毛细管气相色谱法测定阿莫曲坦原料药中8种有机溶剂残留量

冯光玲，丁文娟，冯爱国，马新成，李 丹（1.山东省医药工业研究所，济南 250101；2.山东省化学药物重点实验室，济南 250101；.山东临沂动植物园，山东临沂 27607）

阿莫曲坦（Almotriptan）是西班牙Almirall-Prodesfarma 公司开发的一种抗偏头痛药物，于2000年在西班牙获批准上市，临床上用于有（或无）先兆的偏头痛发作的头痛期的急性治疗[1]。偏头痛是一种常见的复发性、间歇性头痛，其发病机制尚未完全清楚，但学者们认为神经递质5-羟色胺（5-HT，一种强效的血管收缩因子）在偏头痛的发病机制中起着主要作用[2]。阿莫曲坦原料药国内正处于研发状态，其在合成过程中使用了乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、异丙醇与甲苯等有机溶剂，因此在制订质量标准时必须考察该原料药的有机溶剂残留量问题。本文按照2010年版《中国药典》二部残留溶剂测定法指导原则[2]，采用毛细管气相色谱法对8种有机溶剂残留量进行测定和验证，结果表明建立的方法操作简便，可对阿莫曲坦原料药中残留的8种有机溶剂进行有效控制，从而为药品质量标准的修订提供科学依据。

1 材料

1.1 仪器

6890 气相色谱仪、7694E 自动顶空进样器（美国Agilent公司）。

1.2 药品与试剂

阿莫曲坦原料药（山东省医药工业研究所合成室提供，批号：130201、130202、130203，纯度：99.82%、99.72%、99.76%）；乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、异丙醇、甲苯、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）均为分析纯（含量均大于99.0%）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent DB-5毛细管柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm），以（5%）苯基-（95%）甲基聚硅氧烷为固定液；柱温采取程序升温：35 ℃保持5 min，再以50 ℃/min的速率升温至200 ℃，保持10 min；氢火焰离子化检测器，检测器温度：250 ℃；载气：高纯N2，流速：10 ml/min；进样口温度：200 ℃，分流比：10∶1；顶空气体进样，平衡温度：100 ℃，平衡时间：30 min，进样瓶装量：2 ml。

2.2 溶液配制

空白溶液：精密量取DMF 2 ml，置于顶空进样瓶中，作为空白溶液。

标准溶液贮备液：称取乙醇约500 mg、乙腈约41 mg、二氯甲烷约60 mg、正己烷约29 mg、乙酸乙酯约500 mg、四氢呋喃约72 mg、异丙醇约500 mg、甲苯约89 mg，置于含有适量DMF的100 ml 量瓶中，充分振摇使溶解，加DMF 稀释至刻度，摇匀，即得。

标准溶液：精密量取上述贮备液10 ml 置于100 ml 量瓶中，加DMF至刻度，摇匀，作为标准溶液。

供试品溶液：精密称取阿莫曲坦原料药0.2 g，置于顶空进样瓶中，加DMF 2 ml，作为供试品溶液。

取标准溶液和供试品溶液进样分析，结果各溶剂分离良好，空白溶液无干扰。色谱图见图1。

图1 毛细管气相色谱图A.标准溶液；B.供试品溶液；1.乙醇；2.乙腈；3.二氯甲烷；4.正己烷；5.乙酸乙酯；6.四氢呋喃；7.异丙醇；8.甲苯；9.DMFFig 1 Capillary GC chromatogramsA.reference solution；B.test solution；1.ethanol；2.acetonitrile；3.dichlormethane；4.n-hexane；5.acetic ether；6.tetrahydrofuran；7.isopropanol；8.methylbenzene；9.DMF

2.3 标准曲线的绘制

分别精密量取标准溶液贮备液0.50、0.75、1.00、1.25、1.50 ml，置于10 ml 量瓶中，加DMF 稀释至刻度，摇匀。各取上述溶液2 ml，置于顶空进样瓶中，按“2.1”项下色谱条件分别进样。分别以乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、异丙醇与甲苯的质量浓度（c）为横坐标、峰面积（A）为纵坐标绘制标准曲线，其线性关系见表1。由表1可知，各有机溶剂在各自的检测质量浓度范围内线性关系良好（r为0.999 6～0.999 9），表明方法可靠。

表1 各有机溶剂线性关系试验结果Tab 1 Linear relationship of organic solvents

2.4 精密度试验

取标准溶液，按“2.1”项下色谱条件，连续进样6 次，记录色谱图，计算峰面积的RSD。结果乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、异丙醇与甲苯的RSD分别为0.18%、0.19%、0.22%、0.15%、0.29%、0.32%、0.33%、0.27%（n＝6），表明精密度符合要求。

2.5 回收率试验

精密称取样品（批号：130201）0.2 g，共10 份，其中一份加入2 ml DMF 作为空白溶液；分别配制低（80%）、中（100%）、高（120%）3种质量浓度的标准溶液，各取2 ml，加入盛有样品的顶空进样瓶中，平行3 份操作。以“2.2”项下的标准溶液作为对照，进样分析，计算回收率。结果平均回收率为99.8%～100.8%（RSD＝0.87%～2.11%，n＝3），均符合要求，见表2。

表2 回收率试验结果（%，n＝3）Tab 2 Results of recovery test（%，n＝3）

2.6 定量限、检出限试验

将标准溶液逐级稀释，分别取2 ml，置于顶空进样瓶中，按“2.1”项下色谱条件进样，记录色谱图，直至信噪比为10∶1 和3∶1，即为定量限和检测限。结果乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、异丙醇与甲苯定量限分别为0.15、0.12、0.18、0.09、0.45、0.21、0.45、0.54 ng，检测限分别为0.05、0.04、0.06、0.03、0.15、0.07、0.15、0.18 ng。

2.7 重复性试验

取同一批（批号：130201）样品6 份，每份约0.2 g，精密称定，按“2.2”项方法制备供试品溶液并测定。结果异丙醇平均含量为0.016%，RSD＝0.59%（n＝6），表明方法重复性良好。

2.8 样品中有机溶剂残留量测定

精密量取标准溶液和供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别进样测定，以外标法计算得3批样品中异丙醇残留量平均值分别为0.014%、0.017%和0.018%，均未检出其他7 种有机溶剂。

3 讨论

3.1 溶剂的选择

因阿莫曲坦不溶于水，易溶于沸点较高的DMF，且DMF不干扰其他溶剂的检查，故选择DMF为溶剂。

3.2 顶空进样条件的选择

考虑到待测残留有机溶剂的沸点除甲苯外，乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、异丙醇的沸点均小于100 ℃，因此采用顶空瓶平衡温度为100 ℃；并且在此条件下，对顶空瓶平衡时间进行筛选，结果发现平衡时间在30 min后，峰面积基本不再改变。因此选择在100 ℃平衡温度条件下平衡30 min作为顶空进样条件。

3.3 色谱柱温度、加热时间的选择

乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、异丙醇的沸点范围较窄（39～83 ℃），笔者曾分别选择柱温35、45、55 ℃进行试验，结果在35 ℃时乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、异丙醇分离较好，45 ℃和55 ℃时出峰过快、分离度差。故选择35 ℃作为初温，保持5 min，待8种溶剂完全出峰后，再升高至200 ℃，使DMF出峰。

3.4 检测限度

药品中有机溶剂残留种类因生产工艺不同而异，本文中各种有机溶剂限度根据文献[3]要求及2010年版《中国药典》[2]的规定，暂将阿莫曲坦原料药中乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、异丙醇与甲苯的限度定为0.5%、0.041%、0.06%、0.029%、0.5%、0.072%、0.5%和0.089%。

综上所述，本试验建立的方法线性、精密度、回收率、定量限、检测限结果等均较好，符合要求，能准确、迅速地检测出阿莫曲坦原料药中残留的乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、异丙醇与甲苯，从而控制药品质量、保证安全用药。

[1]李晓东.抗偏头痛药阿莫曲坦：almotriptan[J].国外医药合成药、生化药、制剂分册，2002，23（1）：55.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：附录61-63.

[3]周海钧.药品注册的国际技术要求：质量部分（ICH）[M].北京：人民卫生出版社，2000：82-89.