Raptor和Rictor在慢性前列腺炎和前列腺癌的表达及意义

陈先国，潘腾飞，刘 祎，苏 阳，梁朝朝

Raptor和Rictor在慢性前列腺炎和前列腺癌的表达及意义

陈先国，潘腾飞，刘 祎，苏 阳，梁朝朝

免疫组化检测Raptor和Rictor在慢性前列腺炎（CP）及前列腺癌（PCa）中的表达。Raptor和Rictor在CP和PCa组织中均有不同程度的表达；与CP组织比较，PCa中Raptor和Rictor的表达均明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。Raptor和Rictor在CP恶变为PCa过程中具有重要的作用，为PCa的预防和分子靶向治疗提供理论依据。

慢性前列腺炎；前列腺癌；Raptor；Rictor

慢性前列腺炎（chronic prostatitis，CP）是男性常见病和多发病，CP由于发病机制尚不明确，在某些不确定因素的存在下，前列腺处于长期或过度反应时，炎症反应无法转变成内环境稳定状态［1］，会引起机体的严重后果。前列腺癌（prostate cancer，PCa）是西方国家男性最常见的恶性肿瘤，在美国其发病率居男性肿瘤的第一位［2］。目前，PCa的病因仍然不清，可能与遗传、年龄、生活方式、环境因素等有关。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）有2种不同的复合体mTORC1和mTORC2，mTORC1主要由mTOR和mTOR调节相关蛋白（Raptor）组成［3］，mTORC2主要由mTOR和雷帕霉素不敏感性mTOR（Rictor）［4］组成。mTOR在调节机体的代谢、生长、增殖和细胞周期等过程中起关键作用。目前发现约20%的癌症由慢性感染或炎症所引发，其中包括肝癌、结肠癌、胃癌以及膀胱癌等［1］。最近研究［5］显示CP在PCa发生发展中起重要作用。该文就mTOR复合体在CP和PCa的表达做一研究，为PCa的预防和治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料及主要试剂CP 42例和PCa 38例标本均来自安徽医科大学第一附属医院病理科存档蜡块，所有病理结果均由我院病理科2位资深医师进行诊断。Raptor及Rictor兔抗人抗体购自美国Cell Signaling公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫组化 采用SP法，染色步骤按说明书进行：组织切片脱蜡、水化；PBS洗3次，每次5 min；微波炉抗原修复；H2O2去除内源性过氧化物酶活性，PBS洗3次，每次5 min；滴加兔抗人Raptor及Rictor抗体（1∶500），37℃恒温孵育1h；PBS冲洗3次，每次5 min；加生物素标记二抗，37℃恒温孵育1h；PBS冲洗3次，每次5 min；DAB显色，苏木精复染，中性树胶封片、镜检。

1.2.2 结果判断 在高倍镜下，对每张切片随机选择10个视野，凡细胞膜及细胞质出现棕黄色颗粒的细胞计为阳性细胞。将阳性细胞所占百分比进行评分，0分：0%；1分：＜10%；2分：10%～50%；3分：＞50%；将细胞染色强弱进行评分，0分：细胞质/细胞膜上无棕黄色颗粒；1分：细胞质/细胞膜上有淡棕黄色颗粒；2分：细胞质/细胞膜上有染色较清晰的棕黄色颗粒，染色介于强弱之间；3分：细胞质/细胞膜上有大量深棕黄色颗粒。综合上述结果，将染色强度定为4级：0分为阴性；2分为弱阳性；3～4分为阳性；5～6分为强阳性。

1.3 统计学处理采用SPSS 11.0统计软件进行分析，等级资料采用秩和检验。

2 结果

2.1 Raptor在CP和PCa组织中的表达免疫组化显示Raptor在CP或PCa中的细胞质/细胞膜表达为棕黄色颗粒。Raptor在CP组织中阴性表达9例、弱阳性表达24例、阳性表达7例、强阳性表达2例；在PCa组织中阴性表达0例、弱阳性表达6例、阳性表达11例、强阳性表达21例，Raptor在CP和PCa组织中表达的阳性率分别为78.6%和100.0%；与CP组织比较，Raptor在PCa中的表达明显升高（P＜0.05）。见图1。

2.2 Rictor在CP和PCa组织中的表达免疫组化显示Raptor在CP或PCa中的细胞质/细胞膜表达为棕黄色颗粒。Rictor在CP组织中阴性表达13例、弱阳性表达22例、阳性表达6例、强阳性表达1例；Rictor在PCa组织中阴性表达5例、弱阳性表达7例、阳性表达12例、强阳性表达14例，Rictor在CP和PCa组织中表达的阳性率分别为69.0%和86.8%；与CP组织比较，Rictor在PCa中的表达明显升高（P＜0.05）。见图1。

图1 Raptor、Rictor在CP、PCa组织中的表达 ×400

3 讨论

流行病学、组织病理学以及分子生物学研究［6］显示，CP患者在各种损伤性因素刺激下，可能转变为前列腺上皮内瘤变（prostatic intraepithelial neoplasia，PIN），并最终恶变为PCa。Daniels et al［7］发现CP和PCa的发生发展明显呈正相关。CP患者患有PCa的风险明显提高，慢性炎症刺激时间越长，患PCa的风险可能性越高。MacLennan et al［8］发现约20%的CP患者5年内被确诊为PCa，而非CP患者5年内患PCa的仅占6%。这些研究从流行病学上均提示CP促进PCa的发生发展。在组织学上，慢性炎症刺激常常在外周带前列腺上皮发生增生性萎缩（proliferative inflammatory atrophy，PIA）［9］，而外周带也是PCa好发部位，这些PIA区域进而进展为PIN和PCa［6］。分子生物学上，有研究［5］表明，炎症细胞刺激后释放一些细胞因子，与前列腺上皮细胞DNA相互作用，引起基因变化，如基因重排、点突变和删除等，最终导致PCa。PCa的发生可能与微生物感染及其形成的炎症反应有关，有学者对小鼠进行多次盆底乳酸注射诱发前列腺炎症，取组织标本进行HE染色，结果显示，标本中除炎症组织外，还观察到了较为明显的腺泡上皮增生，类似于人类的PIN。

mTOR是机体炎症、营养、能量、生长因子等感受器，感受外界的刺激，促进mTOR活化，导致癌症的发生。最近研究［10－12］显示，mTOR复合体调控机体炎症反应，当炎症信号刺激机体后，通过mTORC1和mTORC2信号途径调控下游靶蛋白从而对炎症产生影响，此外使用mTORC1和mTORC2双重抑制剂也能明显减轻炎症反应，这进一步证实了mTOR调控机体炎症反应［13］。2013年JCI在线发表研究［14］成果：IL-6在炎症转变为肿瘤过程中起关键作用，其机制是IL-6结合其亚基GP130而激活mTORC1信号途径的，使用mTORC1抑制剂后发现减少了肿瘤的血管生成和细胞增殖。

本研究显示Raptor和Rictor在CP和PCa组织中均有不同程度的表达。与CP相比，PCa中Raptor和Rictor的表达明显升高，表明mTOR复合体在CP恶变为PCa过程中发挥重要作用，mTOR复合体的异常活化可能是PCa发生发展过程中一个早期的分子事件。或许可以解释Majumder et al［15］的发现：对mTOR高度活化的转基因小鼠使用mTOR抑制剂，小鼠的PIN变完全消失。

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AbstarctThe expression of Raptor and Rictor in chronic prostatitis and prostate cancer was examed by immunohistochemical.Raptor and Rictor were differently expressed in chronic prostatitis and prostate cancer；the expression of Raptor and Rictor in prostate cancer was markedlyhigher than chronic prostatitis（P＜0.05）.Raptor and Rictor play important roles chronic prostatitis malignant to prostate cancer，and provide the theory base for the prevention and molecular targeted therapy of prostate cancer.

The expression and significance of mTOR complex in the chronic prostatitis and prostate cancer

Chen Xianguo，Pan Tengfei，Liu Yi，et al
（Dept of Urology，The First Affiliated Hospital of Anhui Medical University，Hefei 230022）

chronic prostatitis；prostate cancer；Raptor；Rictor

R 697＋.33

A

1000－1492（2014）04－0545－03

2013－12－20接收

国家自然科学基金（编号：81370856）；教育部博士点基金（编号：20113420110003）；安徽省自然科学基金（编号：1208085MH138）

安徽医科大学第一附属医院泌尿外科，合肥 230022

陈先国，男，博士，主治医师；梁朝朝，男，教授，主任医师，博士生导师，责任作者，E-mail：liang_chaozhao＠163.com