联合应用神经生长因子和神经节苷脂对坐骨神经损伤大鼠脊髓神经元的保护作用探讨

刘 坤 刘维婕 李 薇

大连大学附属中山医院，辽宁大连 116000

周围神经损伤是相应脊髓节段也可发生一过性或者永久性的损伤，且可导致脊髓前角运动神经发生凋亡等[1]。目前，神经生长因子（NGF）以及GM1 的研究较多[2]。研究建立坐骨神经损伤大鼠模型，单独或联合应用NGF 与GM1，并设置生理盐水对照组进行了对比分析，现总结报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 选择鼠龄为6 个月的SD 大鼠5只，雌雄不限，体质量在220～240g 之间，平均为（232.1±4.4）g。

1.1.2 试剂及仪器 GM1（香港精优企业有限公司）、NGF（Sigma 公司）、苏木素伊红(HE)染色试剂盒（上海圻明生物科技有限公司）、多导生理记录仪（Siemens AG）、JEM21200E 透射电子显微镜（日本电子光学公司）。

1.2 方法

1.2.1 分组及模型准备 50只SD 大鼠，随机分为A组（生理盐水NS组，14只）、B组（NGF，12只）、C组（GM1，12只）和D组（NGF+GM1，12只），各组的定点观察时相分别为伤后1周、4周及8周。大鼠均予以腹膜腔内注射2%的戊巴比妥钠进行麻醉，剂量为40mg/kg，并常规进行消毒铺单，于大鼠的右大腿外侧行1 个纵向切口，以显露其坐骨神经，找到梨状肌，于其下方5mm 部位切断坐骨神经，将远近神经段均纳入长度为10mm、内径为2.0mm的硅胶管之中，然后以9-0 显微缝线将神经外膜固定在硅胶管的管壁上，保持神经阻断端之间相距5mm。手术过程中经硅胶管滴加相应药物各1 次，手术后8周内于小腿予以腓肠肌注射1 次，用量视体重而定，B组为NGF 用量10ng/100g，C组为GM1 用量100μg/100g，D组 为NGF 用量5ng/100g，GM1 用 量50μg/100g，A组予以等量的生理盐水。

1.2.2 神经传导速度（NCV）的测定 各组分别于术后4周以及8周时选择双侧坐骨神经应用生理记录仪测定NCV，测定方法按照说明书操作。

1.2.3 脊髓前角运动神经元数测定 各组分别于术后1周、4周以及8周时选择L1-6 脊髓前角进行测定，常规进行固定、包埋以及切片，控制片厚为5μm。然后进行HE 染色，在各个标本中抽取中间部位切片5 张，以直径＞15μm 进行计数，最终结果取平均数。同时，密切观察并记录脊髓前角运动神经元数变化情况。

1.2.4 电镜观察 术后1、4周及8周时选择L4-6 脊髓，采用3%的戊二醛进行固定，并进行定向包埋，选择超薄切片此阿勇枸橼酸铅进行染色，然后采用电镜观察并记录其超微结构，比较各组大鼠的超微结构变化情况。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 各组NCV 比较

术后4周以及8周时，B、C、D组的NCV 均显著优于A组（P＜0.05）。在术后4周时，D组显著优于B、C组（P＜0.05）；在术后8周时，B、C、D 三组无明显差异（P＞0.05），但显著优于A组（P＜0.05）。详见表1。

表1 各组NCV 比较(ms)

2.2 各组脊髓前角运动神经元数目比较

术后1周和4周，D组的脊髓前角运动神经元数目显著高于A、B、C 三组（P＜0.05）,术后4周时B、C组显著高于A组（P＜0.05）；术后8周时，B、C、D 三组无明显差异（P＞0.05）,但显著高于A组（P＜0.05），详见表2。

表2 各组脊髓前角运动神经元数目比较

2.3 超微结构变化

D组术后1、4周及8周时的细胞功能处于基本良好状态，B组和C组的细胞存在部分萎缩，如假包含体以及核凹陷等；A组则表现为明显细胞凋亡征象，如毒毛细胞以及脂质体明显增多等。

3 讨论

近年来，虽然显微外科技术得到了较大的进展，但临床疗效多不理想[3]。神经的再生速度极为缓慢，再生神经还不能达到失神经支配作用的肌肉组织时，该部位的肌肉即可产生不可逆性的肌萎缩[4]。因此，近年来临床逐渐将周围神经损伤的治疗重点转移至受损神经保护方面，强调应用多因素多因子防止神经纤维、神经元胞体以及神经效应器等的变性以及死亡，从而保护受损神经元[5]。

NGF 属于逆转运生长因子。动物实验显示，外源性NGF 能够促进神经轴突再生。外源性GM1 能够控制由于缺氧缺血引起的神经细胞水肿，并降低由于缺血缺氧引起的继发性神经损害，促进受损神经细胞的修复，从而促进神经轴突的生长。但目前多数研究都限于单纯应用NGF 或GM1 的研究，对于两者联合应用的研究相对较少。

本研究建立坐骨神经损伤大鼠模型，单独或联合应用NGF与GM1，同时以生理盐水作为对照，研究了NGF 联合GM1 对于坐骨神经损伤以后脊髓运动神经元的保护作用。研究结果显示，神经损伤大鼠在术后4周时无论是神经传导速度还是脊髓前角运动神经元数均显著优于单纯NGF组或GM1组，且在术后1-8周内，NGF 联合GM1组的细胞功能基本保持良好，而其余各组均存在不同程度的萎缩或凋亡。充分证实，对于周围神经损伤应用NGF 联合GM1 可防止神经元的坏死，并促进神经元的再生以及结构改变的恢复，且起效时间较单纯应用NGF 或GM1 明显提前。

综上所述，在坐骨神经损伤早期，联合应用NGF 和GM1 能够加速神经元的修复，促进神经元再生以及结构功能的回顾，并早期抑制细胞的凋亡，有效缩短受损神经的修复时间，改善患者的预后及生活质量，值得推广应用。

[1]林红,李超,姜允琦，等.鼠神经生长因子联合甲钴胺治疗未行激素冲击治疗的急性不完全性脊髓损伤[J].中华创伤骨科杂志,2012,14(3)：207-210.

[2]许辉,罗洁.鼠神经生长因子联合单唾液酸神经节苷酯治疗周围神经损伤的疗效观察[J].江西医药,2010,45(8)：765-766.

[3]翟宏伟,孙洁,巩尊科，等.神经节苷脂联合神经生长因子治疗对脊髓损伤后生活自理能力恢复的影响[J].中华物理医学与康复杂志,2013,35(3)：185-187.

[4]施新革,夏永华,李爱国，等.小鼠神经生长因子治疗人急性脊髓损伤的疗效观察[J].军事医学,2011,35(2)：142-144.

[5]张红,宋美香,孙向伟，等.神经干细胞移植结合注射用鼠神经生长因子治疗脊髓损伤的护理[J].中国保健营养（中旬刊）,2012,(12)：208.