黄酮类化合物的含量测定方法

吴婷妮

安徽医科大学药学院，安徽合肥 230032

黄酮类化合物是广泛分布于自然界中的一类化合物，生活中常见的食品茶叶、豆类、蔬菜、蜂蜜等都含有大量的黄酮类化合物。黄酮类化合物具有C6-C3-C6 的基本骨架，是许多植物成分的活性化合物，具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤等药理作用。该文综述了近年黄酮类化合物分析中主要应用的方法，为广大同行提供一些参考。

1 分光光度法

分光光度法主要适用于总黄酮的测定，具有操作简便、快速、准确度及精密度较好的特点。目前黄酮类化合物测定法有直接测定法和比色法。直接测定法直接以黄酮类化合物为对照物测定样品中的此成分的含量，比色法是将化合物加入显色剂后测定吸光度再进行换算测定，其中常用的显色剂有Al (NO3)3和AlCl3。直接测定法和比色法的选择要综合考虑，样品中成分是否会与显色剂发生沉淀反应、 样品成分的复杂性等都会影响结果的准确性，在NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 体系中, 碱性条件经常会影响结果的准确性和稳定性, 只有物质中含有邻二酚羟基, 并且邻二酚羟基的邻位没有取代时, Al(NO3)3比色法才在510 nm 左右有最大吸收[1]。

王东升等[2]、李春红等[3]采用紫外分光光度法分别测定了淫羊藿、黄芪中总黄酮的含量。吕凛等[4]比较了直接测定法和NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 显色法测定桔皮中总黄酮含量，结果表明显色法检测，会出现浑浊现象；直接法检测，操作简便，结果准确，重现性好。时维静等[5]研究直接测定法和NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 法测定中药复方总黄酮含量，结果表明NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 法测定中药复方总黄酮含量稳定可靠，快速准确。徐灵源等[6]采用AlCl3-HAc-NaAc(pH 5.5)为显色剂，建立一种青天葵药材中总黄酮检测的方法，并考察14 批青天葵药材中总黄酮的含量。

2 薄层色谱法（TLC）

薄层色谱法是一种进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法，薄层色谱法主要用于黄酮类化合物的定性和半定量分析，可同时测定多个样品，跟高效液相色谱法相比，薄层色谱法仪器设备简单，操作方便，但由于其影响因素较多，灵敏度和精确度方面不如高效液相色谱法。

陈乃东等[7]采用薄层色谱法检测酸水解过的蕨菜黄酮苷元的组成，发现其主要成分为山奈酚。徐颖等[8]建立一种薄层色谱分离鉴定、定量异黄酮的方法，结果表明，薄层色谱法具有操作简便，取样量少，检出灵敏度高等优点。刘德胜等[9]采用薄层色谱法定性检测了落地生根药材水解液中的槲皮素和山奈酚，实验同时建立了紫外分光光度法测定水解液的总黄酮含量和高效液相色谱法测定水解液中槲皮素、山奈酚的含量，这些定性定量方法简便、灵敏，可作为落地生根药材的质量控制方法。

3 高效液相色谱法（HPLC）

高效液相色谱法适用于极性大、沸点高、分子量大、热稳定性差的化合物分析，是黄酮类化合物分离检测中使用非常广泛的一种方法，具有效率高、灵敏度高、分离效率高等优点。高效液相色谱法采用液体为流动相，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。黄酮类化合物的分离中常用的色谱柱是C18 柱，对复杂化合物的分析经常采用梯度洗脱系统，实现高效率的分离，紫外检测器、 二极管阵列检测器是黄酮类化合物分析中最常用的检测器，具有灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，适用于梯度洗脱的特点。

Yang 等[10]采用C18 柱、梯度洗脱系统同时分离16 个酚类化合物，并将建立的分析方法成功应用于35 批鱼腥草样品。张群林等[11]采用ODS 色谱柱，高效液相色谱-二极管阵列检测器法同时测定了罗布麻叶中的6 种黄酮类化合物的含量。章弘扬等[12]采用高效液相色谱-质谱法 鉴定了山楂中的绿原酸、原花青素B2、表儿茶素、金丝桃苷、异槲皮苷，采用反相色谱-二极管阵列检测法同时定量测定了其含量。杨必成等[13]采用C18 色谱柱高效液相色谱-紫外分光光度法测定了油菜花粉的渗滤液中的槲皮素、山奈酚、异鼠李素的含量，为油菜花粉原料及其提取物的质量控制和评价提供了理论和数据支持。

4 毛细管电泳法（CE）

毛细管电泳是以毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力的微分离分析技术，有多种分离模式，毛细管区带电泳，胶束毛细管电泳，毛细管等速电泳，毛细管凝胶电泳等。黄酮类化合物分离中经常应用毛细管区带电泳和胶束毛细管电泳。分离中常用的缓冲溶液是硼砂，常用的缓冲体系有硼砂-氢氧化钠，硼砂-磷酸二氢钠，硼砂-硼酸体系，少量报道也采用过中性磷酸盐的体系。在碱性条件下，黄酮类化合物中的顺式二羟基与硼酸形成带负电荷的硼酸类配合物，在电场作用下发生移动。

海平等[14]采用0.25 mol/L 硼砂30%乙腈缓冲溶液分离了三种黄酮，用建立的方法比较了不同产地多叶棘豆中的此类化合物的含量。吴婷妮等[15]对电泳缓冲液的pH、浓度等条件进行优化，建立测定野菊花中的9 种黄酮类化合物的方法。Shi 等[16]采用胶束毛细管电泳法测定了枳壳槐花中染料木苷、 染料木素、 山奈酚、槲皮素和芦丁的含量。叶静等[17]采用胶束毛细管电泳法测定豆粕及发酵豆粕中大豆异黄酮含量,缓冲液是15 mmol/L 十二烷基硫酸钠、5%甲醇的10 mmol/L 硼砂溶液( pH 9.4)。周逸芝等[18]采用胶束毛细管电泳测定龙柴方及其组方药材黄芩中4 种黄酮的含量，缓冲液是40 mmol/L 磷酸氢二钠-15 mmol/L 硼砂-40 mmol/L十二烷基硫酸钠-15%乙腈-7.5%丙醇(pH 8.6)。

毛细管电泳法和高效液相色谱法均适用于单体黄酮类成分的分析，与高效液相色谱法相比，毛细管电泳法具有样品预处理简单、分析更快速的优点，但在分析的准确度和灵敏度方便较高效液相色谱法稍差，也是目前黄酮类化合物分析中应用非常广泛的一种方法。

5 其他方法

陈墨等[19]采用差分脉冲伏安法同时测定а-山竹黄酮和γ-山竹黄酮，研究了pH 和静置时间等因素对黄酮分离的影响。邹节明等[20]研究了舒血宁片中总黄酮的共振散射光谱分析方法，结果表明该方法简便灵敏。孙仕萍等[21]采用单扫示波极谱法测定了保健食品中总黄酮的含量。黄倩倩等[22]采用近红外漫反射光谱法测定黄芩中总黄酮及黄芩苷的含量，胡钢亮等[23]采用近红外漫反射光谱法直接测定银杏叶提取物粉末中总黄酮的含量。

6 结语

黄酮类化合物是药理活性非常广泛的一类化合物，人体的黄酮类化合物均从食物获得，研究食物和人体液中黄酮类化合物的含量测定方法非常重要，如何快速、准确、简单、经济的测定黄酮类化合物的含量成为分析工作者的重要任务。鉴于目前的发展现状，改善仪器的检测灵敏度和准确性方面值得更进一步的研究。

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