新疆北疆地区犊牛球虫感染调查及虫种鉴定

马 玉，乔 军＊，孟庆玲，刘田莉，李清平，张金生，陈创夫

（1.石河子大学动物科技学院，新疆石河子832003；2.昌吉市动物疾病预防控制中心，新疆昌吉831100；3.新疆沙湾县乌兰乌苏镇兽医站，新疆沙湾832100）

牛球虫病（Cattle Coccidiosis）是由艾美耳属（Eimeria）的多种球虫引起的以出血性肠炎为特征的常见寄生虫病，主要发生于犊牛［1］。该病临床表现为腹泻、消瘦、贫血、生长发育缓慢、生产性能下降、免疫力下降等［2］。随着我国奶牛业的快速发展，奶牛感染球虫十分普遍，球虫病病例也屡见报道［3－4］，而集约化养殖为奶牛球虫的大量聚集、传播提供了更多机会，使球虫更容易在不同个体间进行传播，缺乏有效控制可能会导致牛球虫病的暴发，将会给养牛业造成巨大的经济损失。

目前，已全世界报道的牛球虫有19 种，但公认的有15虫种［5］，我国报道的牛球虫确定种有13 虫种，都是艾美耳属球虫，另外有两个等孢属的未定种［6］。其中致病力最强的艾美尔属球虫为邱氏艾美耳球虫、牛艾美耳球虫和椭圆艾美耳球虫，在这几种球虫的感染过程中，可寄生于牛的整个大肠和小肠，严重破坏肠黏膜的完整性，引起奶牛的血痢和消瘦，最终导致死亡［7－8］。近年来，随着新疆奶牛养殖业的快速发展，犊牛腹泻的病例也不断增加。经初步调查，发现对球虫引起的奶牛腹泻重视度不高，常常会将球虫引起的腹泻诊断为细菌性疾病或其他疾病；并且在球虫病的感染中，不同年龄阶段犊牛所感染的球虫种类及感染程度也不同，为此本文对新疆北疆昌吉、石河子、奎屯地区6个大型奶牛场犊牛进行了牛球虫病的调查，旨在掌握新疆北疆地区一岁以内奶牛的球虫感染率及感染种类，为该病的防控措施的制定提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试剂和仪器

显微镜、离心机、载玻片、盖玻片、试管、离心管。饱和盐水（400g食盐加入1 000mL沸水中溶解，冷却后备用）、饱和蔗糖溶液（称500g蔗糖和6.5g石碳酸溶于320mL蒸馏水中即可）、蒸馏水、2.5%重铬酸钾、甘油。

1.2 粪样采集

随机采取新疆昌吉阿什里（Ⅰ）、二六工（Ⅱ）、石河子（Ⅲ）、奎屯130团（Ⅳ）、131团（Ⅴ）、129团（Ⅵ）6个牛场0～6月龄和7～12月龄犊牛的粪便，粪便采集采用直肠取粪法或者直接采集刚排出的新鲜粪便，每头牛采取新鲜粪便50～100g装入干净的一次性聚乙烯手套中，并标记好犊牛编号、月龄与采集日期，置4 ℃冰箱待检。

1.3 检测方法

1.3.1 饱和蔗糖溶液漂浮法 取被检粪便3～5g放入50mL烧杯中，加20mL蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀后经80 目粪筛过滤至50 mL 离心管中，3 000r／min离心10min后弃去上清液，加入30 mL饱和蔗糖溶液，用玻璃棒把粪便沉淀物搅匀后3 000r／min 离心5min，用吸管吸取少量表面液膜于洁净载玻片上，加盖玻片进行镜检。

1.3.2 饱和盐水漂浮法 取被检粪便3～5g放入50mL烧杯中，加20mL 蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀后经80 目滤网过滤至50 mL 离心管中，3 000r／min 离心10min后弃去上清液，加入少量饱和食盐水，用玻璃棒轻轻搅拌后倒入试管中，继续添加饱和盐水，直至试管口形成凸面，将载玻片盖在试管口，静置10min后，取下载玻片，盖上盖玻片，用甘油密封后进行镜检。

1.4 卵囊收集与培养

吸取1mL阳性球虫饱和盐水或饱和蔗糖液表面液膜放入50mL烧杯中，加入蒸馏水10mL均匀搅拌后分装到1.5mL 离心管中，置于离心机中以3000r／min沉淀10 min，弃去上清液，将沉淀吸入盛有2.5%重铬酸钾溶液的培养皿中，室温26～28℃培养7d，在光学显微镜下逐日观察，直至虫卵完全孢子化。

1.5 卵囊形态观察与虫种鉴定

取孢子化后的卵囊液置载玻片，盖上盖玻片，用甘油密封后置于带有测微尺的显微镜下，在10×40倍下观察孢子化卵囊的结构，根据卵囊、孢子囊和子孢子的形态、颜色等，并测量其大小，计算“形状指数（平均长度和平均宽度之比）”。依据文献资料进行虫种鉴定［9－12］。

2 结果

2.1 6个不同奶牛场犊牛感染球虫情况

由表1知，在调查的6个奶牛养殖场中，犊牛球虫阳性总感染率达到35.55%，其中0～6月龄犊牛感染率达42.25%，7～12月龄犊牛感染率达21.74%。昌吉地区阿什里牛场和二六工牛场的感染率分别是28.57%和46.42%，石河子地区牛场的感染率为32.65%，奎屯地区131团牛场、130团牛场和129团牛场的感染率分别是34.38%、41.38%和34.21%。

表1 新疆北疆地区6个奶牛养殖场犊牛球虫感染率Table 1 Infection rates of coccidia among calves of six dairy farms in north Xinjiang%

2.2 不同月龄奶牛球虫感染率情况

在调查的3个地区的211份粪样中，从1月龄内到12月龄的犊牛感染球虫情况分别是53.85%、45.16%、45.45%、40.91%、39.47%、38.89%、33.33%、25.53%、25.00%、25.00%、23.08%、14.29%、0（表2）；0～6月龄犊牛的感染率远远高于7～12月龄犊牛，随着年龄的增长，球虫感染率逐渐降低（图1）。

2.3 球虫种类及孢子化卵囊形态结构特征

邱氏艾美耳球虫（Eimeriazurnii）：卵囊呈亚球形或短椭圆形，大小为13.50～20.00μm×14.50～22.50μm，平均为16.75μm×18.50μm，形状指数为0.93。卵囊壁为2 层，平滑，无色，无卵膜孔和内、外残体（图2A）。孢子囊呈卵圆形或椭圆形，平均大小为7.5μm×10.25μm，子孢子呈细长卵圆状，完成孢子化发育的时间一般为2～4d。

牛艾美耳球虫（Eimeriabovi）：卵囊呈卵圆形，大小为17～23μm×25～32μm，平均为20μm×28.5μm，形状指数为0.7。卵囊壁为2层，无残体和极粒，有卵膜孔（图2B）。孢子囊呈卵圆形或椭圆形，平均大小为6.5μm×13.5μm，有内残体，子孢子呈鱼形，子孢子有折光体，完成孢子化发育的时间一般为3～6d。

表2 不同月龄奶牛感染球虫情况Table 2 Infection rates of coccidia in calves of different age

图1 不同月龄犊牛感染球虫情况Fig.1 Coccidia infection of calves of different age

椭圆艾美耳球虫（Eimeriaellipsoidallis）：卵囊呈椭圆形，大小为12～23μm×20～29μm，平均为17.5μm×24.5μm，形状指数为0.71，卵囊壁有2层，无色且光滑，无卵膜孔，无极粒和内、外残体。孢子囊呈卵圆形或椭圆形，平均大小为6.75μm×13.5 μm（图2C）。完成孢子化发育的时间一般为2～3d。

柱状艾美耳球虫（Eimeriacylindrica）：卵囊呈长圆柱形或椭圆状形，大小为13～17μm×21～23.5 μm，平均为15μm×22.25μm，形状指数为0.67。卵囊壁为2层，光滑、均匀、透明，无卵膜孔，无极帽，无极粒和外残体（图2D）。孢子囊呈长鱼形，平均大小为5.5μm×12.5μm，有内残体，孢子囊钝端有折光体。完成孢子化发育的时间一般为3～4d。

图2 新疆北疆地区犊牛感染球虫种类及孢子化卵囊形态结构特征A.邱氏艾美耳球虫；B.牛艾美尔球虫；C.椭圆艾美尔球虫；D.柱状艾美尔球虫；E.亚球形艾美尔球虫Fig.2 Species infected with coccidia in calves in north Xinjiang and morphological characteristics of sporulated oocystsA.Eimeria zurnii；B.Eimeria bovi；C.Eimeria ellipsoidallis；D.Eimeria cylindrica；E.Eimeria subspherica

亚球形艾美耳球虫（Eimeriasubspherica）：卵囊呈球形或亚球形，大小为10～13μm×11～14 μm，平均为11.5μm×12.5μm，形状指数为0.92。卵囊壁为2层，薄而光滑，均匀、无色、透明，无卵膜孔，无极粒和内、外残体（图2E）。孢子囊呈卵圆形，平均大小为6.5μm×9.5μm，折光体不明显。完成孢子化发育的时间一般为3～4d。

3 讨论

本次对昌吉、石河子、奎屯等3个地区共6个奶牛场犊牛进行了球虫感染调查，结果表明所有的奶牛场均存在球虫感染，表明目前新疆北疆地区的奶牛场犊牛球虫感染也十分普遍，这与国内外其他地区报道的犊牛球虫感染情况类似［13－14］。6个奶牛场的球虫感染率高低不一，主要原因是养殖场的饲养管理与环境存在差异。其中，昌吉二六工的奶牛场和奎屯130团的奶牛场球虫感染率高于其他奶牛场，其原因是饲养场养殖管理不严谨，奶牛活动地面粪尿多，湿度大，适宜球虫卵囊的发育和感染；球虫无法用肉眼直接辨别，饲养员没有直观的认识，对带虫牛和发病牛的诊断有误，不采取防治或盲目防治。而其他4个养殖场饲养空间宽敞，卫生较为严格，通风良好，球虫感染率较低。

本次调查共211头犊牛，球虫阳性总感染率达35.55%。调查结果发现，新疆北疆奶牛场犊牛感染5种艾美尔球虫，分别是牛艾美耳球虫、邱氏艾美耳球虫、椭圆艾美耳球虫、亚球形艾美尔球虫和柱状艾美尔球虫，其中优势虫种为牛艾美耳球虫、邱氏艾美耳球虫和椭圆艾美耳球虫，其他2种球虫所占比例较少，都为混合感染。与江苏省［2］、安徽省［15］、上海市［16］的奶牛球虫的优势虫种相同。调查还发现，从1月龄内到12月龄的奶牛球虫感染率随着月龄的增长感染率呈下降趋势。Levine［17］也提到球虫病主要发生于青年牛和犊牛，成年牛不易感染，出现这种现象的原因可能与牛体年龄抵抗力或幼龄时接触球虫而产生的特异性免疫力有关［6］。

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