硫化氢通过PI3K／AKT-NF-κB通路调节重症急性胰腺炎

饶春燕，胡昌伦，付兰英，赵晓晏△

（1.第三军医大学新桥医院消化内科，重庆400037；2.武警重庆总队医院内分泌科，重庆400061；3.重庆市中医院脾胃科400021）

重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）是伴随着胰周或全身性炎症，并可发展为多器官功能障碍综合征（multiorgan dysfunction syndrome，MODS）的胰腺炎症过程，病死率高达20%～60%［1］。其发病机制复杂，胰酶、氧化损伤、炎症介质等均参与其中。目前认为SAP 发生时各种促炎细胞因子是导致全身炎症反应综合征（systemic inflammation response syndrome，SIRS）发生的关键因素，而SIRS 是造成MODS 的重要原因。如何才能有效调节细胞因子的产生和相互作用，阻断SIRS 和MODS 的发生，对于防止急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）发展为SAP 具有重要的意义。

硫化氢（hydrogen sulfide，H2S）被认为是继CO、NO后的第3 种新型气体分子，H2S 主要以L-半胱氨酸为底物通过激活5′-磷酸吡哆醛依赖性酶：胱硫醚-γ裂解酶（cystathionineγlyase，CSE，EC 4.4.1.1）和胱硫醚-β合成酶（cystathionineβsynthase，CBS，EC 4.2.1.22）而生成［2］；同时，还可以以α酮戊二酸为底物通过3-巯基丙酮酸盐硫转移酶（3-Mercaptopyruvate sulfurtransferase，3MTS）而产生［3］。H2S 在体内可能有2种存在形式：1／3以气体H2S 形式存 在，2／3以Na HS（HS-）形式存在。大多数CBS 存在于中枢神经系统中，而外周组织中CSE 活性较高。已有大量研究证实H2S 调节血管、胃肠道、心肌收缩，神经传递和胰岛素分泌［4-5］等方面起着重要的作用。近年来，学者们也开始通过多种不同的炎症模型来研究H2S在炎症过程中的意义，但结果不一。

1 材料与方法

1.1 材料 96 只6 周龄SPF 级SD雄性大鼠购自第三军医大学大坪医院野战外科研究所实验动物中心，体质量202～243 g。左旋精氨酸（中国上海生物有限公司），wortmannin（以下简写W）、考马斯亮蓝G-250、溴酚蓝（美国Sigma 公司），髓过氧化物酶测试盒（中国南京建成生物有限公司），IL-6 ELISA试剂盒（美国R＆D公司），兔抗大鼠p-AKT单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG（美国Santa 公司），兔抗大鼠IκBα单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG（英国Abcam公司），小鼠抗大鼠GAPDH单克隆抗体、辣根标记的山羊抗小鼠IgG为美国Pr oMab 公司产品，BCA蛋白浓度检测试剂盒、EMSA检测试剂盒（美国Pierce 公司），甲基磺酰氟（PMSF）（美国Sigma 公司），核蛋白提取试剂盒（中国南京凯基生物科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 大鼠模型构建及分组 构建模型前用普通饲料适应性喂养SD大鼠5 d，术前12 h禁食不禁水。大鼠分为对照组（n＝6）、SAP组（n＝10）、PAG＋SAP组（n＝10）、5 mg／kg Na HS＋SAP 组（n＝10）、10 mg／kg Na HS＋SAP组（n＝10）、20 mg／kg Na HS＋SAP组（n＝10）、100 mg／kg Na HS＋SAP组（n＝10）、W＋SAP组（n＝10）、5 mg／kg Na HS＋W＋SAP组（n＝10）和100 mg／kg Na HS＋W＋SAP组（n＝10）。参照赖铭裕等［6］的方法建立SAP 模型。SAP 组及干预组均采用经腹腔注射6%左旋精氨酸溶液诱导模型；PAG组建模前1 h 经腹腔注射PAG 50 mg／kg；各Na HS 组建模前1h 经腹腔分别注射Na HS 5、10、20、100 mg／kg［7］；各 组 注 射 左 旋 精 氨 酸 前0.5 h 大鼠腹腔注射1.4 mg／kg［8］。对照组以生理盐水代替左旋精氨酸。各组大鼠注射后禁食，自由饮水。

1.2.2 标本采集及处理 建模24 h 后，用2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠，抽右心血离心后检测IL-6；钝性分离胰腺后立即冻存于液氮内，以备胰腺髓过氧化物酶（myeloperoxidas，MPO）活性、胰腺磷酸化丝／苏氨酸蛋白激酶（p-AKT）、核因子抑制蛋白-κB（IκBα）表达水平和核转录因子-κB（NF-κB）活性检测。

1.2.3 ELISA法测定血浆I L-6按照试剂盒说明书检测血浆IL-6 水平。

1.2.4 胰腺组织M P O活性检测 将液氮冻存胰腺组织剪成小块，称质量，加入9倍质量的生理盐水于Dounce 匀浆机匀浆，制成10%胰腺组织匀浆，按照MPO检测试剂盒说明书步骤检测MPO活性。

1.2.5 Western blot 法检测胰腺组织p-AKT、IκBα表达水平 胰腺组织加入RIPA缓冲液和PMSF后组织匀浆，12000 r／min 离心10 min，取上清液，BCA蛋白浓度检测试剂盒测定总蛋白量。每孔加样20μg 蛋白，加入等量上样缓冲液，混匀，煮沸3 min 使蛋白变性，上样于12%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳，电泳完毕后，电转法将蛋白转移至聚偏氟乙烯（PVDF）膜，并用新鲜配制的含3% 脱脂奶粉的PBS 液封闭过夜，然后加入p-AKT单克隆抗体（1∶300），IκBα单克隆抗体（1∶500）及抗GAPDH抗体（1∶8000），4℃过夜。将膜取出后用PBS 冲洗3 次，加入辣根过氧化物酶标记的二抗孵育，最后用化学发光法显影，凝胶成像仪扫描图像。

1.2.6 EMSA法检测胰腺组织NF-κB 活性 按核蛋白 提 取试剂盒说明书提取胰腺核蛋白。采用生物素3′末端标记法将选取核苷酸序列为5′-TCA ACT CCC CTG AAA GGG TCC G-3′，3′-AGT TGA GGG GAC TTT CCC AGG C-5′（湖南远泰生物有限公司合成）。将8μg 核蛋白与20 fm生物素标记的探针充分结合，上样于5%PAGE电泳后，转移至带正电荷的尼龙膜上，紫外线交联15 min，封闭15 min 后与结合液孵育，用化学发光法显影，凝胶成像仪扫描图像。

1.3 统计学处理 采用SPSS13.0 统计软件进行数据分析，计量资料以±s表示，进行单因素方差分析和LSD-q 检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组大鼠血浆IL-6 水平 SAP 组和PAG＋SAP 组血浆IL-6 水平较对照组明显升高（P＜0.05），且PAG＋SAP组高于SAP 组（P＜0.05）；不同剂量NaHS＋SAP组血浆IL-6 水平随着Na HS 浓度升高逐渐降低，其中5 mg／kg Na HS＋SAP组与SAP 组差异无统计学意义（P＞0.05），10 mg／kg Na HS＋SAP、20 mg／kg Na HS＋SAP、100 mg／kg Na HS＋SAP 组均低于SAP 组（P＜0.05），但仍高于对照组（P＜0.05）；给予W后，W＋SAP 组较SAP组大鼠血浆I L-6水平明显降低（P＜0.05）；5 mg／kg Na HS＋W＋SAP 组与5 mg／kg Na HS＋SAP组相比，血浆IL-6 水平明显降低（P＜0.05），100 mg／kg Na HS＋W＋SAP 组较100mg／kg NaHS＋SAP 组血浆IL-6 水平也有明显下降（P＜0.05），见图1A、表1。

2.2 各组大鼠胰腺MPO活性 S A P组和P AG＋S A P组胰腺MPO活性较对照组明显升高（P＜0.05），且PAG＋SAP 组高于SAP 组（P＜0.05）；不同剂量NaHS 组胰腺MPO活性随着Na HS 浓度升高逐渐降低，其中5mg／kg NaHS＋SAP 组与SAP 组差异 无统计学意 义（P＞0.05），10 mg／kg Na HS＋SAP、20 mg／kg Na HS＋SAP、100 mg／kg Na HS＋SAP 组均低于ANP 组（P＜0.05），但仍高于对照组（P＜0.05）；与SAP 组比较，W＋SAP 组大鼠胰腺MPO活性明显降低（P＜0.05）；与5 mg／kg Na HS＋SAP 组和100 mg／kg Na HS＋SAP组比较，给予W后胰腺MPO活性均有明显降低（P＜0.05），见图1A，表1。

2.3 大鼠胰腺p-AKT蛋白表达 与对照组（55.741±0.786）比较，SAP 组（154.230±1.719）和PAG＋SAP组（181.950±2.372）p-AKT表达明显增强（P＜0.05），且后者较前者更高（P＜0.05）；给予不同剂量Na HS 后，p-AKT表达逐渐减弱强，且各组均低于对照组（P＜0.05），高于SAP组（P＜0.05）；给予W后，W＋SAP组（121.543±1.198）、5 mg／kg Na HS＋W＋SAP 组（94.587±0.921）及100mg／kg NaHS＋W＋SAP 组（60.149±0.812）分别与SAP组（154.230±1.719）、5 mg／kg Na HS ＋SAP组（129.710±1.241）和100 mg／kg Na HS ＋SAP 组（67.149±0.767）比较，p-AKT蛋白表达均有明显减弱（P＜0.05），见图2A。

图1 各组大鼠血浆IL-6 水平和MPO活性分析图

表1 各组大鼠血浆IL-6 水平、胰腺MPO活性（±s）

表1 各组大鼠血浆IL-6 水平、胰腺MPO活性（±s）

组别 IL-6（ng／L） 胰腺MPO（U／L）12.45±0.600.28±0.02 SAP 组 176.76±9.301.78±0.07 PAG＋SAP 组 212.66±10.202.10±0.125 mg／kg Na HS＋SAP 组 166.16±9.501.70±0.0810 mg／kg Na HS＋SAP 组 145.72±8.701.58±0.0920 mg／kg Na HS＋SAP 组 103.32±6.901.36±0.08100 mg／kg Na HS＋SAP 组 145.72±8.701.58±0.09 W＋SAP 组 141.36±6.91.41±0.075 mg／kg Na HS＋W＋SAP 组 130.88±4.201.32±0.05100 mg／kg Na HS＋W＋SAP 组对照组75.10±2.801.11±0.03

2.4 各组大鼠胰腺IκBα蛋白表达与对照组（195.350±2.320）比较，SAP组（90.671±1.217）和PAG＋SAP组（63.065±0.679）IκBα表达明显减弱（P＜0.05），且后者较前者更低（P＜0.05）；给予不同剂量Na HS 后，IκBα表达逐渐增强，且各组均低于对照组（P＜0.05），高于SAP 组（P＜0.05）；给予W后，W＋SAP组（115.900±1.314）、5 mg／kg Na HS＋W＋SAP 组（158.710±1.697）及100 mg／kg Na HS＋W＋SAP组（174.950±1.879）分 别 与SAP组（90.671±1.217）、5 mg／kg Na HS＋SAP组（146.000±1.676）和100 mg／kg Na HS＋SAP 组（161.460±1.743）相比，IκBα蛋白表达均有明显减弱（P＜0.05），见图2B。

图2 各组大鼠胰腺p-AKT、IκBα蛋白表达及灰度比、NF-κB 活性

2.5 各组大鼠胰 腺NF-κB活性 与 对照组相比，SAP组 和PAG＋SAP 组NF-κB 活性明显增强，给予NaHS 后，NF-κB 活性逐渐减弱；给予W后，W＋SAP组、5 mg／kg Na HS＋W＋SAP 组及100 mg／kg Na HS＋W＋SAP组 分别与SAP组、5 mg／kg Na HS＋SAP组 和100 mg／kg NaHS＋SAP组 比 较，NF-κB 活性均有不同程度减弱，图2C。

3 讨 论

近来有研究显示，H2S 通过介导AKT激活从而提高心动指数和减少心肌梗死面积，同时使用LY294002 抑制AKT则会消除H2S 产生的这种心脏保护作用［9］。Ramasamy 等［10］也认为H2S 在雨蛙肽处理的胰腺腺泡细胞中通过PI3K／AKT通路起着抑制TNF-α、IL-1β等炎症因子的产生，并且该作用不会引起p38、Jun、MAPK 磷酸化。这与本实验结果相符，认为H2S可以通过PI3K／AKT 通路在炎性反应中起到抑制作用。

NF-κB 是一种广泛存在与细胞中易被诱导的核转录因子，它是参与调节细胞生长、免疫应答、炎性反应和凋亡等信号通路的关键 细 胞 因 子［11］。PI3K／AKT是调节NF-κB及 下 游 依赖基因表达的重要介质，而大量研究证实AP的发生、发展有赖于NF-κB 转录，它在调节炎症介质及基因表达中起着重要作用［12-13］。更有研究证实，人单核细胞中，NF-κB 转录是外源性H2S 导致细胞因子表达的核心部分［14］。本研究发现H2S在SAP 大鼠模型中的调节作用与抑制IκBα降解，并下调NFκB 及转录相关的促炎基因表达有关；并且，给予PI3K抑制剂W后，NF-κB 进一步下降，血浆IL-6 水平及胰腺MPO活性也明显降低。TNF-α处理的人脐静脉内皮细胞［15］、LPS 处理的星状细胞［16］等体外细胞培养中，Na HS 可以通过抑制IκBα降解和NF-κB 核转位而产生保护性作用。在静脉注射Na HS 能够抑制NO和超氧化物的产生，从而在失血性休克复苏再灌注早期时维持平均动脉压，下调NF-κB 活性剂iNOS 和ICAM-1水平［17］。

AKT是PI 3K调节的主要效应因子，它的激活有赖于依赖磷酸肌醇的激酶（PDK-1）使Thr308和Ser473发生磷酸化［17］。一但AKT被激活，即可产生广泛的作用调节细胞存活、增殖和生长［17］。虽然AKT不是由PI 3K直接激活磷酸化的，但是其下游调控的信号转导是严格按照PI3K的活性来调节的。H2S 能使培养的内皮 细胞［18］、结肠 癌 细 胞［19］、雨 蛙 肽处理的胰腺腺泡细胞［10］及大鼠下肢缺血肌肉［20］中的AKT活化，并且在局部缺血心肌组织中给予少量Na HS即可引起AKT活化，从而减轻心肌损伤［21］。本实验也认为外源性H2S（Na HS）能够通过AKT作用于炎症因子，但不同的是，本实验中H2S 是通过抑制AKT磷酸化，从而下调炎症因子的表达。之前的研究认为激活PI3K／AKT通路能产生抗炎作用，这正与作者的观点一致［22-23］。在本实验先给予外源性H2S，0.5 h后再给予W，二者起到了加强的作用，说明H2S可能是通过PI3K下游的某因子来调节AKT活性的，但是其具体机制还需要进一步研究证实。

迄今为止，不少学者通过局部水肿、胰腺炎、败血症等多种动物模型和细胞培养研究认为H2S 在体内具有促炎作用。外源性H2S（Na HS 或Na2S）能使血浆、组织中炎症因子和趋化因子表达增加，而给予PAG后能逆转H2S 的促炎作用［24-28］。H2S 的促炎作用可以通过pSFKs-NF-κB［26］及ERK-NF-κB通路［29］调节炎性反应。在动物模型中，Na HS作用于IFN-γ处理的人单核细胞系U937 后也能通过激活活化NF-κBp 65 上调炎症因子［30］。但是在本实验中，给予Na HS后，能够降低ANP 时血浆IL-6 水平，胰腺MPO活性。证明H2S 在大鼠精氨酸诱导的ANP模型中产生抗炎作用。研究发现治疗性给予H2S 能通过抑制促炎因子IL-6 产生，增加抗炎因子IL-10水平，改善肺组织蛋白质氧化作用，从而减轻急性吸入性肺损伤程度［31］。上述研究充分显示出H2S 在多种炎症过程中能发挥一定的抗炎作用，与本实验结果相符。

本实验中不仅发现H2S 对SAP 有一定的抗炎作用，而且认为抗炎作用在Na HS 50～100 mg／kg 范围内会随着H2S 浓度的升高而逐渐增强，但不知道H2S 的作用是否会随着浓度的升高不断加强。然而，Sidhapuriwala 等［32］通过雨蛙肽诱导的AP 模型发现，给予10mg／kg NaHS 能降低血淀粉酶水平、胰腺及肺组织MPO活性及血浆中炎症趋化因子（CCL2、CCL3、CXCL1）和黏附分子（E选择素、P选择素、ICAM-1、VCAM-1）表达，而给予5 mg／kg Na HS 不会对胰腺及肺损伤产生明显的作用，同时，15 mg／kg Na HS 并不会使NaHS 的抗炎作用增强。预先给予胰腺腺泡细胞5μmol／L Na HS 后再用雨蛙肽处理，研究者发现IκBα降解减少，NF-κB活性降低，炎症因子减少；而给予10μmol／L和20μmol／L Na HS 时，该作用并未得到加强，甚至未见Na HS 产生明显的作用［10］。吸入1 ppmol 或5ppmol H2S 并不会减轻呼吸机肺损伤，但是吸入60 ppmol H2S 时却能加速呼吸机肺损伤的炎性反应［33］。甚至，在缺血再灌注模型中，给予不同剂量、不同浓度的Na HS，其对模型作用会出现剂量依赖性的U型改变［34-35］。之所以会出现这种情况，可能与H2S 直接释放的多少有关系。但具体机制如何，仍有待进一步研究。

本研究认为内源性H2S 的减少参与了SAP的病理生理过程；给予一定量的外源性H2S（Na HS）可通过抑制AKT磷酸化，进而使IκBα降解减少，NF-κB 转录活性降低，使血浆IL-6 水平下调，胰腺损伤程度减轻，对ANP 炎性反应有一定的抑制作用；并且在一定范围内，H2S 抑制SAP 炎症反应的作用随着其浓度的升高而逐渐增强。虽然目前的研究尚不能对H2S在炎症过程中的作用定论，但是这已经充分显示出H2S 的重要作用，也为今后治疗SAP 提供了一条新的思路。

［1］ Al Mofleh IA.Severe acute pancreatitis：Pathogenetic aspects and prognostic factors［J］.World J Gastroenterol，2008，14（5）：675-684.

［2］ Moore PK，Bhatia M，Moochhala S.Hydrogen sulfide：from the smell of the past to the mediator of the future？［J］.Trends Pharmacol Sci，2003，24（12）：609-611.

［3］ Shibuya N，Tanaka M，Yoshida M，et al.3-Mercaptopyruvate sulfurtransferase produces Hydrogen sulfide and bound sulfane Sulfur in the brain［J］.Antioxid Redox Signal，2009，11（4）：703-714.

［4］ Bhatia M.Hydrogen sulfide as a vasodilator［J］.IUBMB Life，2005，57（9）：603-606.

［5］ 张宁，王于理，郑勇，等.内源性硫化氢在不同时期大鼠肝硬化中的作用［J］.世界华人消化杂志，2009，17（3）：307-311.

［6］ 赖铭裕，梁志海，唐国都，等.腹腔注射左旋精氨酸诱导急性坏死性胰腺炎大鼠模型［J］.世界华人消化杂志，2006，14（22）：2233-2236.

［7］ Sidhapuriwala JN，Ng SW，Bhatia M.Effects of hydrogen sulfide on inflammation in caerulein-induced acute pancreatitis［J］.J Inflamm（Lond），2009，6：35.

［8］ Singh VP，Saluja AK，Bhagat L，et al.Phosphatidylinositol 3-kinase-dependent activation of trypsinogen modulates the severity of acute pancreatitis［J］.J Clin Invest，2001，108（9）：1387-1395.

［9］ Yong QC，Lee SW，Foo CS，et al.Endogenous Hydrogen sulphide mediates the cardioprotection induced by ische-mic postconditioning［J］.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2008，295（3）：H1330-H1340.

［10］ Ramasamy T，Jia S，Yung-Hua K，et al.Effect of Hydrogen sulfide on the phosphatidylinositol 3-kinase-protein kinase B pathway and on caerulein-induced cytokine production in isolated mouse pancreatic acinar cells［J］.J Pharmacol Exp Ther，2009，329（3）：1166-1177.

［11］ Hayden MS，Ghosh S.Shared principles in NF-kappaB signaling［J］.Cell，2008，132（3）：344-362.

［12］ Lee M，Schwab C，Yu S，et al.Astrocytes produce the antiinflammatory and neuroprotective agent Hydrogen sulfide［J］.Neurobiol Aging，2009，30（10）：1523-1534.

［13］ Ganster F，Burban M，De La Bourdonnaye M，et al.Effects of Hydrogen sulfide on hemodynamics，inflammatory response and oxidative stress during resuscitated hemorrhagic shock in rats［J］.Crit Care，2010，14（5）：R165.

［14］ Cai WJ，Wang MJ，Moore PK，et al.The novel proangiogenic effect of Hydrogen sulfide is dependent on Akt phosphorylation［J］.Cardiovasc Res，2007，76（1）：29-40.

［15］ Cai WJ，Wang MJ，Ju LH，et al.Hydrogen sulfide induces human colon cancer cell proliferation：role of Akt，ERK and p21［J］.Cell Biol Int，2010，34（6）：565-572.

［16］ Wang MJ，Cai WJ，Li N，et al.The Hydrogen sulfide donor Na HS promotes angiogenesis in a rat model of hind limb ischemia［J］.Antioxid Redox Signal，2010，12（9）：1065-1077.

［17］ Yong QC，Lee SW，Foo CS，et al.Endogenous Hydrogen sulphide mediates the cardioprotection induced by ischemic postconditioning［J］.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2008，295（3）：H1330-1340.

［18］ Luyendyk JP，Schabbauer GA，Tencati MA，et al.Genetic analysis of the role of the PI3K-Akt pathway in lipopolysaccharide-induced cytokine and tissue factor gene expression in monocytes／macrophages［J］.J Immunol，2008，180（6）：4218-4226.

［19］ Tarassishin L，Suh HS，Lee SC.Interferon regulatory factor 3 plays an anti-inflammatory role in microglia by activating the PI3K／Akt pathway［J］.J Neuroinflammation，2011，8（1）：187.

［20］ Ramasamy Tamizhselvi PK，Bhatia M.Inhibition of Hydrogen sulfide synthesis attenuates chemokine production and protects mice against acute pancreatitis and associated lung injury［J］.Pancreas，2008，36（4）：e24-31.

［21］ Bhatia M，Sidhapuriwala JN，Ng SW，et al.Pro-inflammatory effects of Hydrogen sulphide on substance P in caerulein-induced acute pancreatitis［J］.J Cell Mol Med，2008，12（2）：580-590.

［22］ Tamizhselvi R，Koh YH，Sun J，et al.Hydrogen sulfide induces ICAM-1 expression and neutrophil adhesion to caerulein-treated pancreatic acinar cells through NF-kappa B and Src-family kinases pathway［J］.Exp Cell Res，2010，316（9）：1625-1636.

［23］ Zhang H，Zhi L，Moochhala S，et al.Hydrogen sulfide acts as an inflammatory mediator in cecal ligation and puncture-induced sepsis in mice by upregulating the production of cytokines and chemokines via NF-kappaB［J］.Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol，2007，292（4）：L960-L971.

［24］ Zhang H，Zhi L，Moochhala SM，et al.Endogenous Hydrogen sulfide regulates leukocyte trafficking in cecal ligation and puncture-induced sepsis［J］.J Leukoc Biol，2007，82（4）：894-905.

［25］ Zhang H，Moochhala SM，Bhatia M.Endogenous Hydrogen sulfide regulates inflammatory response by activating the ERK pathway in polymicrobial sepsis［J］.J Immunol，2008，181（6）：4320-4331.

［26］ Zhi L，Ang AD，Zhang H，et al.Hydrogen sulfide induces the synthesis of proinflammatory cytokines in human monocyte cell line U937 via ERK-NF-κB pathway［J］.J Leuk Biol，2007，81（5）：1322-1332.

［27］ Esechie A，Kiss L，Olah G，et al.Protective effect of Hydrogen sulfide in a murine model of acute lung injury induced by combined burn and smoke inhalation［J］.Clin Sci，2008，115（3）：91-97.

［28］ Kang K，Zhao MY，Jiang HC，et al.Role of Hydrogen sulfide in hepatic Ischemia-Reperfusion-Induced injury in rats［J］.Liver Transpl，2009，15（10）：1306-1314.

［29］ Li L，Rossoni G，Sparatore A，et al.Anti-inflammatory and gastrointestinal effects of a novel diclofenac derivative［J］.Free Radic Biol Med，2007，42（5）：706-719.

［30］ Whiteman M，Li L，Rose P，et al.The effect of Hydrogen sulfide donors on lipopolysaccharide-induced formation of inflammatory mediators in macrophages［J］.Antioxid Redox Signal，2010，12（10）：1147-1154.

［31］ Fiorucci S，Orlandi S，Mencarelli A，et al.Enhanced activity of a Hydrogen sulphide-releasing derivative of mesalamine（ATB-429）in a mouse model of colitis［J］.Br J Pharmacol，2007，150（8）：996-1002.

［32］ Sidhapuriwala JN，Ng SW，Bhatia M.Effects of hydrogen sulfide on inflammation in caerulein-induced acute pancreatitis［J］.J Inflamm（Lond），2009，6：35.

［33］ Francis RC，Vaporidi K，Bloch KD，et al.Protective and detrimental effects of Sodium sulfide and Hydrogen sulfide in murine ventilator-induced lung injury［J］.Anesthesiology，2011，115（5）：1012-1021.

［34］ Elrod JW，Calvert JW，Morrison J，et al.Hydrogen sulfide attenuates myocardial ischemia-reperfusion injury by preservation of mitochondrial function［J］.Proc Natl Acad Sci U S A，2007，104（39）：15560-15565.

［35］ Ji Y，Pang QF，Xu G，et al.Exogenous Hydrogen sulfide postconditioning protects isolated rat hearts against ischemia-reperfusion injury［J］.Eur J Pharmacol，2008，587（1／3）：1-7.