高效液相色谱-二极管阵列检测法同时测定香丹注射液中7种丹参酚酸类成分

于小静

高效液相色谱-二极管阵列检测法同时测定香丹注射液中7种丹参酚酸类成分

于小静

目的对高效液相色谱-二极管阵列检测法同时测定香丹注射液中 7种丹参酚酸类成分的效果进行分析探讨。方法色谱柱为ThermoODS2柱，流动相为乙腈（A）0.05%磷酸（B），流速为1.0ml/min，波长为280nm。结果经统计发现，香丹注射液中丹参素、咖啡酸、原儿茶醛、迷迭香酸、丹参酚酸B、丹参酚酸A、紫草酸在试验范围内存在良好的线性关系，r均＞0.9991，精密度均＜1%，在48h内存在良好的稳定性，回收率均在98%～103%。结论经高效液相色谱-二极管阵列检测法对香丹注射液中丹参酚酸类成分进行检测的结果准确可靠，值得关注。

高效液相色谱-二极管阵列检测法；香丹注射液；丹参酚酸；含量测定

本次研究出于对香丹注射液中7种丹参酚酸类成分含量测定方法进行分析探讨为目的，采取高效液相色谱-二极管阵列检测法对丹参素、咖啡酸、原儿茶醛、迷迭香酸、丹参酚酸B、丹参酚酸A、紫草酸在香丹注射液中的含量展开了同时测定，现报告如下。

1 仪器与试剂

1.1 实验仪器所用仪器包括 BD-25十万分之一电子天平、Waters效液相色谱仪，包括在线真空脱气机、Waters600 四元泵、Waters 2996二极管阵列检测器（DAD）以及Empower2色谱工作站。

1.2 实验试剂实验中所需对照品试剂包括丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、丹参酚酸A、丹参酚酸 B、紫草酸。香丹注射液，乙腈为色谱纯，水为双蒸水，其余所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件所用色谱柱为Thermo ODS2，规格为4.6mm×250mm，5µm，所用流动相为乙腈（A）-0.05%磷酸水（B）。梯度洗脱条件包括起始流动相配比为 13%A～87%B；15min时流动相配比为23%A～77%B；30min时流动相配比为 25%A～75%B；35min时流动相配比为 60%A～40%B。流速为1.0ml/min，温度为室温（25℃），进样量为20µl，波长为280nm[1]。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液制备 精密称定对照品丹参素10.00mg、咖啡酸1.35mg、原儿茶醛13.80mg、丹参酚酸 A 6.30mg、丹参酚酸 B 13.00mg、迷迭香酸5.00mg及紫草酸5.50mg，将其分别放置于5ml的棕色容量瓶中，经浓度为 70%的甲醇溶解，并定容至刻度，作为单一成分对照品备用；精密吸取个对照品溶液适量，放置于10ml的棕色容量瓶中，经70%的甲醇溶解后定容，摇匀后制成混合对照品备用。

2.2.2 供试品溶液制备 精密吸取香丹注射液1ml，将其放置于10ml的容量瓶中，经70%的甲醇稀释至刻度，而后经 0.22µm的微孔滤膜滤过，制成供试品溶液备用[2]。

2.3 线性关系考察制备系列浓度的混合对照品溶液，将其按照2.1所示色谱条件一次进样检测，将对照品溶液的浓度作为横坐标，峰面积作为纵坐标，绘制线性曲线。结果得到7种有效成分的线性回归方程分别为：Y丹参素=1E＋07X＋1229.12，线性范围200.10～2.03，r=0.9994；Y原儿茶醛=1E＋08X＋5825.31，线性范围127.92～1.28，r=0.9992；Y咖啡酸=7E＋07X－269.01，线性范围27.12～0.28，r=0.9994；Y迷迭香酸=4E＋07X＋3950.21，线性范围100.91～1.03，r=0.9997；Y紫草酸=2E＋07X＋2248.79，线性范围 111.09～1.12，r=0.9999；Y丹参酚酸B=2E＋07X＋10312.52，线性范围261.19～2.28，r=0.9999；Y丹参酚酸A=5E＋07X＋4158.12，线性范围125.89～1.28，r=0.9998。

2.4 精密度考察以2.1所示色谱条件，将对照品溶液连续进样5次，记录各有效成分的峰面积，并计算RSD值。结果发现7种有效成分的RSD值均＜1%，证实该仪器的精密度良好。

2.5 重现性考察精密量取5份1ml的香丹注射液溶液，按照2.2条件制成供试品溶液，分别进样测定，计算各成分峰面积的RSD值。结果发现各成分峰面积RSD值均＜1%，证实该方法具有良好的重现性。

2.6 稳定性考察精密量取 1ml香丹注射液，经2.2条件制成供试品溶液，分别在0、6、12、24、36、48h时进样检测，计算各成分峰面积的RSD值，结果发现各成分峰面积的RSD值在0.91%～1.38%，证实样品在48h内具有良好的稳定性。

2.7 加样回收实验精密量取已知含量的香丹注射液1ml，共3份，精密加入适量的对照品，以2.2所示条件制成供试品溶液，进样测定，计算回收率。经统计发现丹参素、咖啡酸、原儿茶醛、迷迭香酸、丹参酚酸 B、紫草酸、丹参酚酸 A 的平均回收率分别为100.7%、99.8%、100.7%、101.3%、101.9%、98.0%、103.1%。

2.8 样品含量测定取 3个批次的香丹注射液，精密量取1ml，按照2.2所示条件制成供试品，以2.1色谱条件进行检测，依照标准曲线计算样品中各成分的含量。结果发现3个批次样品中丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹参酚酸B、丹参酚酸 A的平均含量分别为 2.231mg/ml、0.517mg/ml、0.011mg/ml、0.109mg/ml、0.089mg/ml、0.162mg/ml、0.253mg/ml。

3 讨论

本次实验证实，经高效液相色谱-二极管阵列检测法同时测定香丹注射液中7种丹参酚酸类成分含量，结果准确可靠，精密度、重现性良好，值得关注并推广，为今后的药学研究工作提供可靠的参考依据。

[1] 仇锦春,廖清船,张永,等.香丹注射液对急性血瘀模型大鼠血液流变性及血小板聚集的影响[J].中国实验方剂学杂志,2011,17 (4):137-139.

[2] 李斐,孟运莲.香丹注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用[J].中国现代药物应用,2010,4(1):25-27.

R927.2

A

1673-5846(2014)01-0047-02

吉林省集安益盛药业，吉林通化 134200