HPLC法测定卡托普利片含量的测量不确定度评定

秦 立，肖 英，范亚刚（.云南省食品药品检验所，昆明 6500；.山东省食品药品检验所，济南 500）

HPLC法测定卡托普利片含量的测量不确定度评定

秦 立1＊，肖 英2，范亚刚1（1.云南省食品药品检验所，昆明 650011；2.山东省食品药品检验所，济南 250101）

目的：评定高效液相色谱（HPLC）法测定卡托普利片含量的测量不确定度。方法：建立HPLC法测定卡托普利片的含量的数学模型，分析测量不确定度的影响因素并对各因素进行评估，给出扩展测量不确定度报告。结果：HPLC法测定卡托普利片含量的扩展测量不确定度为1.2%，测量结果表示为（100.3±1.2）%，k＝2。结论：明确产生不确定度的主要来源，可为有效地控制该含量测定方法的准确性提供可靠的理论依据。

卡托普利片；高效液相色谱法；含量测定；测量不确定度

测量不确定度是与测量结果相关联的一个参数，用以表征合理地赋予被测量之值的分散性[1]。它与测量误差有着本质的区别。测量不确定度对测量、试验结果的可信性、可比性和可接受性都有非常重要的意义。在相同的条件下进行测量时，合理赋予被测量的任何值，均具有相同的测量不确定度，即测量不确定度仅与测量方法有关[2]。

卡托普利片是《中国药典》2010年版（二部）收载品种[3]，为竞争性血管紧张素转换酶抑制剂，适用于治疗慢性心功能不全和高血压。卡托普利片的含量测定方法为高效液相色谱（HPLC）外标法。笔者根据《测量不确定度评定与表示》及有关规定[4-5]并参考有关文献[6-9]，对HPLC法测定卡托普利片含量的测量不确定度进行评估，分析影响不确定度的各因素，为客观评价卡托普利片的含量测定结果提供科学依据。

1 材料

2695型HPLC仪，包括Waters 2996二极管阵列检测器及Waters Empower工作站（美国Waters公司）；BP-211D电子天平（德国赛多利斯公司，d＝0.01mg）；DELTA320酸度计（瑞士梅特勒-托利多公司）；100m l量瓶均检定为A级。

卡托普利对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100318-201103，质量分数：99.5%）；卡托普利片（云南龙恩制药有限公司，批号：20130301）；甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 试验方法

2.1 色谱条件

色谱柱：Kromasil C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液-甲醇-乙腈（75∶25∶5，V/V/V，用磷酸调节pH至3.0）；流速：1.0m l/min；检测波长：215 nm；柱温：40℃；进样量：20μl。

2.2 溶液的制备

取样品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于卡托普利10mg），置于100m l量瓶中，加流动相适量溶解并定容，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取卡托普利对照品适量，精密称定，置于100m l量瓶中，加流动相适量溶解并定容，作为对照品溶液。

2.3 样品测定

精密量取供试品溶液和对照品溶液各20μl，注入HPLC仪，记录色谱，按外标法以峰面积计算含量。

3 测量不确定度评定

化学分析中的测量不确定度评定主要分为以下步骤[2，4]：被测量的技术规定；识别测量不确定度的来源；测量不确定度分量的量化；计算合成标准测量不确定度；扩展测量不确定度的给出；报告测量不确定度。

3.1 数学模型

根据测定原理和过程，样品的标示百分含量计算公式为：

式中：X为供试品中卡托普利的标示百分含量；AX为供试品的峰面积；AR为对照品的峰面积；WX为供试品的称取量；WR为对照品的称取量；VX为供试品溶液的配制体积；VR为对照品溶液的配制体积；PR为对照品的纯度；W为平均片质量；标示量为25mg/片。

3.2 识别测量不确定度的来源

有关测量不确定度的来源见图1。

图1 测量不确定度分量因果图Fig 1 Cause-effect diagram of uncertainty components

3.3 测量不确定度分量的量化分析

3.3.6 供试品溶液稀释的相对标准不确定度ure（lVX） 测量不确定度的分析同“3.3.3”项。相对标准不确定度ur（elVX）＝6.80× 10－4。 3.3.7 供试品色谱峰面积的相对标准不确定度ure（lAX） 因检测次数较少，故采用极差法[3]计算供试品色谱峰面积引入的不确定度。当n＝2时，极差系数C＝1.13。精密称取2份卡托普利片供试品，分别配制成供试品溶液，每份溶液重复进样2次，结果详见表1。

表1 供试品峰面积测定结果（n＝2）Tab 1 Result of the peak area for test sam ple（n＝2）

3.4 计算合成相对标准不确定度uc，rel

测量不确定度各分量的分析结果见表2和图2。

表2 各分量相对标准不确定度一览Tab 2 Relative standard uncertainty of each component

图2 测量不确定度的分量大小Fig 2 Value of uncertainty components

3.5 给出扩展不确定度U

测量结果符合正态分布，取置信概率为95%，包含因子k＝2，则：U＝kuc（X）＝2×0.6%＝1.2%。

3.6 测量不确定度报告

HPLC法测定卡托普利片的含量结果表示为X＝（100.3± 1.2）%，k＝2。

4 讨论

由上述测量不确定度的分析评定结果可知，HPLC法测定卡托普利片含量的不确定度主要来自于对照品的称取量，其次是药片的质量差异、液相色谱峰面积、供试品的称取量以及稀释过程。提示在检验过程中应选用精度符合要求的分析天平称量，使用经校正合格的容量仪器进行稀释；应定期做好HPLC仪的计量检定和期间核查工作，使HPLC仪的技术性能处于良好工作状态，以确保测定结果准确可靠；对于含量测定结果处于合格边缘的产品应谨慎对待药片质量差异对结果的影响。

[1] 全国法制计量管理计量技术委员会.测量不确定度评定与表示：JJF1059.1-2012[S].北京：中国质检出版社，2013.

[2] 倪育才.实用测量不确定度评定[M].北京：中国计量出版社，2004：9.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：525.

[4] 全国法制计量管理计量技术委员会.化学分析测量不确定度评定：JJF1135-2005[S].北京：中国计量出版社，2005.

[5] 中国合格评定国家认可委员会.化学分析中不确定度的评估指南：CNAS-GL06[S].北京：中国计量出版社，2006.

[6] 谢琼玉.HPLC法测定赖诺普利片含量及含量均匀度的不确定度评定[J].中国药房，2013，24（40）：3 827.

[7]翁雪萍，黄丹莹.HPLC法测定保健食品中芦荟苷含量不确定度的评定[J].药物分析杂志，2011，31（6）：1 193.

[8] Quintela M，Báguena J，GotorG，etal.Estimation of the uncertainty associated w ith the results based on the validation of chromatographic analysis procedures：application to the determ ination of chlorides by high performance liquid chromatography and of fatty acids by high resolution gas chromatography[J].J Chromatogr A，2012，1 223： 107.

[9] Konieczka P，Namieśnik J.Estimating uncertainty in analytical procedures based on chromatographic techniques [J].JChromatogrA，2010，1 217（6）：882.

[10]全国流量容量计量技术委员会.常用玻璃量器检定规程：JJG196-2006[S].北京：中国计量出版社，2006.

Evaluation of Uncertainty for the Content Determ ination of Captopril Tablets by HPLC

QIN Li1，XIAO Ying2，FAN Ya-gang1（1.Yunnan Institute for Food and Drug Control，Kunm ing 650011，China；2.Shandong Institute for Food and Drug Control，Jinan 250101，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the uncertainty evaluation for the determination of Captopril tablets by HPLC.METHODS：Mathematicalmodelwas established for HPLC for the content determination of Captopril tablets to identify influential factors of uncertainty，evaluate the uncertainty factors and report expanded measurement uncertainty.RESULTS：The expanded uncertainty for the content determination of Captopril tablets as 1.2%，and the result of content determination was（100.3± 1.2）%（k＝2）.CONCLUSIONS：Main source of uncertainty should be clear and definite，which can provide theory evidence for accuracy control of themeasurementmethod.

Captopril tablets；HPLC；Content determ ination；Uncertainty

R917

A

1001-0408（2014）12-1140-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2014.12.29

＊副主任药师，硕士。研究方向：药品质量分析。电话：0871-63130536。E-mail：qinli2112@gmail.com

2013-10-21

2014-01-24）