一起猪蓝耳病的诊治报告

叶葆衡 连玉华

（1肉食品安全生产技术国家重点实验室厦门361100；2龙海华美种猪场363100）

一起猪蓝耳病的诊治报告

朱苏琴1叶葆衡1何宗亮2连玉华2

（1肉食品安全生产技术国家重点实验室厦门361100；2龙海华美种猪场363100）

漳州某猪场发生一起以呼吸道疾病为主要症状的传染病，应用免疫金标试纸检测患猪血清抗体和PCR检测抗原，结合生猪疫苗免疫、临床症状和病理变化，确诊为猪蓝耳病，同时应用该场健康母猪高免血清治疗，取得很好的效果。

猪蓝耳病免疫金标试纸RT-PCR

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS）又称猪蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的以母猪繁殖障碍、仔猪断乳前后高死亡率、育成猪呼吸道疾病为主要特征的传染病[1]。该病1987年首次发现于美国，随后北美、欧洲及亚洲各国和地区也相继报道[2]。1996年，我国郭宝清等首次分离到PRRSV[3]。之后近20年来此病相继在我国各地蔓延流行。2006年，发生变异的高致病性蓝耳病即“猪高热病”在我国各地暴发流行，给养猪业造成很大损失[4]。

有研究表明，该病与其他传染病一样所引起母猪繁殖障碍、仔猪呼吸道症状有着非常类似的临床表现，只凭临床症状和病理变化难以判定，必须结合实验室检测才能做出正确的诊断。目前，已经建立的实验室诊断方法有病毒的分离与鉴定、酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）、间接免疫荧光试验（IFA）等。而我们采用免疫胶体金技术检测结合聚合酶链式反应（PCR/RT-PCR）技术快速准确地诊断了一起由PRRSV引起的猪繁殖与呼吸综合征。现报道如下。

1 发病情况

福建漳州某猪场，饲养一批外三元60～70日龄小猪，该批小猪的免疫程序：14日龄接种蓝耳病弱毒苗和圆环病毒病、支原体病灭活苗、20日龄接种猪瘟弱毒苗、40日龄接种伪狂犬病弱毒苗、50日龄接种口蹄疫灭活苗、55日龄接种猪瘟弱毒疫苗。由于冷空气袭击，有3栏小猪出现以咳嗽喘气为主要症状，伴有体温升高，开始以感冒治疗，用阿莫西林后大部分小猪痊愈，但仍有5%～6%小猪体温升高至40～41℃，精神沉郁，食欲下降或不食，嗜睡；眼睑水肿；出现咳嗽、气喘甚至呼吸困难等症状；背部皮肤发红，有出血点，耳尖部发绀，腹下和四肢内侧处皮肤有出血点或紫红色斑块；病情严重者卧地不起，呼吸困难，肌肉震颤，后肢麻痹无力，两脚划地不能站立或共济失调。急性者发病3～5 d死亡，并有10多头患猪死亡。发病率10%左右，病死率低。

2 病理变化

从3个栏各取1头患猪进行剖检，主要表现为全身内脏器官、黏膜、浆膜等均有不同程度出血。胸腔积液；肺表面有散在出血点、水肿、肉变区，以心叶为多见的灶性暗红色实变；肺门淋巴结呈深红色肿胀、切面有弥漫性出血点；脾脏呈紫色，有少许的表面隆起结节状梗死灶；肾呈土黄色，有一例表面可见针尖大小出血点。其余脏器末见明显变化。

3 实验室检查

3.1 细菌学检查无菌采集病死猪的脾、淋巴结等病料组织，接种于普通肉汤和血琼脂平板，37℃培养48 h，未见有细菌生长。

3.2 抗体检测采集3头患猪血液，分别加入猪蓝耳病（PRRS）抗体、猪伪狂犬病（PR）抗体，猪瘟（CSF）抗体、猪圆环病毒（PCV-2）抗体金标检测试纸的加样孔内，室温下放置30 min判定，结果见表1。

表1 各抗体金标试纸检测结果

根椐小猪疫苗免疫情况，猪体内猪瘟、伪狂犬病、圆环病毒病、蓝耳病的抗体都应为阳性，但检测结果蓝耳病抗体阴性，可能猪感染了蓝耳病毒。

3.3 PCR/RT-PCR检测无菌采集患猪肺、脾、淋巴结等研磨成匀浆制成混合样，提取病毒RNA。鉴于抗体检测显示猪伪狂犬抗体、猪圆环抗体弱阳性及猪蓝耳抗体阴性的结果，本实验室采用猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型PCR检测试剂盒及猪蓝耳病毒RT-PCR检测试剂盒进行分子水平的抗原检测，扩增的目的片段大小分别为220 bp、1 060 bp、492 bp，结果显示，猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒Ⅱ型PCR检测阴性，无特异性条带；猪蓝耳病毒RT-PCR检测阳性，扩增出了预期492 bp的DNA片段（如图1）。

图1 PRRS-RT-PCR电泳图

4 诊断

根据临床症状、流行病学（免疫程序资料）、病理变化和实验室检查等诊断该猪场发生的小猪传染病为猪蓝耳病。

5 防治措施

1）全场封锁隔离消毒，对已发病的3栏猪舍每天2次带猪消毒，同时将症状明显患猪转移到患猪舍进行隔离治疗。

2）选择本场即将淘汰的健康母猪，采血后用金标试纸测定，对蓝耳病抗体阳性的2头键康母猪放血制作高免血清，每头猪肌注5 mL高免血清，有明显病征的隔日再注射5 mL。

应用高免血清后3 d，猪只采食、饮水、精神状况都恢复正常。

6 讨论

1）目前，猪各种传染病的发生主要趋于隐性或非典型化，这给疾病的确诊带来了困难。在猪蓝耳病诊断技术中，常见的ELISA、间接免疫荧光（IFA）、免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）、病原分离鉴定等检测方法，需要大量仪器设备、耗时长、操作难度大、成本高，不能满足基层的实际需要。该病诊断采用的胶体金抗体检测技术，检测结果说明应用免疫金标试纸检测抗体（抗原），结合猪体疫苗免疫、临床症状和病理变化，可以在短时间内做出正确诊断，为有效治疗取得宝贵时间，相比ELISA等其他方法来说，操作简便、检测费用低，非常适用于基层技术人员现场检测诊断使用。

2）聚合酶链式反应（PCR）技术已渗透到生命科学的各个领域，使原本诊断十分困难的某些传染病和遗传病在分子水平上给我们快速、准确的诊断提供了捷径。PRRSV是引起猪呼吸与繁殖综合征的直接病原，由于病毒粒子很小（只有45～65 nm）、在细胞培养过程中不产生细胞病变、无血凝活性等原因，常规的病毒分离鉴定很困难。但是，PRRSV是单股正链RNA病毒，基因组很小，仅有15 kb，便于从核酸水平对病毒进行检测和研究。该病例采用的RTPCR/PCR方法可以快速准确检测感染病变组织样品中的病毒核酸。PRRS的一个生物学显著特性是对巨噬细胞的亲和性，特别是对猪肺巨噬细胞（PAM）的亲和性。因此发病猪的肺部病毒含量最高。但为了检测到其他病毒粒子如PRV、PCV-2病毒的存在，因此，该病例选取肺部、脾脏和淋巴结作为检测病毒核酸的材料，从中只扩增出了PRRS病毒没有其他病毒预期长度的DNA片段，这使得结果特异可靠更具有说服力。

3）猪繁殖与呼吸综合征是一种病毒病，目前尚无药物治疗，只能采取隔离消毒和紧急免疫方法，紧急免疫会引起不少已感染病毒的猪只死亡，而该病例采取了应用本场健康老母猪的高免血清治疗取得了非常好的效果，而且治疗成本低，值得推荐。

致谢本文承蒙厦门检验检疫局黄印尧老师审阅，特此致谢。

[1]Dea S,Rossow R.Current knowledge on the st uctural proteins of porcine reproductive and respiratory syndrome（PRRSV）virus:co mparision of the North American and Europeanisolates[J].Arch Virol，2000，145：659-688.

[2]Eric S,Janneke M.The molecular biology of arterivirus[J] .JGen Virol，1998，79：961-979.

[3]Shen S,Meng X,Wesl y R,et al.Determination of the complete nucleotide sequence of a vaccine strai n of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and identification of the Nsp2 gene with a unique insertion[J].Arch Virol，,2000，145：871-883.

[4]邵卫星，魏荣，祝丽.高致病性猪蓝耳病的特点及防制[J].中国动物检疫，2008，25（7）：44-45.

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1003-4331（2014）04-0066-02