HPLC法测定不同加工方法金银花中绿原酸和木犀草苷的含量

王 萌，王建成，刘钧宁，林惠彬

（1.山东省中医药研究院，山东济南250014；2.临沂市食品药品检验检测中心，山东临沂276001；3.山东省千佛山医院，山东济南250014）

HPLC法测定不同加工方法金银花中绿原酸和木犀草苷的含量

王 萌1，王建成2，刘钧宁3，林惠彬1

（1.山东省中医药研究院，山东济南250014；2.临沂市食品药品检验检测中心，山东临沂276001；3.山东省千佛山医院，山东济南250014）

目的通过采用高效液相色谱法测定不同加工方法所得金银花药材中绿原酸和木犀草苷的含量，考察不同加工方法对金银花质量的影响。方法绿原酸含量测定采用Agilent Zorbax SB－C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm），流动相：乙腈－0.4%磷酸（15∶85）；流速：1.0 m L·min－1；检测波长：327 nm；柱温：室温。木犀草苷含量测定采用Hypersil Phenyl－2色谱柱（4.6 mm×150 mm，5μm），流动相：乙腈－0.5%冰醋酸，二元梯度洗脱，0～15 min，乙腈10%～20%，15～30 min，乙腈20%，30～40 min，乙腈20%～30%；流速：1.0 mL·min－1；检测波长：350 nm；柱温：40℃。结果不同加工方法对金银花药材中绿原酸和木犀草苷的含量有一定影响。结论烘干法和微波法所得样品质量较好，且药材的外观色泽与药材内在质量之间存在较为密切的关系。

高效液相色谱法；金银花；绿原酸；木犀草苷；加工方式

金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花［1］。金银花具有清热解毒，疏散风热的功效，为临床常用中药材，也是山东道地药材。近年来，临床对金银花的需求量更是逐年增加。但由于受种植地域环境的影响以及采摘时间、加工方式以及储存条件的影响导致金银花药材的质量参差不齐。有报道称不同的加工方式可影响金银花中某些化学成分的含量［2］。本文主要收集了山东省不同产地常用加工方式所得的金银花样品，采用HPLC法对其绿原酸以及木犀草苷含量进行测定，并根据测定结果分析含量变化规律，为优选加工方式提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 仪器 Agilent1100高效液相色谱仪（自动进样器）、二极管阵列检测器（DAD）；超声波清洗器（KQ－250E型医用，江苏昆山市超声仪器有限公司）；FA1604电子天平（上海天平仪器厂）；瑞士梅特勒AB265－S分析天平。

1.2 试剂与试药 绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110753－200212）；木犀草苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：11720－201106）；乙腈（色谱纯，DNK，United States of America）；乙醇（分析纯，上海振兴化工一厂）；纯化水；冰醋酸（国药集团化学试剂有限公司）。药材样品分别取材于淄博市博山区、临沂市平邑县、费县。

1.3 方法

1.3.1 绿原酸含量测定

1.3.1.1 色谱条件 Agilent Zorbax SB－C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm，柱号：880975－902）；流动相：乙腈－0.4%磷酸（15∶85）；流速：1.0 mL·min－1；检测波长：327 nm；柱温：室温。理论板数按绿原酸计算应不低于1 000［3］。

1.3.1.2 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品适量，置于棕色容量瓶中，加50%甲醇超声溶解并制成每1 mL含40μg的溶液（10℃以下保存）。

1.3.1.3 供试品溶液的制备 取本品粉末（过四号筛）约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，称定重量，超声处理（功率250 W，频率35 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，置25 mL棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。

1.3.1.4 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。按以上色谱条件所得的绿原酸对照品、金银花样品图谱见图1、图2。

1.3.2 木犀草苷含量测定

1.3.2.1 色谱条件 Hypersil Phenyl－2色谱柱（4.6 mm×150mm，5μm）；流动相：乙腈－0.5%冰醋酸，二元梯度洗脱，0～15 min，乙腈10%～20%，15～30 min，乙腈20%，30～40 min，乙腈20%～30%；流速：1.0 mL·min－1；检测波长：350 nm；柱温：40℃。理论板数按木犀草苷计算应不低于20 000［3］。

图1 绿原酸对照品HPLC图谱

图2 金银花样品HPLC图谱

1.3.2.2 对照品溶液的制备 精密称取在五氧化二磷干燥器中减压干燥12 h的木犀草苷对照品适量，加70%乙醇超声溶解并制成每1 mL含40μg的溶液。

1.3.2.3 试品溶液的制备 取样品（过四号筛）2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50 mL，称定重量，超声处理（功率250 W，频率35 kHz）1 h，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10 mL，回收溶剂至干，残渣用70%乙醇溶解，转移至5 mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，即得。

1.3.2.4 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。按以上色谱条件所得的木犀草苷对照品、金银花样品图谱见图3、图4。

图3 木犀草苷对照品HPLC图谱

图4 金银花样品HPLC图谱

2 结果

10批金银花样品分别按“绿原酸供试品溶液制备”、“木犀草苷供试品溶液制备”方法制备样品，精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，以干燥品计算含量，结果见表1。

表1 不同加工方法金银花药材中绿原酸和木犀草苷的含量（n＝10）

3 小结与讨论

通过实验研究发现，不同加工方法所得样品中所含绿原酸和木犀草苷的含量均超过药典规定的最低标准，质量合格。其中杀青烘干、烘干、蒸后烘干、微波法所得样品不仅色泽较好，且测得绿原酸和木犀草苷的含量都相对比较高。晒干和阴干所得样品的绿原酸和木犀草苷含量变化规律不明显。并且在实验中发现金银花药材中这两种化学成分的变化和药材的褐变程度存在较密切的关系。两种成分均含量较高的1号、6号、7号、8、10号样品的共同特点是药材颜色为新鲜的黄绿色，而两种成分含量相对较低的3号、5号、9号样品虽然加工方式不同，但药材颜色均为暗绿色，提示金银花的干燥方式对其有效成分的含量有较大影响。由于蒸后烘干、微波烘干在实际生产中应用较少，推广较为困难。因此，在实际的产地药材加工的过程中，对于种植基地的大规模加工而言，机器化短时间高温烘干用时短，效率高，药材性状好，有效成分含量高，是较为理想的产地加工方式。而对于种植散户来说，机器投入成本高，普及实施难度较大，因此在仍采用传统晾晒或阴干加工等其他加工方式的情况下，通过控制色泽等指标来保持金银花药材的性状并最终保证药材质量简便易行，具有较高的可操作性［4］。

［1］范蕾，蓝云龙，余乐，等.不同产地金银花中绿原酸及木犀草苷的含量测定［J］.中华中医药学刊，2013，31（1）：172－174.

［2］高建邦，宋平顺.不同加工方法对金银花中绿原酸和木犀草苷含量的影响［J］.中华中医药杂志，2010，25（11）：1796－1798.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典2005年版（一部）［M］.北京：化学工业出版社，2005：152－153.

［4］凌益平，吕芳，骆雅琴，等.金银花中绿原酸的工业化提取纯化方法探讨［J］.药学研究，2013，32（1）：55－57.

Determ ination of chlorogenic acid and galuteolin w ith different processing methods in flos lonicerae by HPLC

WANGMeng1，WANG Jian-cheng2，LIU Jun-ning3，LIN Hui-bin1
（1.Shandong Academy of Chinese Medicine，Jinan 250014，China；2.Linyi Institue for Drug Contorl，Linyi276001，China；3.Shandong Qianfoshan Hospital，Jinan 250014，China）

ObjectiveTo investigate the effect of different processingmethods on the content of chlorogenic acid and galuteolin in flos lonicerae and the quality of flos lonicerae.M ethodsThe determination of chlorogenic acid was performed on Agilent Zorbax SB－C18column（4.6 mm×250 mm，5μm）.Themobile phase was acetonitrile－0.4%phosphate（15∶85）with the flow rate of 1.0 mL·min－1.The detection wavelength was 327 nm and the column temperature was room temperature.The determination of galuteolin was performed on Hypersil Phenyl－2 column（4.6 mm×150 mm，5μm）.The mobile phasewas acetonitrile－0.5%glacial acetic acid with binary gradientelution，acetonitrile 10%～20%within 0～15 min，acetonitrile 20%within 15～30 min，acetonitrile 20%～30%within 30～40min.The flow ratewas 1.0 mL·min－1，the detection wavelength was 350 nm and the column temperature was 40℃.ResultsDifferent processing methods had certain effects on the contentof chlorogenic acid and galuteolin in flos lonicerae.ConclusionItwas suitable to use the processing of dryingmethod and microwave in the production.And there was close relationship between the quality and appearance of color.

HPLC；Flos lonicerae；Chlorogenic acid；Galuteolin；Processingmethods

R284.2

A

2095－5375（2014）05－0261－003

山东省中医药科技发展计划（No.2009－129）；十二五”国家科技支撑计划（No.2011BAI06B01）、（No.2011BAC02B04）；国家中医药行业科研专项（No.201407002）；山东省中医药科技发展计划（No.2011Z－003－2）

王萌，女，助理研究员，研究方向：中药资源，E－mail：lemonheji＠sina.com