4种方法对灵芝活性成分的提取效果及灵芝茶配方试验*

袁学军 陈忠荫 范平杰 李艳丽



4种方法对灵芝活性成分的提取效果及灵芝茶配方试验*

袁学军 陈忠荫 范平杰 李艳丽

（琼州学院生物科学与技术学院，海南 三亚 572000）

研究4种不同提取方法对灵芝提取液中活性成分灵芝蛋白、多糖、三萜的影响。试验结果显示，2种溶剂提取的3种活性成分的含量均高于1种溶剂，且以先水提后醇提的效果最佳，不同提取方法之间存在极显著差异。灵芝茶配方试验中以配方3（灵芝81%、罗汉果15%、砂仁2%、陈皮1%、山楂1%）的效果较好。

灵芝；活性成分；提取方法；灵芝茶配方

灵芝（）素有“仙草”之誉。灵芝的药理成分非常丰富，包括灵芝多糖、灵芝多肽、三萜类、蛋白质、生物碱等。《神农本草经》和《本草纲目》都对灵芝的功效有详细的极为肯定的记载。现代药理与临床实践证实灵芝多糖是灵芝扶正固本，滋补强壮，延年益寿的主要成分，对人体具有双向调节作用，所治疾病涉及心脑血管、消化、神经、内分泌、呼吸、运动等各个系统，尤其对治疗肿瘤、肝脏病变及失眠功效十分显著，且无毒副作用[1～4]。目前，国内外学者已经对药用灵芝的活性成分如灵芝活性蛋白、灵芝多糖、灵芝三萜和灵芝酸等，栽培条件对灵芝活性成分的影响[5]，灵芝茶加工工艺[6，7]等进行研究报道，但不同提取方式对灵芝茶药用成分的影响尚未见报道。

1 材料与方法

1.1 试剂

葡萄糖由广州化学试剂厂生产，熊果酸和香草醛由上海晶纯试剂有限公司生产，牛白蛋白和考马斯亮蓝G25由国药集团化学试剂有限公司生产；活性炭、蒽酮、三氯甲烷、磷酸、冰乙酸、氯化钠、硫酸铵、碳酸氢钠、盐酸、氢氧化钠、无水乙醇、硫酸和高氯酸均为分析纯。

1.2 方法

（1）灵芝混合液提取。方法1：5 g灵芝用50 mL纯乙醇提取24 h，然后过筛（100目）；方法2：5 g灵芝用50 mL蒸馏水煮40 min，然后过筛；方法3：5 g灵芝先用25 mL纯乙醇提取24 h，过筛后再用25 mL水煮40 min，过筛，2次提取液混合；方法4：5 g灵芝先用25 mL水煮40 min，过筛后再用25 mL纯乙醇提取24 h，过筛，2次提取液混合。测各提取液蛋白质、多糖及三萜含量。

（2）灵芝茶冲剂。灵芝茶配方见表1，按不同配方将灵芝、罗汉果、砂仁、山楂、陈皮等分别清理干净，洗涤，在干燥箱内60 ℃干燥24 h，粉碎过筛（筛孔直径5.0 mm），浸提。观察记录各配方茶质并测吸光值。

（3）测定方法。灵芝多糖的测定参照蒽酮-硫酸法[6]，用葡萄糖作的标准曲线为：=0.7622+0.0122，2=0.998。灵芝蛋白的测定参照考马斯亮蓝G-250法[6]，用牛血清蛋白作的标准曲线为：=0.6643+0.0009，2=0.999。灵芝三萜的测定参照直接光度法[7]，用熊果酸作的标准曲线为：=0.4144-0.01，2=0.9934。

（4）统计分析。用南京农业大学王韶华教授发明的stst软件进行统计分析。

表1 5个灵芝茶冲剂的配方

2 结果与分析

2.1 提取方法与灵芝提取液活性成分的关系

试验结果（表2）显示：提取液中的蛋白质、多糖和三萜含量4种提取方法间均存在极显著差异，其中以处理4各成分含量较高，而处理1含量较低。得出：3种活性成分提取量，醇提法（处理1）高于水提法（处理2），水提与醇提混合法（处理3与4）高于单纯的水提或醇提法，而先水提后醇提法（处理4）又高于先醇提后水提法（处理3）。

表2 不同提取方法对灵芝提取液活性成分的影响

注：不同小写字母表示差异达0.05显著水平，不同大写字母表示差异达0.01显著水平。

2.2 不同配方对茶质的影响

试验结果（表3）显示，灵芝茶5个配方，随着灵芝组分的减少，汤色由褐色变为微黄，香气由浓变淡，滋味由苦变甜，吸光值由大变小。综合考虑茶的指标标准、活性成分含量和口感等因素，以配方3为佳。

表3 不同配方灵芝茶的茶质及吸光值

注：吸光值代表活性成分的含量。

3 讨论与结论

灵芝多糖、蛋白、三萜类化合物是灵芝的主要活性物质，也是衡量灵芝质量的重要指标。不同提取方法对灵芝提取液的活性成分影响尚未见报道。由于蛋白质可分为水溶性、盐溶性、有机溶性等，因此，用两种溶剂提取的灵芝蛋白质的含量高于单一溶剂，本实验的结果与此一致。三萜类物质可分为水溶性（且更易溶于热水）和易溶于有机溶剂（如乙醇等）两种，所以用水和乙醇2种溶剂提取的灵芝三萜的含量也高于单一溶剂。

灵芝茶由于配方中的灵芝、罗汉果、砂仁、山楂、陈皮等五种成分均为中性，因此，药用活性成分互不影响。同时这些成分具有促进消化吸收和保健的功效，其中砂仁化湿开胃、温脾止泻、理气安胎，山楂消积化滞、收敛止痢、活血化淤，陈皮理气和中、燥湿化痰、利水通便，罗汉果清热润肺、止咳利咽、滑肠通便。光泽、汤色、香气、滋味等是鉴别茶优劣的主要感观指标；而在滋味指标中，综合灵芝的特性、人们的生活习惯和药用成分的含量等，以微苦为佳。

[1] YUE Qing-Xi, GUAN Shu-hong, et al. Interaction of Ganoderma triterpenes with docetaxel and cisplatin in cytotoxicity against human carcinoma cells [J]. Chinese Journal of Natural Medicines, 2008, 6 (5): 367-371.

[2] Saltarelli R. Food Chemistry [J]. Contents lists available at Science Direct Food Chemistry, 2009 (2):143-151.

[3] 刘存芳. 灵芝营养成分综述[J]. 南江科技, 2008 (5)：122-129.

[4] RussellR R. Paterson M. Ganoderma A therapeutic fungal biofactory [J]. Phytochermistry, 2006 (4): 1985-2001.

[5] 袁学军, 陈永敢, 陈光宙, 等. 不同栽培方式对灵芝活性成分的影响[J]. 中国食用菌，2012，31(5)：18-19.

[6] 袁学军, 陈忠荫, 陈光宙, 等. 不同部位和颗粒大小对灵芝茶药用成分的影响[J]. 中国食用菌，2013，32(3)：54-55.

[7] 袁学军, 陈忠荫，陈光宙, 等. 不同干燥方式和洗涤时间对灵芝茶活性成分的影响[J]. 中国食用菌, 2013, 32(4)：38-40.

三亚市试制项目（2013KS13），三亚重点实验室项目（L1210）

袁学军（1967-），男，琼州学院，副教授，主要从事菌物学、组织培养和遗传转化的工作。E-mail: yuanxuej@163.com。

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2095-0934（2014）04-220-02