反相高效液相色谱法测定麻仁丸中苦杏仁苷和芍药苷的含量

刘立新，柳兵 （吴都医药牛尾巴大药房，湖北 鄂州436054）

谈发明 （宜昌市中医院，湖北 宜昌443003）

麻仁丸由火麻仁、大黄、芦荟、白芍、枳实、苦杏仁等中药组成，具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经之功效［1］。苦杏仁苷是苦杏仁的主要有效成分，苦杏仁苷在经酶作用分解形成氢氰酸的同时，也产生苯甲醛，后者可抑制胃蛋白酶的活性，从而影响消化功能［2］。芍药性微寒、味苦酸，有养血柔肝、缓中止痛、敛阴收汗的功能，芍药苷是芍药的主要有效成分之一［3］。笔者参照有关文献，采用反相高效液相色谱法 （reversed phase high-performance liquid chromatography，RP-HPLC），建立麻仁丸中苦杏仁苷和芍药苷的含量测定方法，为麻仁丸的质量控制和评价提供一定的科学依据。

1 仪器与试剂

Dionex-P680液相色谱仪，UVD170U检测器，四元低压梯度泵，HKZJZ2830171BAF戴安变色龙高效液相数据处理系统，美国戴安公司；5200H型超声波清洗器，上海科导超声仪器有限公司；SZ-97自动三重纯水蒸馏器，上海亚荣生化仪器厂；AT-201电子分析天 （d=0.01mg，瑞士）；麻仁丸 （按2010版药典自制）；苦杏仁苷对照品，供含量测定用，中国药品生物检定所，批号：110820-201305；芍药苷对照品，供含量测定用，中国药品生物检定所，批号：736-200320；乙腈为色谱纯；水为重蒸馏水 （自制）；甲酸等其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液的配制

2.1.1 对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36h的苦杏仁苷对照品和芍药苷对照品适量，分别精密称定，加甲醇制成每1ml含苦杏仁苷和芍药苷各100μg的溶液。

2.1.2 麻仁丸供试品溶液的制备 参照文献 ［4-5］。

2.1.3 阴性对照溶液的制备 按麻仁丸处方比例和工艺，制备不含苦杏仁和白芍的阴性样品。按供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。

2.2 色谱条件

色谱柱：Aglient TC-C18柱 （4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1% （11：89）；流速：1.0ml／min；柱温：30℃；检测波长：221nm［6-7］。

2.3 系统适用性试验

取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μl进样，按照上述色谱条件测定，记录色谱图。结果：理论板数按苦杏仁苷峰计算不低于7000，按芍药苷峰计算不低于10000，苦杏仁苷和芍药苷峰与其它杂质峰分离度均大于1.5，峰形对称，阴性无干扰。对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液在此色谱条件下的色谱图见图1～3。

图1 对照品溶液色谱图

图2 供试品溶液色谱图

图3 阴性对照溶液色谱图

2.4 线性关系考察

制备浓度为200μg／ml的苦杏仁苷和200μg／ml的芍药苷的混合对照品溶液，精密吸取上述对照品溶液1、2、4、6、8、10ml分别置于10ml容量瓶中，加入甲醇定容，摇匀。分别精密吸取上述对照品溶液10μl，各进样2次，按上述色谱条件测定。以峰面积平均值为纵坐标 （Y），以进样量为横坐标（X）绘制标准曲线。结果表明，苦杏仁苷在0.2～2.0μg范围内线性关系良好，回归方程为Y=0.1955X+6.7365，r=0.9996；芍药苷在0.2～2.0μg范围内线性关系良好，回归方程Y=0.1256X+7.5868，r=0.9993。

2.5 精密度试验

精密吸取苦杏仁苷、芍药苷对照品溶液10μl，连续进样6次，按上述色谱条件测定，结果苦杏仁苷的峰面积RSD为0.31%，芍药苷的峰面积RSD为0.45%。表明精密度良好。

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液，按上述色谱条件，分别于0、2、4、8、12、24h测定峰面积。苦杏仁苷的峰面积RSD为0.60%，芍药苷的峰面积RSD为0.98%，试验结果表明，供试品溶液在24h内稳定性良好。

2.7 重复性试验

按照含量测定的方法，对同一样品测定5次，结果苦杏仁苷和芍药苷含量平均值分别为2.2387mg／g、2.2278mg／g，RSD分别为1.3%、1.1%。

2.8 加样回收试验

取已知含量的麻仁丸样品 （苦杏仁苷含量为2.2387mg／g、芍药苷含量为2.2278mg／g）6份，每份约0.7g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，分别精密加入对照品溶液15ml，精密加甲醇35ml，按2.1.2项下供试品溶液制备方法制备，分别按上述色谱条件测定。结果见表1、2，表明本法苦杏仁苷和芍药苷回收率为分别为99.36%、99.16%，RSD分别为1.3%、2.0%。

表1 苦杏仁苷加样回收试验结果

表2 芍药苷加样回收试验结果

2.9 含量测定

按上述含量测定方法，对3批麻仁丸的含量进行测定，外标法计算样品中苦杏仁苷和芍药苷的含量，结果见表3。

表3 麻仁丸中苦杏仁苷和芍药苷的含量测定结果

3 讨论

本试验用RP-HPLC法，流动相为乙腈-0.1%甲酸 （11∶89），可使苦杏仁苷和芍药苷有良好的分离度。选择测定波长时，苦杏仁苷最大吸收波长208nm，而芍药苷为230nm，我们选定217、219、211、213nm4个波长进行比较，经试验确定221nm时苦杏仁苷和芍药苷的检测灵敏度比较好。此方法简便、准确、重现性好、精密度高，阴性无干扰，可作为麻仁丸中苦杏仁苷和芍药苷含量测定的方法。

［1］刘晋华，蔡大伟，屈梅，等 .复方麻仁丸质量标准的研究 ［J］.中国药师，2004，7（10）：778-780.

［2］邢国秀，李楠，杨美燕，等 .天然苦杏仁昔的研究进展 ［J］.中成药，2003，25（12）：1007-l009.

［3］胡南，许惠玉，陈志伟，等 .芍药苷的药理学研究进展 ［J］.齐齐哈尔医学院学报，2007，28（9）：1093-1095.

［4］夏其乐，王涛，陆胜民，等 .苦杏仁苷的分析、提取纯化及药理作用研究进展 ［J］.食品科学，2013，7（16）：1-9.

［5］李坤平，李康，孔繁晟，等 .正交设计研究白芍总苷的超声提取工艺 ［J］.食物与生物技术学报，2009，28（4）：201-504.

［6］闫正国，杨垒.HPLC测定十味扶正胶囊中芍药苷的含量 ［J］.中国现代医药，2007，9（5）：24-26.

［7］左力.HPLC法测定补脾益肠丸中苦杏仁苷含量 ［J］.辽宁中医药大学学报，2013，15（7）：78-79.