食品加工企业的生产。

[1] 黄红卫，杨泽生．畜产品质量安全现状分析[J]．肉类工业，2008(11):43-46．

[2] 张力群，吴平谷，金铨，等．镇静剂残留分析的色谱检测技术研究进展[J]．中国卫生检验杂志，2013，23(6):1634-1638．

[3] 中华人民共和国农业部公告第193号，食品动物禁用的兽药及其它化合物清单[R].2002．

[4] 张东升，龚燕，蔡建荣，等．安定检测方法的研究进展[J]．饲料工业，2003，24(6):39-41．

[5] 贾瑜，张德红，冯才茂，等．安定残留危害及其检测技术研究进展[J]．农产品质量与安全，2012(2):47-50．

[6] 陆基宗．学生滥用安定类药物有害[J]．家庭医学，2006(2):16．

[7] 乔宛虹．安定类药物分析研究进展[J]．中国现代药物应用，2008，2(2):18-19．

[8] KAR R N，DAS R K． Induction of sperm head abnormalities in mice by three tranquilizers[J]．Cytobios，1983，36(141):45-51．

[9] 贺江南．固相微萃取-气相色谱法检验盐酸氯丙嗪[J]．光谱实验室，2002，19(6):751-753．

[10] 许世富．气相色谱法质谱法测定猪肉中氯丙嗪残留量的研究[J]．现代农业科技，2008(14):203．

[11] 王有月，贾涛．违禁药物安定的酶联免疫检测方法探讨[J]．饲料检测，2008(11):50-54,69．

[12] 孙文佳，沈玉栋，孙远明，等．化学发光酶免疫法检测猪肉中氯丙嗪残留[J]．分析化学研究报告，2012，40(9):1397-1402．

[13] 张玉洁，张素霞，程林丽，等．GC-uECD法快速检测猪肉地西泮残留[J]．安徽农业科学，2009，37(18):8316-8317,8326．

[14] 张泽楷，张明时，陈文生．气相色谱法同时测定动物饲料中安定和三唑仑残留量[J]．理化检验-化学分册，2009，45(9):1038-1042．

[16] 吕燕，杨挺，赵健，等．气相色谱-质谱法测定猪肝中氯丙嗪残留量[J]．分析试验室，2005，27(3):119-122．

[17] 路平，曲志娜，谭维泉，等．气相色谱-质谱法测定猪肝中氯丙嗪残留的研究[J]．中国动物检疫，2006，23(7):30-31．

[18] 许世富，曾明华，汤春莲，等．气相色谱/质谱法测定猪肝中氯丙嗪残留量的研究[J]．现代农业科技，2008(14):203,219．

[19] 单美娜，徐晓枫，蒲云霞，等．气相色谱质谱法测定猪肉中氯丙嗪残留[J]．中国动物检疫食品卫生杂志，2013，25(5):438-440．

[20] 范盛先，黄玲利，袁宗辉，等．猪肾脏中氯丙嗪和异丙嗪残留检测方法的建立[J]．中国兽医学报，2005，25(4):412-414．

[21] 王海娇，周艳明，牛森．高效液相色谱法测定猪肉中安定残留量[J]．中国食品卫生杂志，2006，18(2):117-118．

[22] 汤文利，任爱丽，梁萌，等．高效液相色谱法同时测定饲料中地西泮、安眠酮的含量[J]．家禽科学，2006 (7):11-13．

[23] 周德刚，闫小峰，翟淑平，等．液相色谱串联质谱法测定猪肉中的安定残留[J]．中国兽药杂志，2008，42(11):24-26．

[24] 孙雷，张骊，徐倩，等．超高效液相色谱-串联质谱法检测猪肉和猪肾中残留的10种镇静剂类药物[J]．色谱,2010，28(1):38-42．

[25] 钱晓东，于慧娟，惠芸华，等．水产品中镇静剂残留的高效液相色谱-串联质谱法测定[J]．湖南农业科学，2010(19):134-137．

[26] 渠岩，路勇，冯楠，等．基质固相分散-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定畜禽肉中残留的13种镇静药物[J]．食品科学，2012,33(8):252-255．

[27] 严丽娟，张洁，潘晨松，等．超高效液相色谱-飞行时间质谱法高通量筛查乳制品中20种镇静剂[J]．分析化学，2013，41(1):31-35．

[28] 何树华，吕弋，何德勇，等．鲁米诺-铁氰化钾化学发光体系测定氯丙嗪[J]．西南师范大学学报：自然科学版，2003，28(2):331-333．

[29] 张迎雪，张竹君．Ce(Ⅳ)-罗丹明6G化学发光体系与毛细管电泳联用同时测定氯丙嗪和异丙嗪[J]．分析实验室，2010，29(12):16-20．