放化疗对IRM—2小鼠不同肿瘤模型治疗作用的研究

王忻妍等

[摘要] 目的 观察IRM-2小鼠的肿瘤易感性，探讨放化疗对IRM-2小鼠不同肿瘤模型的抑制作用。 方法 利用120只IRM-2近交系小鼠，分别接种肺腺癌（LA795）、宫颈癌（U14）、黑色素瘤（B16）、肝癌（HepA）细胞，造模24 h后，将荷瘤鼠随机分为对照组、照射组、环磷酰胺组，每组各10只。照射组于第4天开始进行1 Gy全身照射，每日1次，连续5 d，共照射5次。环磷酰胺组（25 mg/kg）腹腔注射隔日1次，0.2 mL/只，共4次。对照组注射相同体积生理盐水。小鼠于第12天处死，解剖瘤块、胸腺和脾脏称重，骨髓有核细胞计数，计算抑瘤率、胸腺及脾重指数。 结果 ①IRM-2小鼠皮下移植4种肿瘤的成瘤率均为100%。②环磷酰胺组、照射组LA795的抑瘤率分别为（31.8±27.3）%、（68.2±18.2）%，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。环磷酰胺组、照射组瘤重[（0.07±0.04）、（0.15±0.06）g]均低于对照组[（0.22±0.15）g]，差异有统计学意义（P < 0.05）；环磷酰胺组瘤重低于照射组，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。③环磷酰胺组、照射组U14的抑瘤率分别为（37.3±3.5）%、（70.8±8.2）%，差异有统计学意义（P < 0.05）。环磷酰胺组瘤重[（0.50±0.14）g]低于对照组[（1.71±0.60）g]及照射组[（1.14±0.06）g]，差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。④环磷酰胺组、照射组对黑色素瘤B16的抑瘤率分别为（17.7±15.8）%、（63.6±15.9）%，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。环磷酰胺组脾重指数、瘤重与对照组比较差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）；环磷酰胺组瘤重[（0.72±0.31）g]低于照射组[（1.63±0.51）g]，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。⑤环磷酰胺组、照射组对肝癌HepA的抑瘤率分别为（31.5±21.7）%、（69.6±25.0）%，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。环磷酰胺组、照射组瘤重[（0.28±0.23）、（0.63±0.20）g]均低于对照组[（0.92±0.16）g]，差异均有高度统计学意义（P < 0.01）；环磷酰胺组瘤重低于照射组，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。 结论 IRM-2近交系小鼠对肺腺癌、宫颈癌、黑色素和肝癌均能有效接种，放疗对接种肿瘤有一定杀伤作用，环磷酰胺能有效抑制IRM-2小鼠肿瘤的生长，疗效更佳。

[关键词] 肿瘤；动物模型；放射疗法；化学药物疗法

[中图分类号] R730.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）01（a）-0007-04

近年来，恶性肿瘤发病率逐年上升，全国肿瘤病死率为180.54/10万，每年因癌症死亡病例达270万例，肿瘤成为当前研究热点[1]。肿瘤动物模型作为研究肿瘤必备的有效实验材料和工具。现根据不同研究目的已经建立了各种小鼠肿瘤模型，从而获得相关疾病的模型，但理想的肿瘤模型有待进一步开发。移植性小鼠肿瘤模型因其建模周期短、重复性好，动物模型生物特性稳定，成为国内外常用动物肿瘤模型建模方法之一[2-4]。IRM-2小鼠是中国医学科学院放射医学研究所自主培育的近交系小鼠[5-7]。本实验观察在IRM-2小鼠能否建立肿瘤发病率较高的肺腺癌、宫颈癌、黑色素、肝癌模型，并在建立不同小鼠肿瘤模型的基础上，比较放、化疗对不同荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用，为放、化疗对恶性肿瘤的治疗及其研究提供有实用意义的参考依据。

1 资料与方法

1.1 动物和细胞系

IRM-2近交系小鼠120只，由北京协和医学院放射医学研究所提供，合格证号SCXK（津）2005-0001；雌雄兼用，体重22～24 g。B16黑色素瘤细胞由中国医学科学院药物研究所提供，肺腺癌（LA795）、宫颈癌（U14）、肝癌（HepA）细胞由天津市药品检验所提供。

1.2 仪器

BX51，奥林巴斯显微镜（BX51日本），电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）。137Cs γ射线照射源，加拿大原子能有限公司，型号USD，Autocell40，照射剂量为1 Gy，剂量率分别为0.84 Gy/min。

1.3 试剂

环磷酰胺为上海华联制药有限公司产品（批号040805），生理盐水配制剂量为25 mg/kg。

1.4 肿瘤模型的建立

无菌条件下分别取出LA795、B16、U14、HepA瘤块，加磷酸盐缓冲液（PBS）制备细胞悬液，调整细胞数为1×107/mL，取0.2 mL接种于每只小鼠右侧腋窝下。

1.5 分组及处理

建模24 h后，将接种不同肿瘤细胞的荷瘤小鼠随机分为对照组、照射组、环磷酰胺组，每组各10只。环磷酰胺组隔日给药1次，0.2 mL/只，共4次，照射组于接种后第4天进行全身1 Gy照射，每日1次，连续5 d。对照组给予相同体积生理盐水注射。

1.6 检测指标

实验第12天，称重后处死小鼠，取瘤体称重，计算抑瘤率，抑瘤率（%）=（1-治疗组平均瘤质量/对照组平均瘤质量）×100%。取单侧股骨，用1 mL白细胞稀释液冲洗骨髓腔，制成悬液，全自动血液分析仪计数。取胸腺、脾脏称重，分别计算胸腺指数（mg/g）和脾重指数（mg/g）。

1.7 统计学方法

采用统计软件SPSS 11.5对数据进行分析，正态分布计量资料以均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 放化疗对LA795的抑瘤作用结果

环磷酰胺组、照射组LA795的抑瘤率分别为（31.8±27.3）%、（68.2±18.2）%，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。环磷酰胺组、照射组瘤重均低于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）；环磷酰胺组瘤重低于照射组，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。见表1。

2.2 放化疗对U14的抑瘤作用结果

环磷酰胺组、照射组U14的抑瘤率分别为（37.3±3.5）%、（70.8±8.2）%，差异有统计学意义（P < 0.05）。环磷酰胺组瘤重低于对照组及照射组，差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。见表2。

2.3 放化疗对黑色素瘤B16的抑瘤作用结果

环磷酰胺组、照射组对黑色素瘤B16的抑瘤率分别为（17.7±15.8）%、（63.64±15.90）%，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。环磷酰胺组脾重指数、瘤重与对照组比较差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）；环磷酰胺组瘤重低于照射组，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。见表3。

2.4 放化疗对肝癌HepA的抑瘤作用结果

环磷酰胺组、照射组对肝癌HepA的抑瘤率分别为（31.5±21.7）%、（69.6±25.0）%，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。环磷酰胺组、照射组瘤重均低于对照组，差异均有高度统计学意义（P < 0.01）；环磷酰胺组瘤重低于照射组，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。见表4。

3 讨论

移植性肿瘤模型是目前抗癌药物、药效学研究中使用最多的一类动物肿瘤模型。不同小鼠对不同肿瘤的易感性存在显著差异。目前肺腺癌、肝癌、宫颈癌等发病率较高，而恶性黑色素瘤是一类起源于神经嵴、由黑色母细胞转变而来、主要发生在皮肤的恶性肿瘤，发病率为全身恶性肿瘤的1%～2%[8-11]。本研究选用了较常用的自发型和移植型肿瘤，建立了肺腺癌（LA795）、宫颈癌（U14）、黑色素瘤（B16）、肝癌（HepA）肿瘤模型，成瘤率均为100%，与笔者前期的实验结果相符合。

由于鼠的品系和瘤源不同，对放、化疗的敏感性也存在差异，但均可用来验证放化疗的有效性。因此在成功建立了IRM-2 4种荷瘤小鼠后，观察放、化疗（环磷酰胺）对这4种肿瘤的治疗作用。治疗方案均模拟临床，放疗持续5次小剂量照射，而化疗使用环磷酰胺[2，12]。研究结果表现为放、化疗对4种肿瘤均有抑制作用，从结果可以看出，放疗对U14组抑瘤效果较好，抑瘤率为（37.3±3.5）%，对LA795、HepA、B16的抑瘤率分别为（31.8±27.3）%、（31.5±21.7）%、（17.7±15.8）%。环磷酰胺组对U14抑瘤效果最好，抑瘤率为（70.8±8.2）%，对LA795、B16、HepA的抑瘤率分别为（68.2±18.2）%、（63.6±15.9）%、（69.6±25.0）%，环磷酰胺抑瘤率要高于照射组抑瘤率，差异均有统计学意义（P < 0.05），放疗、化疗对U14的抑瘤率最高。放疗、化疗对B16的抑瘤率最低。因此，本研究所建立的IRM-2小鼠移植型肿瘤模型可以较好地反映放、化疗的治疗效果，并因为能够同时接种多种不同肿瘤，为评价同一治疗方法对不同类型肿瘤的疗效提供了新的模型。

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（收稿日期：2013-09-26 本文编辑：李继翔）