香鳞毛蕨的化学成分研究

王 静，曾伟民，刘国庆，张彦龙

黑龙江大学生命科学学院，黑龙江大学分子生物学省高校重点实验室，哈尔滨150080

香鳞毛蕨(Dryopteris fragrans(L．)schott)为多年生落叶草本，属于鳞毛蕨科鳞毛蕨属植物，生长于高寒地区的滑石坡、森林中的碎石坡和火山周围的岩浆缝隙中。我国的东北、华北、俄罗斯、日本以及欧美均有分布。另据五大连池地方志记载，达斡尔族居民在几百年前就已经使用香鳞毛蕨水煎液治疗多种疾病，尤其对皮肤病疗效独特。经研究发现，香鳞毛蕨还具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗氧化等多方面的药理作用［1］。为了更深入的研究香鳞毛蕨的药理活性，本实验从香鳞毛蕨30%乙醇组分中分离鉴定了10个化合物，其中化合物4～10为首次从鳞毛蕨属植物中分离得到。

1 仪器与材料

香鳞毛蕨采于黑龙江省五大连池火山地区，经东北林业大学植物学教授聂绍荃鉴定为鳞毛蕨科鳞毛蕨属植物香鳞毛蕨D．fragrans。植物标本保存于黑龙江大学生命科学学院生物制药实验室。

Bruker AM-400和DRX-500型核磁共振波谱仪(Bruker公司)、DH-101型电热恒温鼓风干燥箱(天津市中环试验电炉有限公司);FD-1型冷冻干燥机(北京博医康仪器有限公司);3300LH型超声清洗仪(上海科导有限公司);XRC-1型显微熔点仪;Bio-Rad FTS-135型红外光谱仪;UV-210A型紫外光谱仪;VG AUTO Spec-3000型质谱仪;EYELA n-1100sw型旋转蒸发仪;100～200目拌样用硅胶(青岛海洋化工厂);200～300目层析用硅胶(青岛海洋化工厂)及DM-130大孔树脂(郑州勤实科技有限公司);所用试剂均为分析纯。

2 提取与分离

取干燥的香鳞毛蕨全草，粉碎后准确称取20 kg，每次加入10倍量蒸馏水，蒸汽提取三次，减压浓缩。随后将浓缩液进行大孔树脂柱色谱，用纯水、30%、60%和95%的乙醇依次洗脱，得到水组分、30%乙醇组分、60%乙醇组分和95%乙醇组分。30%乙醇组分，进行硅胶柱色谱，将氯仿甲醇按照19∶1、9∶1、8∶2、7∶3 和 1∶1 的比例混合进行梯度洗脱，TLC检测合并，减压浓缩，得到氯仿/甲醇19∶1部分 FrⅠ、9∶1 部分 FrⅡ、8∶2 部分 FrⅢ、7∶3 部分FrⅣ和1∶1部分FrⅤ。将以上得到的五个组分分别利用不同比例氯仿/甲醇混合溶剂按照极性依次增大的顺序进行硅胶柱层析，TLC检测合并，经纯化得到10个化合物(图1)，分别为化合物1(135 mg)、2(3 mg)、3(12 mg)、4(55 mg)、5(5．6 mg)、6(7．2 mg)、7(172 mg)、8(42 mg)、9(6 mg)、10(130 mg)。

3 结构鉴定

化合物1 浅黄色针状晶体，1H NMR(400 MHz，MeOD):δH6.22(s，H，H-3)，6.27(brs，1H，H-6)，6.34(brs，1H，H-8)，4.52(s，2H，H-11);13C NMR(100 MHz，MeOD)δC:171.1(s，C-2)，106.4(d，C-3)，183.2(s，C-4)，163.4(s，C-5)，99.7(d，C-6)，164.9(s，C-7)，94.5(d，C-8)，158.9(s，C-9)，105.4(s，C-10)，61.1(t，C-11)。以上数据与文献［2］报道基本一致，鉴定化合物1为二羟基-2-甲基色原酮。

化合物2 褐色油状物，1H NMR(600 MHz，MeOD)δH:7.06(d，J=2.3 Hz，1H，H-2)，6.80(s，J=8.3 Hz，1H，H-5)，6.97(dd，J=2.3，8.3 Hz，1H，H-6)，7.57(d，J=15.8 Hz，1H，H-7)，6.29(d，J=15.8 Hz，1H，H-8)，3.78(s，3H，H-10)。13C NMR(150 MHz，MeOD)δC:127.8(s，C-1)，115.2(d，C-2)，147.1(s，C-3)，149.8(s，C-4)，116.6(d，C-5)，123.1(d，C-6)，147.0(d，C-7)，114.9(d，C-8)，169.9(s，C-9)，52.2(q，C-10)。以上波谱数据与文献［3，4］报道基本一致，鉴定化合物2为咖啡酸甲酯。

化合物 3 黄色粉末，1H NMR(400 MHz，MeOD)δH:5.32(dt，J=12.7，2.9 Hz，1H，H-2)，2.74(dt，J=17.2，3.3 Hz，2H，H-3)，6.18(d，J=2.0 Hz，1H，H-6)，6.21(d，J=2.0 Hz，1H，H-8)，6.91(brs，1H，H-2')，6.79(brs，1H，H-5')，6.77(brs，1H，H-6')，4.97(d，J=6.8 Hz，1H，H-1'')，3.88(d，J=12.1 Hz，1H，H-6''a)，3.69(dq，J=3.9，12.3 Hz，1H，H-6''b)，3.36 ～ 3.49(m，4H，H-2''，H-3''，H-4''，H-5'')。13CNMR(100 MHz，MeOD)δC:80.68(d，C-2)，44.04(t，C-3)，198.5(s，C-4)，164.9(s，C-5)，96.9(d，C-6)，166.92(s，C-7)，97.9(d，C-8)，164.6(s，C-9)，104.9(s，C-10)，131.45(s，C-1')，114.75(d，C-2')，147.0(s，C-3')，146.5(s，C-4')，116.2(d，C-5')，119.32(d，C-6')，101.16(d，C-1'')，74.6(d，C-2'')，71.1(d，C-3'')，77.8(d，C-4'')，78.2(d，C-5'')，62.3(t，C-6'')。以上数据与文献［5］报道相符，可以确定化合物3为2S-圣草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物 4 无色晶体，1H NMR(400 MHz，MeOD):δH:7.28(s，1H)，6.77(d，J=1.8 Hz，1H，H-2)，6.70(d，J=8.0 Hz，1H，H-5)，6.62(dd，J=8.0，1.8 Hz，1H，H-6)，2.59(t，J=7.6 Hz，2H，H-7)，1.8(m，2H，H-8)，3.56(t，J=6.5 Hz，2H，H-9)，3.82(s，3H，H-OCH3)。13C NMR(100 MHz，MeOD)δC:134.9(s，C-1)，113.1(d，C-2)，148.8(s，C-3)，145.5(s，C-4)，116.1(d，C-5)，121.8(d，C-6)，32.7(t，C-7)，35.7(t，C-8)，62.3(t，C-9)，56.3(q，C-10)。以上数据与文献［6］基本符合，可以确定化合物4为二氢松柏醇。

化合物5 紫红色无定形态粉末，1H NMR(400 MHz，MeOD)δH:6.07(t，J=2.2 Hz，1H，H-2)，6.12(d，J=2.2 Hz，2H，H-4，H-6)，2.42(t，J=7.4 Hz，2H，H-7)，1.59(m，2H，H-8)，0.92(t，J=7.4 Hz，3H，H-9)。13C NMR(100 MHz，MeOD)δC:159.3(s，C-1，C-3)，100.9(d，C-2)，107.9(d，C-4，C-6)，146.1(s，C-5)，39.1(t，C-7)，25.5(t，C-8)，14.1(q，C-9)。与文献［7］对照，其波谱数据基本吻合，可以确定化合物5为1，3-二羟基-5-丙基苯。

化合物6 无色油状物，1H NMR(400 MHz，MeOD)δH:1.64(1H，m，H-2a)，1.26(1H，m，H-2b)，3.72-3.80(m，1H，H-3)，1.67(1H，m，H-4a)，2.29(dd，J=14.8 Hz，4.9，1H，H-4b)，7.17(d，J=15.8 Hz，1H，H-7)，6.19(d，J=15.8 Hz，1H，H-8);2.30(s，3H，H-10)，1.18(s，3H，H-11)，1.19(s，3H，H-12)，0.96(s，3H，H-13)，13C NMR(100 MHz，MeOD)δC:36.1(s，C-1)，47.6(t，C-2)，64.4(d，C-3)，41.3(t，C-4)，68.8(s，C-5)，70.8(s，C-6)145.4(d，C-7)，133.8(d，C-8)，200.2(s，C-9)，27.4(q，C-10)，29.8(q，C-11)，25.1(q，C-12)，20.0(q，C-13)。以上数据与文献［8］报道基本一致，鉴定化合物6为3β-羟基-5α，6α-环氧-7-大柱香波龙烯-9-酮。

化合物 7 白色粉末，1H NMR(400 MHz，CDCl3)δH:6.73(d，J=7.9 Hz，1H，H-3)，7.20(dt，J=7.9，1.9 Hz，1H，H-4)，6.80(dt，J=7.9，1.9 Hz，1H，H-5)，7.30(dd，J=7.9，1.9 Hz，1H，H-6)。以上波谱数据与文献［9］报道基本一致，鉴定化合物7为2-羟基苯甲酸。

化合物8 白色晶体，1H NMR(400 MHz，Acetone-d6)δH:7.17(s，1H，H-2)，6.87(d，J=7.6 Hz，1H，H-5)，7.06(d，J=7.6 Hz，1H，H-6)，7.61(d，J=15.8 Hz，1H，H-7)，6.34(d，J=15.8 Hz，1H，H-8)。13C NMR(100 MHz，Acetone-d6)δC:127.0(s，C-1)，115.1(d，C-2)，146.2(s，C-3)，148.6(s，C-4)，116.5(d，C-5)，122.7(d，C-6)，145.5(d，C-7)，116.3(d，C-8)，168.1(s，C-9)。以上数据与文献［10］报道相符，可以确定化合物8为咖啡酸。

化合物9 白色针状晶体，1H NMR(400 MHz，Acetone-d6)δH:7.55(d，J=8.2 Hz，2H，H-2，H-6)，6.89(d，J=8.2 Hz，2H，H-3，H-5)，2.27(s，3H，H-8)。13C NMR(100 MHz，Acetone-d6)δC:127.8(s，C-1)，130.1(d，C-2，C-6)，115.7(d，C-3，C-5)，160.5(s，C-4)，198.0(s，C-7)，27.2(q，C-8)。以上数据与文献［11］基本符合，可以确定化合物9为对羟基苯乙酮。

化合物10 淡黄色晶体，1H NMR(400 MHz，Acetone-d6)δH:5.36(dd，J=2.9，12.9 Hz，1H，H-2)，2.69(dd，J=2.9，17.4 Hz，2H，H-3α，H-3β)，5.91(d，J=2.1 Hz，1H，H-6)，5.93(d，J=2.1 Hz，1H，H-8)，7.01(s，1H，H-2')，6.84(s，2H，H-5'，H-6')。13C NMR(100 MHz，Acetone-d6)δC:79.9(d，C-2)，43.4(t，C-3)，197.3(s，C-4)，165.1(s，C-5)，96.7(d，C-6)，167.7(s，C-7)，95.8(d，C-8)，164.8(s，C-9)，103.8(s，C-10)，131.2(s，C-1')，114.6(d，C-2')，146.1(s，C-3')，146.5(s，C-4')，115.9(d，C-5')，119.0(d，C-6')。与文献［12］对照，其波谱数据基本吻合，可以确定化合物10为圣草素。

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