溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠血清胰高血糖素样肽-2（GLP-2）、白细胞介素-13（IL-13）的影响

范 震 王伟明 张云凌 王汝俊

（黑龙江省中医药科学院·150036）

溃疡性结肠炎（Ulcerative Colitis, UC）是一种原因未明的结肠慢性、非特异性炎症，病变主要累及粘膜及粘膜下层，因缺少理想的治疗药物，且有癌变倾向，属于现代难治性疾病之一。研究表明：在UC病情的发生、发展过程中，同时存在结肠粘膜的炎性损伤及损伤上皮的修复[1]。溃结灵是治疗溃疡性结肠炎的中药复方，临床效果颇佳，本文旨在前期实验研究基础上，探讨中药复方溃结灵对UC模型大鼠血清GLP-2、IL-13表达的影响，现将结果报告如下。

1 材料

1.1 药品

溃结灵（含救必应、水蛭、白术、白芍、炙甘草等中药）浓缩液由广州固志医药科技有限公司制备，批号080321。每1g浓缩液含21g生药，药物用蒸馏水配成1830g生药/L。维柳芬（柳氮磺吡啶，SASP），上海三维制药有限公司，批号：200906005。药物用蒸馏水配成50g/L。

1.2 实验动物

SD大鼠，SPF级，雄性，体重180～220g，由广东省医学实验动物中心提供，合格证号：粤监证字2008A003。

1.3 试剂

三硝基苯磺酸（TNBS，美国Sigma）；大鼠胰高血糖素肽酶-2试剂盒，（上海西唐生物科技有限公司）；IL-13 ELISA试剂盒（武汉博士德试剂公司）

1.4 仪器

3k-20z型高效冷冻离心机，美国sigma公司；A5002型酶标仪Tecan公司

2 方法

2.1 动物分组和UC模型的建立

将32只SD大鼠随机分为四组，每组8只，分别为正常组、模型组、阳性药组（柳氮磺胺吡啶）、溃结灵组。大鼠禁食不禁水24h，乙醚麻醉，将大鼠灌胃针头轻轻从肛门插入，深度为8cm，正常对照组注入等体积的生理盐水0.2mL/100g体重，其余组别分别推入相同容量的TNBS溶液（含2.5%TNBS和50%乙醇），复制溃疡性结肠炎模型，将大鼠肛门捏住倒提5min后将大鼠平放待其自然清醒即可，术后常规饲养[2]。

2.2 给药方法、标本采集

造模后24h，对大鼠进行灌胃治疗。溃结灵组给药剂量为18.3g/Kg，给药体积为10mL/Kg，每日给药1次；SASP组给药剂量为0.5g/Kg，给药体积为10mL/Kg，每日给药1次；正常对照组及模型对照组给等容积蒸馏水，以上均给药10天。末次给药后2小时，各组大鼠禁食不禁水，戊巴比妥钠30mg/Kg，腹腔注射麻醉，腹主动脉采血，血液经3000r.min-1离心10min，分离血清，-20℃保存，

2.3 指标检测

检测程序严格按照试剂说明书进行，采用ELISA法检测血清GLP-2、IL-13水平。

2.4 统计学处理

3 结果

3.1 一般状况

正常组大鼠活泼好动，食欲、体重、大便均正常；模型组大鼠出现精神萎靡，皮毛稀疏，活动量少，进食量少，体重下降，反应迟缓及腹泻、粘液脓血便；溃结灵组及SASP组大鼠上述症状明显改善。

3.2 溃结灵对UC模型大鼠血清GLP-2、L-13表达的影响

与正常对照组比较，模型组大鼠血清GLP-2表达增高（P＜0.05）；与模型组比较，溃结灵组血清GLP-2含量明显增高（P＜0.05）；与正常对照组比较，模型组大鼠血清IL-13表达显著降低（P＜0.01）；与模型组比较，溃结灵组、SASP组血清IL-13表达量明显增高（P＜0.01），结果见表.1。

表1 溃结灵对UC大鼠血清GLP-2、IL-13表达的影响（±s，n=8）

表1 溃结灵对UC大鼠血清GLP-2、IL-13表达的影响（±s，n=8）

注：与正常对照组比较：*P＜0.05；与模型组比较：△P＜0.05

组别动物数（只）剂量（g/Kg）GLP-2（ng/mL）IL-13（pg/mL）正常对照组8等体积水2.34±0.19105.41±8.21模型组8等体积水3.51±0.17*64.43±6.27*SASP组818.33.34±0.20*86.37±6.16*△溃结灵组80.54.08±0.22*△83.35±5.37*△

3 讨论

GLP-2是一种肠道特异性的生长因子，通过与GLP-2受体结合，调节正常小肠的生长、细胞凋亡等，并可剂量依赖性的促进新生仔猪小肠重量、长度及肠绒毛高度的增加[3-5]。研究表明，GLP-2可以增加成年小鼠小肠、大肠湿重，促进肠隐窝细胞增殖[6]。此外，GLP-2可增加UC大鼠体重、减少TNF-α、IL-1β等炎症介质释放、减轻DDS诱导的小鼠UC结肠组织的炎症及黏膜损伤程度[7]。临床试验研究表明，GLP-2可剂量依赖性的提高UC临床缓解率，疗效高于安慰剂组，在UC治疗方面有着广阔的应用前景[8]。

UC发病机制尚不完全明确，Th1/Th2亚群失衡导致结肠粘膜免疫功能异常与UC的发病密切相关。IL-1、TNF-α等多种Th1细胞因子参与了UC的免疫反应和炎症过程。IL-13由Th2细胞产生，是一种抑炎细胞因子，与肠上皮细胞的紧密连接等密切相关。临床研究表明：UC患者结肠粘膜组织中IL-13mRNA表达降低，重度或活动期UC患者血浆IL-13明显低于轻度或静止期患者[9，10]。

溃结灵是脾胃研究所在多年临床经验基础上总结出治疗UC的验方，临床治疗效果良好[11]。该方主要由救必应、白术、白芍等中药组成，具有清热、健脾、活血之功效。前期动物实验研究表明，溃结灵对多种UC模型大鼠有较好的治疗作用，可减轻UC模型大鼠的炎症程度、减少溃疡发生，并具有抗炎、镇痛等药理作用；可降低UC模型大鼠结肠粘膜TNF-α、IL-1β等促炎细胞因子的表达，并可上调结肠损伤后修复密切相关的ITF、EGF等因子有关[12,1]。本研究结果表明，溃结灵可促进UC大鼠血清GLP-2、IL-13表达，即溃结灵既可以通过上调具有黏膜保护作用的GLP-2表达，促进损伤后黏膜的修复，加快其愈合，又可上调抑炎细胞因子IL-13的表达，抑制炎性细胞因子的黏附、聚集，以减少其对结肠粘膜的炎性损伤和破坏。体现了中药多途径、多靶点治疗UC的优势，本研究为溃结灵治疗UC提供了实验依据。

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