蛋白芯片联合检测病原体抗体在急性呼吸道感染中诊断价值的探讨

陈文旭 王华妮 郭小艳 江 裕 陈溶微

福建省福州市第二医院检验科 350007

急性呼吸道感染（ARI）是儿童常见病与多发病之一，据统计，导致全球学龄前儿童死亡的疾病中部分是由ARI引起［1］。ARI可由多种病原体感染引起，危害儿童身体健康，目前急性呼吸道感染，随着抗生素的广泛应用，呼吸道病毒和肺炎支原体感染呈上升趋势并成为重要致病原，许多病毒感染强、传染快、发病急、无免疫记忆、多次发病、发病率高，容易在儿童中流行［2～4］，呼吸道细菌感染的发生率有所降低，而呼吸道病毒感染则呈上升趋势，因此快速检测出病原体对于辅助临床诊断和治疗就显得尤其关键。近年来临床诊断急性呼吸感染疾病无足够的临床取样和病原体检测，ARI病原体感染传统检测方法有聚合酶链式反应法、免疫荧光法、病毒培养、肺炎支原体培养、酶联免疫吸附试验法，这些方法的共同特点是操作繁琐，检测出报告时间长，达不到临床迫切需要的多种病原体快速、准确、联合检测并报告的要求，客观上造成非细菌性感染抗菌素滥用现象日益严重，传统检测方法还存在检测费用高，标本检测通量受限，且每次只能检测一种病原体等。蛋白芯片是近年来发展起来的新技术，是对功能基因蛋白产物表达水平的检测，芯片以硝酸纤维素微孔滤膜为载体，同时点布高纯度的待测病原体高纯度的抗原，利用微孔滤膜的渗滤、浓缩、凝聚作用，使抗原抗体反应快速在固相的滤膜上完成，反应结果强弱以荧光信号强弱来表示，结果是通过蛋白芯片专用阅读器判读，定量由阅读器携带的专业软件进行分析，它结合了免疫渗滤技术与微阵列技术，可高效、联合检测多种病原体，是多种病原体抗体联合检测的一种创新。本文通过收集474份ARI临床资料，采用蛋白芯片技术联合检测同一标本的4种病原体，总结分析如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究通过选取2011年2月－2013年1月，我院儿科门诊和住院诊断急性呼吸道感染的474例患儿，男244例，女230例。其中第一组年龄小于1岁144例（30.4%），第二组年龄1～3岁166例（35.0%），第三组年龄3～6岁99例（20.9%），第四组年龄大于6岁65例（13.7%）。年龄最小的8个月，最大的13周岁。诊断标准参照第7版《诸福棠实用儿科学》［5］。

1.2 方法 选用西安联尔科技有限公司蛋白芯片分析仪，静脉抽血3ml，常温凝固后分离血清待用，蛋白芯片微孔滤膜窗口内滴加试剂A 6滴，静置一段时间使膜表面浸湿，待A完全渗入后，加入待检测标本的血清100μl，待血清完全渗入后，静置10s，加入6滴试剂B清洗，待试剂B完全渗入后再滴加试剂C 6滴显色，再加入试剂D 6滴清洗。

1.3 统计学处理 各年龄组感染的不同病原体之间的差异进行χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义，各年龄组间病原体感染病阳性率的差异进行χ2检验，检测以P＜0.05差异有统计学意义，各年龄组间季节分布也以χ2检验，以P＜0.05差异有统计学意义。数据分析采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。数据处理在SPSS10.0软件上进行。

2 结果

2.1 检出的病原体 474份血清标本中FLU感染392例，阳性率最高为82.7%，其次是 MP 375例，阳性率为79.1%，RSV 162例，阳性率为34.2%，ADV 41例，阳性率是8.6%。混合感染以 MP＋FLU常见，有283例，阳性率是59.7%，其次是MP＋FLU＋RSV 79例，阳性率16.7%，FLU＋RSV只有11例，占2.3%。

2.2 各年龄组病原体分布 4种病原体IgM抗体中MP、ADV、RSV、FLU在各年龄组间分布的差异有统计学意义（P＜0.05），总检出阳性率各年龄组间差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 不同年龄组ARI患儿病原体检出率〔n（%）〕

2.3 各年龄组病原体感染例数季节分布 各年龄组ARI 1～3月分布最多，分别占39.6%、30.1%、30.3%、29.2%，其次多发生在4～6月，7～9月发病最少，但是季节间差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 各年龄组ARI季节分布〔n（%）〕

2.4 在单纯病原体感染的部分标本同时检测了CRP和ALT两个生化指标，升高的百分率作比较，发现MP与RSV比较差异有统计学意义（P＜0.05），MP与FLU比较差异无统计学意义（P＞0.05），RSV与FLU比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 单纯MP、RSV、FLU感染其他实验室诊断指标比较〔n（%）〕

3 讨论

ARI是导致儿童尤其是发展中国家儿童高致病率和高死亡率的主要疾病之一［6］。ARI按部位可分为急性上呼吸道感染（Acute upper resperate infection，AURI）和急性下呼吸道感染（Acute lower resperate infection，ALRI），它是一组包括肺炎、流行性感冒和呼吸道合胞病毒感染等的临床疾病［7］。人群中感染的常见病原体主要是细菌感染（链球菌最常见），非典型细菌（如MP）和病毒感染也占据很大的比例［8～10］。近年来由于病毒学和各种检测技术的发展，病毒性肺炎和非典型肺炎发病有增多趋势并成为临床危急重症，并且由此所致的混合感染也日益增加。其中，临床常见的病毒有RSV、FLU（包括A和B两种亚型）、CoV（人类冠状病毒）、HRV（人类鼻病毒）、HAdV（人类腺病毒）等［11，12］。本文通过收集474例临床诊断为ARI的患儿标本进行病原体包括常见病毒如ADV、RSV、FLU以及非典型MP检测。结果显示总体阳性率几近达到百分之百（99.2%），其中单独感染FLU阳性率为82.7%，MP阳性率为79.1%，RSV阳性率为34.2%，ADV阳性率为8.6%；混合感染中MP＋FLU阳性率为59.7%，MP＋FLU＋RSV阳性率为16.7%，FLU＋RSV阳性率为2.3%。此组数据基本都高于以往的报告［13，14］，可能与此次收集的病例数量有关系，同时说明病毒感染在ARI中非常普遍，混合感染也较常见，其中又以流感病毒和支原体混合感染较常见。此病原学检测结果也有助于指导儿科临床医师用药，减少抗生素滥用现象。

蛋白芯片因操作简便，测试时间短，可以随到随检，可联合检测多种ARI病原体［13］，因此已广泛应用于临床辅助ARI病原体检测。ARI临床多见于婴幼儿，尤其是5岁以下的婴幼儿，因其呼吸系统发育尚未完善，系统清理外来病原的能力较弱，加上本身免疫功能仍未成熟等，导致这一人群感染各种病原体的机会更大。本报告应用蛋白芯片法检测4种常见病原体，各年龄段的病原体检出率均较高（分别为86.8%，94.0%，97.0%，96.9%），既可说明蛋白芯片法的高敏感性，也说明婴幼儿易于感染各种病原体的生理特征。在呼吸道感染病原体检测标本类型的选择方面，考虑到婴幼儿的特殊生理，如果采用一般的细菌培养，不仅难以收集到检测样本（咽试子或痰），而且存在病原体含量少、呼吸道杂菌污染多、培养周期长等问题，因此常规的培养方法很受限制，在这方面，蛋白芯片所要求的静脉血液标本还是相对容易获得的，其检测周期短也是临床应用的优势。

ARI是儿科常见病，其病原体日趋多样性，并与婴幼儿年龄发病与季节有一定相关性。本报告统计分析，4种病原体IgM抗体在各年龄组间分布有显著性差异（P＜0.05），总检出阳性率各年龄组间差异也有统计学意义（P＜0.05），其中1岁以下婴幼儿以MP感染最常见，1～3岁则以MP和FLU混合感染常见，3～6岁MP和FLU混合感染常见，RSV感染也较常见（45.5%），6岁以上则与3～6岁儿童感染分布类似，其中RSV感染比例稍低，约占38.4%。总体阳性率以6岁以下儿童偏高，本报告6岁以上儿童也偏高（96.9%），估计与本次收集病例过少有关。各年龄组ARI 1～3月分布最多，其次多发生在4～6月，7～9月发病最少，但是季节间差异无统计学意义（P＞0.05）。

综上所述，蛋白芯片联合检测ARI病原体敏感性高、随到随检、检测周期短，在临床辅助诊断ARI方面具有极大的应用价值，值得在临床推广应用。

临床采用抗生素联合抗病毒经验性的治疗常常达不到疗效［15］，实际上非细菌性的ARI更为常见，本文就选择非细菌性ARI展开病原体研究。

肺炎支原体分离培养，是诊断MP感染的标准方法，咽试子和痰存在杂菌多污染的问题，尽管病原体含量比血液标本高，但灵敏度不高而且耗时长、技术要求高不能满足临床快速诊断的要求。MP－IgM是机体出现的最早的肺炎支原体抗体感染后1周就可检出，可持续12～16周与MP分离培养方法比较，MP－IgM抗体效价≥1∶160时对MP急性感染有诊断价值［16］。

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