利用RNA干扰技术治疗中蜂囊状幼虫病新方法取得进展

夏晓翠张冯斌杨勤宏方冲伟冯 栋魏太云周冰峰

（1福建农林大学，福州 350002；2陕西黄龙县养蜂试验站，715700；3陕西延安市养蜂试验站，716000）

中蜂囊状幼虫病自1972年在我国广东省发生后，迅速蔓延至全国的中华蜜蜂主产区，成为饲养的中华蜜蜂毁灭性病害。虽然经40多年人工选育和自然进化，中蜂囊状幼虫病已不再具有毁灭性，但仍是中华蜜蜂饲养最主要的病害。中蜂囊状幼虫病的病原是中蜂囊状幼虫病病毒（Chinese sacbrood virus,CSBV），其感染1～3日龄幼虫，幼虫体内聚集大量的液体和病毒粒体，使其巢房不能封盖，病虫呈尖头状，体颜色由珍珠白色逐渐变为浅黄色。感病幼虫死亡之后，虫体会逐渐变得干枯，形成一个暗褐色如龙船状的鳞片。中蜂囊状幼虫病尚无有效的治疗药物，采用的预防措施主要有选育抗病蜂种，加强蜂群管理等。

RNA干扰（RNA interference,RNAi）是指一种分子生物学上由双链RNA（dsRNA）诱发的基因沉默现象，其机制是通过阻碍特定基因的翻译或转录来抑制基因表达。为解决中蜂囊状幼虫病危害，本研究尝试将RNAi技术应用在中蜂囊状病的治疗，现已取得了理想的结果。在实验室条件下，利用RNAi技术合成中蜂囊状幼虫病病毒同源的特异dsRNA，抑制中蜂囊状幼虫病病毒在虫体内的侵染，该基因药能有效地抑制中华蜜蜂囊状幼虫病病毒。

为了在生产实践中检验此项技术治疗中蜂囊状幼虫病的效果，2014年6～7月，我们在国家蜂产业技术体系延安综合试验站、陕西省黄龙示范县养蜂试验站的支持和配合下，在黄龙县石堡镇庙河村刘长有蜂场和石堡镇杨窑科村王庆华蜂场，通过将中蜂囊状幼虫病病毒同源的特异dsRNA饲喂给自然条件下罹患中华蜜蜂囊状幼虫病的蜂群，开展中蜂囊状幼虫病治疗效果的实验。

将中蜂囊状幼虫病病毒同源的特异dsRNA按3个不同的浓度（低浓度、中浓度和高浓度）饲喂给蜂群作为3个不同的处理组；以未饲喂中蜂囊状幼虫病病毒同源的特异dsRNA的患有中华蜜蜂囊状幼虫病的蜂群为对照组。每个实验组10群中华蜜蜂。

实验结果表明，与对照组相比，除了低浓度组效果不明显外，中浓度组和高浓度组均取得了明显效果。

1.病虫数量减少

对照组病虫数量7天后增加65.82%，14天后增加29.88%，21天后增加35.37%的前提下，与饲喂药物之前对比，中浓度组和高浓度组病虫数7天后分别减少85.03%和87.91%，14天后减少91.44%和94.87%，21天后减少97.33%和99.63%。

2.封盖子数量变化

对照组封盖子数量7天后减少28.12%，14天后减少33.01%，21天后减少44.25%的前提下，与饲喂药物之前对比，7天后中浓度组封盖子数量减少0.49%和高浓度组增加1.71%，14天后分别增加9.56%和20.60%，21天后分别增加23.68%和30.10%。

3.群势增长

对照组群势7天后下降16.67%，14天后下降16.67%，21天后下降27.78%的前提下，与饲喂药物之前对比，中浓度组和高浓度组群势7天后分别增长13.64%和9.09%，14天后分别增长22.73%和27.27%，21天后分别增长40.91%和59.10%。

为了进一步研究该药物疗效的稳定性，我们将进一步深入研究，扩大治疗试的范围。