HPLC法测定小儿消食颗粒中熊果酸的含量

李华玉，林永强，郭东晓

（1.临沂市食品药品检验检测中心，山东临沂276001；2.山东省食品药品检验所，山东济南250101）

HPLC法测定小儿消食颗粒中熊果酸的含量

李华玉1，林永强2，郭东晓2

（1.临沂市食品药品检验检测中心，山东临沂276001；2.山东省食品药品检验所，山东济南250101）

目的采用高效液相色谱法测定小儿消食颗粒中熊果酸的含量。方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇－0.5%醋酸铵溶液（83∶17）为流动相，检测波长为215 nm。结果熊果酸的进样量在0.168 6～3.372 0 μg之间与峰面积线性关系良好，相关系数r＝1.000 0，平均加样回收率为96.5%（RSD＝0.59%，n＝6）。结论该方法简便、准确，可用于小儿消食颗粒中熊果酸的含量测定。

小儿消食颗粒；熊果酸；含量测定

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200高效液相色谱仪；Sartorius CP225D电子天平。

1.2 试药 熊果酸对照品（中国食品药品检定研究院提供，批号：110742－200517）；供试品批号为100801、110905、110906（规格1，产地山西，每袋装1.5 g），1110002、1111001、1111002（规格2，产地山东，每袋装1.2 g），由生产厂家提供，阴性对照为自制；甲醇为色谱纯，水为Millipore制备的纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液制备方法的考察

2.1.1 提取溶剂的考察 熊果酸极性较低，易溶于脂溶性较强的溶剂。参照《中国药典》2010年版（一部）小儿消食片项下的提取条件，比较乙醚、二氯甲

烷、甲醇三种脂溶性溶剂的提取效果。结果测得每袋含量依次为0.76、0.66、0.76 mg。以二氯甲烷为提取溶剂时含量测定结果最低，其他两种结果相当。但是甲醇提取的供试品溶液放置后，有结晶析出，可能会影响色谱柱使用寿命，所以采用乙醚作为提取溶剂。

2.1.2 提取方法的考察 考察的提取方法包括：超声处理（功率500W，频率40 kHz）30、60、90 min，回流提取1、2 h。测得每袋含量依次为0.744、0.763、0.763、0.758、0.763 mg。由测定结果可知，超声提取60、90 min与加热回流提取2 h结果相当。为了节省能源，确定提取方法为超声提取60 min。

2.1.3 提取次数的考察 以乙醚作为提取溶剂，超声提取60 min，对比了1次和2次提取的测定结果，发现二者差距不大，结果分别为每袋0.763、0.764 mg。所以确定超声提取1次即可。

2.1.4 取样量的考察 考察三个取样量（分别为1、2、3 g）对含量测定结果的影响。结果每袋含量分别为0.763、0.763、0.746 mg。取样量1 g和2 g时测定结果差异不大，取样量3 g时测定结果偏低。为了确保取样的均匀性，确定规格2取样量为2 g。由于规格1的处方量与规格2相同，制成总量是规格2的2.5倍，故规格1的取样量定为5 g。

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2.2 供试品溶液的制备 取重量差异项下的样品，研细，取规格1约5 g或规格2约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加乙醚100 mL，超声处理（功率500 W，频率40 kHz）1 h，放冷，摇匀，滤过，滤渣用乙醚洗涤2次，每次25 mL，合并乙醚液，挥干，残渣用石油醚（30～60℃）浸泡2次，每次10 mL（约浸泡1 min），倾去石油醚，残渣用甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.3 对照品溶液的制备 精密称取熊果酸对照品15.08 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得到浓度为0.120 6 mg·mL－1的对照品溶液。

2.4 流动相的考察 参考有关文献［1～3］，选择色谱柱Thermo BDS Hypersil C18（4.6mm×250mm，5μm），检测波长215 nm，考察三种流动相：甲醇－0.05%冰醋酸溶液（88∶12）、甲醇－0.05%冰醋酸溶液（83∶17）和甲醇－0.5%醋酸铵溶液（83∶17）。

精密吸取供试品溶液及对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，在三种流动相下进行测定，熊果酸色谱峰与相邻峰分离度依次为1.35、1.45、1.77。故确定以甲醇－0.5%醋酸铵溶液（83∶17）作为流动相。

2.5 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇－0.5%醋酸铵溶液（83∶17）为流动相，流速1 mL·min－1；柱温：35℃；检测波长为215 nm。理论板数按熊果酸峰计算应不低于8 000。

2.6 耐用性试验 考察三种色谱柱：依利特Hypersil BDSC18（4.6 mm×250 mm，5μm）；Kromasil 100－5 C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；Thermo BDSHypersil C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；按“2.5”项下确定的条件进行试验。三种不同品牌的色谱柱分离度依次为1.81、1.60、1.77。结果表明，熊果酸色谱峰峰形较好，分离度均大于1.5，试验条件适用范围广。

2.7 线性关系的考察 分别精密吸取熊果酸对照品溶液（C对为0.168 6 mg·mL－1）1、2、5、10、15、20μL，注入液相色谱仪，分别测定峰面积。以熊果酸对照品的进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程，Y＝241.160 0X＋1.070 5（r＝1.000 0）。试验结果表明，熊果酸进样量在0.168 6～3.372 0μg之间进样量与峰面积呈良好的线性关系。

2.8 精密度试验 精密吸取熊果酸对照品溶液（0.168 6 mg·mL－1）10μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，测其峰面积，RSD为0.19%，说明仪器精密度良好。

2.9 稳定性试验 取批号为1111002（规格2）的样品，照“2.3”项下供试品溶液的制备方法制成供试品溶液。每隔5 h进样一次，每次10μL，测定熊果酸峰面积，共考察25 h，计算，RSD为0.47%，结果表明供试品溶液在25 h内稳定性良好。

2.10 重复性试验 取批号为1111002（规格2）的样品，照“2.3”项下供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，平行制备6份，分别精密吸取供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，测定，计算含量。结果平均含量为每袋0.759 3 mg（RSD为0.31%），说明方法重复性良好。

2.11 加样回收率试验 取批号为1111002（规格2，熊果酸含量为0.759 3 mg／袋，每袋装1.2 g）的样品约1 g，精密称定，精密加入熊果酸对照品溶液（浓度为：0.674 4 mg·mL－1）1 mL及乙醚99 mL，按供试品溶液的制备方法平行制备6份，用上述色

谱条件进行测定，计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

结果表明，测定方法的回收率良好。

2.12 专属性试验 取处方中除去山楂的其他药味，按处方比例制成缺山楂阴性对照样品，照“2.3”项下供试品溶液的制备方法制得阴性对照溶液。分别精密吸取熊果酸对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μL，注入液相色谱仪进行测定。结果供试品色谱中，在与对照品色谱保留时间相同的位置上，有相应色谱峰，而阴性对照色谱中无相应色谱峰。说明处方中其他药味对测定结果无干扰。结果见图1。

图1 专属性试验HPLC色谱图A.对照品；B.样品；C.阴性对照

2.13 样品含量测定 按供试品溶液的制备方法及上述色谱条件对6批样品进行测定，结果见表2。

表2 熊果酸含量测定结果

3 讨论

3.1 本实验中的供试品溶液，是参照《中国药典》2010年版（一部）小儿消食片的提取条件进行制备的，这有利于系列制剂标准的统一。但是在后续的实验过程中发现，在《中国药典》小儿消食片的HPLC条件下［流动相为甲醇－0.05%冰醋酸溶液（88∶12）］，小儿消食颗粒供试品溶液中熊果酸的色谱峰未能达到合适的分离度，即使换用多种不同品牌的色谱柱，分离度始终低于1.5。采用流动相［2～4］：甲醇－0.5%醋酸铵溶液（83∶17），熊果酸峰的分离效果好，对色谱柱选择性不强。

3.2 同一中药制剂质量标准不同，是当前中药检验和质量控制中遇到的一大问题。本文建立的熊果酸含量测定方法，对分别执行两个不同标准的两个生产厂家的小儿消食颗粒均适用，为其质量标准的统一提供了实验依据。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：493－494.

［2］李涛，郝武常，徐长根，等.HPLC－ELSD法测定不同产地女贞子中齐墩果酸与熊果酸的含量［J］.中药材，2005，28（5）：391－393.

［3］高文分，袁文娟.HPLC法测定毛萼香茶菜不同药用部位中熊果酸和齐墩果酸的含量［J］.药物分析杂志，2009，29（11）：1947－1949.

［4］梁瑞雪，张新军，贾元印，等.HPLC法测定天中胶囊中刺囊酸和齐墩果酸的含量［J］.药学研究，2013，32（11）：626－628.

Determination of usolic acid of Xiao′er Xiaoshi Granules by HPLC

LI Hua-yu1，LIN Yong-qiang2，GUO Dong-xiao2
（1．Linyi Center for Food and Drug Control，Linyi276001，China；2．Shandong Institute for Food and Drug Control，Jinan 250101，China）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of usolic acid in Xiao′er Xiaoshi Granules.MethodsC18column was adopted with methanol－0.5%ammonium acetate solution（83∶17）as mobile phase，and the detection wavelength was 215 nm.ResultsThe linear range of usolic acid was 0.168 6～3.372 0μg（r＝1.000 0）and the average recovery was 96.5%（RSD＝0.59%，n＝6）.ConclusionThe simple and accurate method can be used to determinate usolic acid of Xiao′er Xiaoshi Granules.

Xiao′er Xiaoshi Granules；Usolic acid；Determination

R927.2

A

2095－5375（2014）01－0011－003

2011年国家药品标准提高课题（No.741）

李华玉，男，副主任药师，研究方向：药物分析，E－mail：820998279＠qq.com

郭东晓，男，博士研究生，研究方向：药物分析，Tel：0531－81216523，E－mail：guodx0212＠126.com。